PCR技术在乙肝病毒DNA定量检测中的应用效果及临床治疗指导价值研究

赵梅

HBV属于是一种DNA病毒。文献报道显示：HBV仅对人与猩猩具有易感性, 感染后容易引起乙型病毒性肝炎性疾病, 临床表现为乏力、畏食、恶心、腹胀及肝区疼痛等。对于病情严重者将伴有慢性肝病面容、肝掌、肝功能持续异常等, 影响患者健康及生活。HBV具有传播广、危害性大的特点容易形成持续性带病毒状态转变为慢性感染, 少数患者甚至转变为肝硬化、肝癌等［1］。因此, 加强HBV-DNA定量检测对指导临床治疗、改善患者预后具有重要的意义。本课题以2015年5月～2017年12月入院治疗的乙型肝炎患者270例,抽取血清标本270份作为对象, 探讨PCR技术在HBV-DNA定量检测中的应用效果及临床治疗指导价值, 报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2015年5月～2017年12月入院治疗的乙型肝炎患者270例, 抽取血清标本270份, 男153例,女 117 例 , 年 龄 23～52 岁 , 平 均年龄 (34.29±6.61)岁 , 病 程1～10年, 平均病程(4.57±2.21)年。纳入标准：①符合中华医学会传染病与寄生虫病学分会中2000年乙型肝炎病毒诊断标准；②均能遵循医嘱完成相关检查、治疗者。排除标准：①合并心、肾功能异常或伴有明显精神异常者；②合并恶性肿瘤或预计生存期＜3个月者［2］；③合并高血压、糖尿病及慢性阻塞性肺疾病等慢性疾病者。本课题在医院伦理委员会批准下进行, 患者及家属对检查方案签署同意书。

1.2 方法 采用酶联免疫吸附试验完成患者血清学标志HBV-M测定, 根据两对半测定结果将患者分为大三阳组、小三阳组、HBsAg+和HBcAb+组、HBsAb+组、HBeAb+和HBcAb+组、两对半阴性组, 采用实时荧光PCR技术完成血清标本DNA定量测定。①标本采集。患者入院后次日早晨空腹取静脉血3 ml, 完成血清分离后15 min离心, 速度4500 rpm,完成血清分离后放置在-20℃冰箱中备用。采用酶联免疫吸附试验完成患者血清学标志HBV-M测定, 有关操作严格遵循仪器操作说明书完成［3］。②血清标本DNA定量测定。采用实时荧光PCR技术完成血清标本DNA定量测定, 取PCR反应试管放置在PCR扩增仪上, 循环操作设定如下：37℃下5 min、94℃下1 min、95℃下5 s、60℃下30 s, 连续进行42个循环, 记录并统计HBV-DNA定量参数。对于HBVDNA＞500 copies/ml为复制标本, 以拷贝数＜1.0×103copies/ml视为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。p＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

270例患者均顺利完成PCR技术对于异性病毒DNA定量的检测, 患者中大三阳57例, 小三阳55例, HBsAg+和HBcAb+39例, HBsAb+40例, HBeAb+和HBcAb+33例, 两对半均阴性46例。大三阳组HBV-DNA阳性率及定量均高于小三阳组、HBsAg+和HBcAb+组、HBsAb+组、HBeAb+和HBcAb+组、两对半阴性组, 差异有统计学意义(p＜0.05)；小三阳组HBV-DNA阳性率及定量均高于HBsAg+和HBcAb+组、HBsAb+组、HBeAb+和HBcAb+组、两对半阴性组, 差异有统计学意义 (p＜0.05)；HBsAb+组、HBeAb+和HBcAb+组、两对半阴性组HBV-DNA阳性率及定量比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 6组乙肝患者HBV-DNA阳性率及定量比较

表1 6组乙肝患者HBV-DNA阳性率及定量比较

注：与大三阳组比较, ap＜0.05;与小三阳组比较, bp＜0.05

组别 例数 HBV-DNA阳性 PCR定量检测(copies/ml)大三阳组 57 56 (3.24±0.94)×107小三阳组 55 36a (4.55±1.35)×105a HBsAg+ 和 HBcAb+ 组 39 12ab (3.94±1.11)×104ab HBsAb+ 组 40 3ab (5.23±0.57)×103ab HBeAb+ 和 HBcAb+ 组 33 3ab (3.26±0.73)×104ab两对半阴性组 46 1ab (2.12±0.32)×104ab

3 讨论

HBV诱因较多, 包括：家族性传播、婴幼儿期病毒感染、缺乏预防意识、漏诊及免疫功能低下者感染病毒等, 容易诱发乙型肝炎, 而乙肝两对半测定能为临床HBV感染诊断提供更加快捷的诊断依据［4］。但是, 仅依靠乙肝两对半并不能充分反映患者HBV感染状态, 尤其是对于肝功能正常但是存在HBV复制者［5］。近年来, PCR技术在HBV测定中得到应用, 且效果理想。本研究中, 270例患者均顺利完成PCR技术对于异性病毒DNA定量的检测, 患者中大三阳57例,小三阳55例, HBsAg+和HBcAb+39例, HBsAb+40例,HBeAb+和HBcAb+33例, 两 对半均阴性46例。大三阳组HBV-DNA阳性率及定量均高于小三阳组、HBsAg+和HBcAb+组、HBsAb+组、HBeAb+和HBcAb+组、两对半阴性组, 差异有统计学意义(p＜0.05)；小三阳组HBV-DNA阳性率及定量均高于HBsAg+和HBcAb+组、HBsAb+组、HBeAb+和HBcAb+组、两对半阴性组, 差异有统计学意义(p＜0.05)；HBsAb+组、HBeAb+和HBcAb+组、两对半阴性组HBVDNA阳性率及定量比较差异无统计学意义(P＞0.05)。由此看出利用PCR技术能了解HBV-DNA测定情况, 有助于指导临床治疗［6］。PCR技术是目前血清HBV-DNA检测中常用的分子生物学方法, 具有较高的检测重复性, 并且该方法还能有效的解决抗病毒药物疗效观察的难题［7,8］。患者采用PCR检测时除了加入普通的荧光物质外, 使用了荧光探针, 仪器能自动完成病毒量的检测, 实现整个PCR的动态监测［9,10］。临床上将PCR技术用于HBV-DNA定量检测中效果理想, 有助于评估患者预后, 指导临床治疗, 并且联合使用乙肝两对半能发挥两种检测方法的协同作用, 评估患者疾病严重治疗, 促进患者早期恢复。

综上所述, 将PCR技术用于HBV-DNA定量检测中效果理想, 能帮助患者确诊, 有助于指导临床治疗, 值得推广应用。