中药消毒乳剂灭菌实验研究

赵文嘉，赵 欣，金宏飞，吴品昌

（1.辽宁中医药大学2013级本科生，辽宁 沈阳 110847；2.辽宁中医药大学2014级本科生，辽宁 沈阳 110847；3.辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110847）

许多中药在体外有较强的抗菌抗病毒效果，尤其是一些芳香化湿、清热解毒的中药有广泛的抗菌作用和体内外抗病毒效果。本研究中用苍术等7味中药提取液进行灭菌实验，报道如下。

1 材料与方法

实验仪器。乙醇冷凝回流提取装置、乙醇减压蒸馏回收装置、电热恒温培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、超净工作台（梅州市纪元应用研究所）、高压蒸汽灭菌锅（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、标准恒温水浴、721型分光光度计、真空干燥箱（巩义予华仪器设备有限公司）、EBAl2高速离心机（14000rpm）、30W紫外线灯、手动压力喷壶。

实验药材。苍术、板蓝根、金银花、连翘、广藿香、薄荷、桂枝、天然香料熏衣草精油，均采购自安徽市安国药材公司，经辽宁中医药大学中药实验室鉴定符合用药要求。

实验菌种和培养基。金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、白色念珠球菌，绿脓杆菌，均由辽宁中医药大学生化实验室保存，提供。普通肉汤（琼脂）培养基，主要用于金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌培养。沙保氏（琼脂）培基，主要用于白色念珠菌和乙型溶血性链球菌培养。取对数生长期的各菌液接种于营养琼脂斜面37℃进行24h培养（白色念珠菌28℃进行48h培养）。新鲜细菌培养物，用10g/L蛋白胨磷酸缓冲液洗下菌苔，麦氏计数法计数，将菌液调整至2×106/mL，供实验用［1］。

2 中草药消毒乳剂的制备

中草药有效成分的提取。取苍术、板蓝根、金银花等6味中药，粉碎成20目，按比例配方、混匀，置于5L的圆底烧瓶中，分别加入8倍量水，浸泡6h，煎煮lh，提取3次，合并提取液，浓缩，加入95%乙醇，便加边搅拌使含醇量为70%。减压浓缩，调pH至中性，得浓缩液，制成中草药抗菌剂，备用。广藿香、桂枝采用蒸馏法，提取挥发油，将所得挥发油用无水硫酸钠进行干燥备用。

乳化剂的筛选和制备。选择一定量聚山梨酯-80与山梨醇酐单油酸酯-80按不同比例进行混合作为乳化剂，分别用离心法观察乳化剂的稳定性，比较乳化结果，选择最佳乳化剂。将筛选好的乳化剂加入挥发油中，再次离心，分别用室温储存、低温储存、高温储存方法测试其乳浊液的稳定性［1］。

3 试管法抗菌实验

取一定量消毒乳剂，加入l%氯化钠，再加入二倍量水，加热至沸使其破乳，置冰箱中冷却使其分层，分取水层，加入0.5%聚山梨酯-80，制成等比水溶液作为样品原液。校准pH至7.4～7.6，离心，分装，高压灭菌，冷却后4℃冰箱内保存，备用。试管法抗菌实验结果见表1。1到6号试管中加菌液和消毒原液，并对消毒乳剂进行稀释，第7管不加菌作为药液对照，第8管不加药作为菌液生长情况对照，置37℃温箱中培养24h，观察各管生长情况［2］。

表1 中药消毒乳剂抗菌效果

凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该药物对试验菌的最低抑制浓度见表2［3］。然后分别将未生长菌的培养液再接种于适当的琼脂平板上，如培养后重新长出试验菌，则说明仅有抑菌作用，如没有细菌长出则说明该药有杀菌作用，也可依次找出最小杀菌浓度。

表2 蓝草空气消毒乳抗菌测定结果

4 实验室空间抗菌实验

选择密封良好、容积约1m2的金属消毒柜，控制温度37℃，湿度饱和，以1.5kg/cm2的气压向柜内雾喷菌液10min（喷菌为0.5mL/min），喷菌30min后，以1kg/cm2的气压向柜内雾喷消毒乳剂20min（喷药量为1mL/min），进行灭菌，并同时在一对照组消毒柜内以相同实验条件雾喷含2%乙醇溶液，两组消毒时间均定于消毒前10min，消毒后10min、30min和60min，空气采样3次，对每一菌种进行3次实验。采样以负压从出气孔抽取柜内气体1min，并使生理盐水进行灭菌。采样液经10倍连续稀释后吸取0.1mL接种到普通琼脂平板并用无菌玻璃推子涂匀，待菌液吸收后倒转平板培养24h，计数菌落［4］。

中草药消毒乳剂在喷药后60min，对乙型溶血型链球菌的杀灭率为97.6%，金黄色葡萄球菌的杀灭率为91.8%，对白色念珠球菌的杀灭率为93.7%，对大肠杆菌的杀灭率为55.8%，对绿脓杆菌的杀灭率为90.8%（见表3）。对不同菌株的减少量进行单因素方差分析，结果F=15.22，P＜0.01，说明中草药消毒乳剂对不同菌株的抑菌能力差异非常显著，根据表3中消毒60min后杀灭率数据排序，中草药消毒乳剂对受试各菌株的抑菌能力从高到底依次为：乙型溶血型链球菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌（见表3）［4］。中药消毒成本低、毒副作用小、刺激性小，所以中药消毒乳剂有广阔的应用前景。

表3 中药消毒乳化剂抗菌实验