车前草根茎叶中熊果酸含量的测定

陈亚滨 石美霞 杨 驰

(韩山师范学院化学与环境工程学院，广东 潮州 521041)

车前草，又名车前、车轮草等。常产于中国多省地，生于草地、沟边、河岸湿地、田边、路旁或村边空旷处，海拔3～3200米。朝鲜、俄罗斯(远东)、日本、尼泊尔、马来西亚、印度尼西亚也有分布。车前草为传统药草，味甘，性寒。具有利尿、清热、明目、祛痰等药理作用的功效。车前草中主要有效成分是熊果酸、车前普、桃叶珊瑚普等。

熊果酸，又称乌苏酸，具特殊的气味，是存在于天然植物中的一种五环三萜类化合物。研究表明，熊果酸具有较强的抗肿瘤活性。它不仅对多种致癌、促癌物有抵抗作用，而且对多种恶性肿瘤细胞有抑制生长作用。同时它还具有抗突变、抗氧化和诱导癌细胞分化及增强细胞免疫功能等方面的作用。

因此，为了更好地研究车前草中根茎叶熊果酸的含量以及各部位抗肿瘤活性的能力，将采用醇凝提析法进行研究。醇凝提析法，利用的是某物质能溶于乙醇而不溶于水的性质，由于乙醇能与任意比例水互溶，因此当向某物质的乙醇溶液加入大量水时，由于乙醇都溶于水中了而使某物质从水-乙醇溶液中大量析出，析出物可从水-乙醇溶液中分离出来。

1 材料与仪器

1.1 材料试剂

车前草，采摘于潮州市湘桥区的乡村小路旁。

无水乙醇、蒸馏水。

1.2 仪器设备

紫外可见分光光度计、超声波提取器Waters-515型双泵高效液相色谱仪。

2 实验方法①

2.1 实验步骤

2.1.1 车前草样品的准备

将采摘的车前草洗净晒干，将根茎叶部分分别剪碎，磨成粉末，配置成溶液，分别命名为车前草根标液、车前草茎标液、车前草叶标液。

2.1.2 标准品溶液的制备

精密称取熊果酸标准品10.0mg，定容至100ml容量瓶中，即得0.100mg/ml熊果酸标准品溶液。

2.1.3 以蒸馏水为参比液，分别测定熊果酸标准品溶液、车前草根标液、车前草茎标液、车前草叶标液在波长500～600nm范围内的吸光度值，记录数据，做出曲线。

表1 熊果酸标准品溶液吸光度

图1 标样熊果酸

波长/nm500510520530540542544548550560D叶0.0140.0180.0220.0230.0240.0240.0250.0270.0230.023D茎0.0230.0270.030.0320.0330.0340.0360.0370.0350.032D根0.0730.0760.080.0810.0820.0850.0860.0880.0840.083D叶570580590600D茎0.0230.0220.0220.021D根0.030.0260.0250.024D叶0.0810.0760.0730.07

图2 根茎叶吸光度

通过对比分析可知，车前草叶的熊果酸含量最多，茎含量最少。

3 实验方法②

高效液相色谱法：

3.1 色谱条件

色谱柱为C，q ODS柱(46imn×150min)，柱温40。流动相为甲醇—0.4%。

3.2 标准曲线的绘制

准确称取熊果酸对照品2.85mg，定容至25ml量瓶中，摇匀。配成浓度为0.1206mg/ml的对照品溶液。

分别进样上述浓度为0.1206mg/ml的熊果酸对照品溶液4mg、8mg、12mg、16mg、20mg，记录峰面积。以熊果酸进样质量的自然对数为横坐标。峰面积的自然对数为纵坐标绘制标准曲线.得回归方程：

Y=1.20×105X+1.44×104，r=0.9999结果表明熊果酸在4.4～21mg之间时，线性关系良好。

图3 对照品溶液的HPLC谱图

3.3 稳定性实验

精密吸取车前草样品溶液，每隔2h进样测定1次。重复测定5次。测定持续13h记录熊果酸的峰面积，测定含量结果样品溶液在13h内测定，稳定性良好。

3.4 精密度实验

精密吸取车前草样品溶液进样分析，lOL进样，重复5次，测得熊果酸峰面积RSD为1.22%(n=5)。

3.5 重现性试验

精密称取同一批样品5份，吸取lOL进样分析，结果熊果酸平均含量为93.56%，RSD为1.08%(n=5)。

两种实验方法均表明，车前草各部分熊果酸的不同含量中，叶的熊果酸含量最多，茎含量最少。

4 结论

车前草根茎叶中均含有熊果酸，且叶的熊果酸含量最多，根部其次，茎含量最少。因此，我们就可以推知，在药用方面，车前草的叶是最有价值的。值得我们去研究开发的。