江西省宜春地区鸡新城疫流行情况调查

朱钱龙，张 鸿，刘 平，曾作财，尧国荣

（江西农业工程职业学院，江西 樟树 331200）

江西省是我国养鸡大省之一，宜春地区为江西的养鸡大区，其养殖量占整个江西养鸡的份额较大。但其养殖水平相对落后，养殖密度过于集中，造成疾病控制的难度加大，各种呼吸道疾病有增无减，特别是像非典型新城疫（ND）［1］这样以呼吸道症状为主、发病率高、死亡率低、使生产性能降低的疾病，其发生给养鸡户造成巨大的经济损失。主要对宜春地区的鸡新城疫在2016年3月—2017年3月的流行情况进行调查，以期为防控该病提供科学的参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：宜春地区樟树、丰城、高安、宜春、万载5个县（市）的疑似患有ND的31个鸡群，其中蛋鸡群16个、肉鸡群15个。SPF种蛋及非免疫鸡均购自济南斯派福瑞禽业科技有限公司。

表1 宜春地区肉鸡养殖场新城疫疑似病例的调查结果

1.1.2 试验仪器：恒温箱、微型振荡器、微量加液器、离心机、96孔U型板及电冰箱、高压蒸汽灭菌器、-80℃超低温冰箱、9700型PCR扩增仪、电泳仪、紫外线透视仪等。

1.1.3 主要试验试剂及生物制品：1%鸡红细胞悬液，为江西农业工程职业学院牧医实验室制备；禽流感（H5、H9）标准阳性血清、EDS-76标准阳性血清、鸡新城疫标准阳性血清、鸡新城疫标准HA抗原，均购自哈尔滨兽医研究所。

1.2 方法

1.2.1 流行情况调查

1.2.1.1 现场问询：通过走访以上5个县（市）的各种规模养鸡场，了解鸡场新城疫的发病情况、鸡场对疫病的防控措施、免疫程序的制定、用药情况等。

1.2.1.2 跟踪调查：在走访的过程中，若遇上发生了新城疫的鸡场，则对其发病的情况（包括发病特征、剖检病变、发病率、死亡率、用药情况等）进行全程的跟踪。

1.2.1.3 病理变化：采用临床症状与病理变化相结合的方法，对发病和死亡的鸡只，进行现场剖检，观察各脏器病理变化。在观察病变时，重点观察呼吸器官和肠道的病理变化。

1.2.2 实验室诊断：对以上5个县（市）31个疑似发生ND的鸡场采样，无菌采集到发病鸡只脑、肺及脾等组织病料共214份。

1.2.2.1 病料的采集与预处理：采集的样品加0.85%的生理盐水研磨制成10倍的组织匀浆，每毫升加入青、链霉素各1 000 IU，作用24 h后5 000 r/min离心20min，取上清液通过0.22 μm细菌滤器滤过除菌，滤液置于－20℃条件下保存备用。

1.2.2.2 病毒的分离：取上述制备好的病料液，接种至9日龄SPF鸡胚的尿囊腔内，每个鸡胚接种0.1 mL，每个样品接种3枚鸡胚，于37.5℃的恒温箱内孵育，每天照蛋2次，弃去24 h内死亡的鸡胚［2］。将24 h后死亡的鸡胚取出立即放入冰箱内，持续观察4 d，将4 d后死亡及没有死亡的鸡胚均放入冰箱内。待最后1枚鸡胚放入冰箱4 h后，取出所有的鸡胚无菌收集尿囊液。

1.2.2.3 血清学试验：参照GB/T 16550—2008《新城疫诊断技术》的标准，将上述采集的鸡胚尿囊液用96孔U型板先进行血凝试验（HA），对于能凝集鸡的红细胞的尿囊液，再进行血凝抑制试验（HI）。对无血凝现象的样品则盲传3代，如仍无血凝现象出现则判断该样品为新城疫病毒阴性样品。

1.2.2.4 禽流感、EDS-76阳性血清中和试验：将以上HA及HI试验初步判定为ND阳性的样品再用禽流感、EDS-76标准阳性血清进行中和试验。结果判定：如果新城疫标准阳性血清能抑制待检鸡胚尿囊液对鸡红细胞的凝集，且不被禽流感、EDS-76标准阳性血清所中和，则说明尿囊液中含有新城疫病毒（即该样品中含有新城疫病毒）。

表2 宜春地区蛋鸡养殖户新城疫疑似病例的调查结果

1.2.2.5 新城疫病毒分离株的毒力测定：参照GB/T 16550—2008《新城疫诊断技术》的标准，将以上经检测为NDV的鸡胚尿囊液进行最小致死量致死鸡胚平均死亡时间 （MDT）、1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉接种致病指数（IVPI）3个指标的试验并计算相应的结果。

1.2.2.6 新城疫病毒分离株的攻毒试验：将330只30日龄非免疫鸡随机分为22组，每组15只，其中21组为试验组，1组为对照组。采用含有经以上试验判定为强毒的NDV分离株的鸡胚尿囊液10倍稀释后每羽肌注0.1 mL进行攻毒试验，每天注意观察3次，连续观察15 d，并记录各鸡只的发病情况及发病后的死亡率。攻毒试验在隔离舍内进行。

2 结果及分析

2.1 宜春地区养鸡户新城疫疑似病例调查结果

宜春地区养鸡户的新城疫疑似病例调查结果见表1及表2。从表1可以看出，宜春地区肉鸡新城疫的发病率为20.1%～29.5%，死亡率为9.0%～24.9%；发病的季节主要在冬季（9/15），其次为春季（4/15），夏、秋季节发病最少（2/15）；发病日龄为8～83日龄。

从表2可以看出，宜春地区蛋鸡的发病率为20.1%～30.8%，死亡率为9.2%～25.4%，产蛋下降率为15.3%～38.8%，发病的季节主要也在冬季（7/16），其次为春季（4/16），夏季（3/16），秋季发病最少（2/16）；发病日龄在182～324日龄。

通过以上的调查结果可以看出，宜春地区鸡新城疫发生频率最高的季节为冬季（16/31），其次为春季（8/31），夏、秋季节（7/31）鸡新城疫发生频率相对更低些。发病鸡只的日龄无差异性，各阶段的鸡只均可发生；鸡群整体发病率为20.1%～30.8%，死亡率为9.0%～25.4%，产蛋下降率为15.3%～38.8%。

2.2 鸡新城疫病毒分离鉴定结果

在31个疑似发生新城疫鸡场的214份病料中，共分离出27株具有血凝性的病毒，其中有2株对鸡红细胞的凝集不能被新城疫阳性血清抑制，另有2株可被禽流感H9阳性血清所抑制，以上毒株的血凝现象均不被EDS-76阳性血清所抑制，结果见表3。

表3 27株血凝性病毒HI试验结果 株

2.3 鸡新城疫病毒毒力测定结果

参照GB/T 16550—2008《新城疫诊断技术》的标准及国内较公认的毒力分类标准 （见表4），以上23株被鉴定为NDV毒株中，除了2株毒力（ZS-06和GA-02）不能确定之外，其余21株均为NDV强毒株（见表5）。

表4 鸡新城疫毒力测定标准

表5 鸡新城疫病毒分离株毒力测定结果

2.4 鸡新城疫病毒强毒株攻毒试验结果

将以上21株已鉴定为强毒的NDV用30日龄非免疫鸡进行攻毒试验，试验结果见表6。由表6可看出，各试验组均有发病，对照组均健康无病，发病率为80%～100%，死亡率为60%～100%，且发病鸡只均出现鸡新城疫感染的典型症状及病变。

3 讨论

宜春地区养鸡场存在着较严重的新城疫病毒感染，且大部分鸡场存在着强毒感染。但由于在发病前几乎所有的鸡场都进行了鸡新城疫的免疫，以急性暴发出现的新城疫较少见，新城疫在大部分鸡场以非典型性的方式出现。据梁华丽等［3］分析，非典型性新城疫出现的原因可能是由于免疫不当，而导致其抗体水平高低不一，当自然野毒进入后，会在新城疫抗体水平低下的鸡体内迅速增殖而引起发病。这也导致了很多鸡场技术人员对该病做出误诊［4］，结果错过了最佳的治疗时间，使疾病得不到及时的控制。

新城疫的传播途径较广泛，除了发病的鸡群排毒外，饲养人员及其他禽类的流动、被污染的设备和饲料、其他带毒动物或昆虫、鸡舍内被污染的空气等都可传播该病。特别是不良的环境卫生条件是引发新城疫的一个重要因素。许多养殖户嫌麻烦，在一批鸡上市后，只对鸡舍及周围环境做简单的打扫或喷洒消毒，而不愿去彻底消毒（有些养殖户根本没有彻底消毒的概念）［5］。结果致使环境中的新城疫病毒没有被彻底杀灭，在下一批鸡进入鸡舍后，就有可能发病。据杨芬侠等［6］分析，若环境被污染后，新城疫病毒的数量过多，往往会突破鸡群的免疫力而引起轻重不一的发病症状。

易感性高的鸡不断增多也可能是宜春地区近期新城疫流行的一个重要因素。调查发现，各养鸡户对鸡只的管理较粗放，且在调查期间气温变化较大，养殖户没有及时做好防寒及防暑工作（笔者在调查过程中发现很多鸡舍均无防寒保暖及防暑降温的相应设施），致使鸡只易发生中暑或感冒等疾病，必然导致鸡体的抵抗力下降，若此时环境中存在新城疫病毒，则鸡只必然会因感染新城疫病毒而发病。同时在被调查的鸡场还发现有些养殖户为了节省成本，采用自配的饲料喂鸡，但其饲料配方中一些必需的维生素、微量元素及蛋白质等营养物质与需要量相差较大，造成了营养不良［7］，因此也增加了鸡群对新城疫的易感性。

表6 鸡新城疫病毒分离强毒株攻毒试验结果