高效液相色谱法测定口腔溃疡含漱液中苯甲醇含量的样品前处理优化

冯珊 汤智 黄敏菊 陈颖 广东省医疗器械质量监督检验所 （广东 广州 510663）

内容提要： 利用盐析反应排除口腔溃疡含漱液成分对苯甲醇检测的干扰，优化了检测方法中的样品前处理条件，检测方法相关系数是0.9999，线性范围0.025～2.0mg/mL，回收率为98.2%～103.2%，专属性强，重复性好。

口腔溃疡是一种常见的发生于口腔黏膜的溃疡性损伤病症。在治疗口腔方法中，当以含漱液的应用最为广泛。口腔含漱液以纯水作为溶剂，包括甘油、苯甲醇、糖精钠等多种抗菌药混合而成。其中苯甲醇具有局部麻醉作用，使用过量会导致不良反应，所以在生产中必须严格控制其用量。

在中国药典2015年版本中，测定苯甲醇含量使用滴定法[1]。有学者根据滴定法的不足，在滴定法的基础上参考了相关文献建立了高效液相色谱法来用测定苯甲醇含量[2]。但口腔溃疡含漱液组成复杂，实际检测中发现，苯甲醇含量检测受到干扰，回收率较低。鉴于此，本文在实验中优化了高效液相色谱法检测口腔溃疡含漱液中苯甲醇的前处理条件，利用盐析反应排除口腔溃疡含漱液中其他成份对苯甲醇的干扰，准确测定口腔溃疡含漱液中苯甲醇的含量。

1.仪器与试剂

高效液相色谱仪（日本岛津，LC-20A）；分析天平，精度0.1mg，北京赛多利斯仪器有限公司；低速台式离心机，上海安亭科学仪器厂；纯水/超纯水系统，Merck Millipore有限公司。

苯甲醇标准品（Dr.Ehrenstorfer GmbH，Lot:105534）；口腔溃疡含漱液（主要成分：纯化水、卡波姆均聚物A、甘油、糖精钠、磷酸、柠檬酸、苯甲醇、氢氧化钾、聚山梨醇酯60）。

2.方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil®ODS-SP，5µm，4.6mm×250mm；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（pH=7.0）：甲醇=40:60；流速：1.0mL/min；柱温：40˚C；检测波长：257nm；进样量：10µL。

2.2 方法优化前回收率检测

取口腔溃疡含漱液空白辅料加标后，做方法回收率，回收率为23.11%～26.38%。考虑对样品进行前处理条件优化，排除其他成分对检测的干扰。

2.3 样品前处理

取口腔溃疡含漱液1g，精密称定，置25mL量瓶中，加稀释剂（水∶甲醇=40:60）适量振摇使溶解，加入1mL饱和NaCl溶液振摇，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。取溶液适量，置离心机上5000r/min离心10min，取上清液，作为供试品溶液。

2.4 方法学验证

图1. 苯甲醇变化图

专属性：苯甲醇标准品保留时间3.993min，样品无干扰；0.1～2.0mg/mL的线性回归方程Y=781057X–3961，R2=0.9999；检测限为0.025mg/mL；精密度：0.12%；中间精密度：0.28%；回收率为98.21%～103.15%；理论塔板数：5600～8167；分离度：2.447～4.932；拖尾因子：1.263～1.362。见图1。

2.5 样品含量测定

测得口腔溃疡含漱液中苯甲醇含量为1.52%，符合其实际标称值。

3.小结

通过前后对比可见，未经前处理的加标样品所测回收率不符合方法验证学要求。样品前处理过程中，加入饱和NaCl溶液离心后出现少量白色沉淀，这属于盐析反应，经过该过程，排除了其他成分对苯甲醇检测的干扰。方法优化前后测试对比验证了样品前处理的必要性，因此，建议用高效液相色谱法检测相关产品时注意选择合理的样品前处理条件，尽可能准确测定出物质的真实含量。