他克莫司治疗膜性肾病患者T 淋巴细胞亚群及尿蛋白的变化

应萍，杨建秋，侯雄军，何桂林，刘利民，胡建新

(江西省人民医院药剂科，南昌 330008)

膜性肾病是因免疫复合物在肾小球基底膜沉积，激发免疫反应，造成基底膜免疫损伤，出现蛋白尿和肾功能损害。细胞免疫是膜性肾病主要发病机制之一，T淋巴细胞亚群异常广泛存在膜性肾病患者中。膜性肾病的治疗主要是激素＋免疫抑制剂。激素＋他克莫司治疗膜性肾病，患者异常的T淋巴细胞亚群有何改变，与尿蛋白的减少有何相关性，尚未见报道。我们选取了20例膜性肾病患者，给予激素＋他克莫司治疗，检测了不同时期的尿蛋白和T淋巴细胞亚群，现报告如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料 2014年3月-2016年3月临床诊断为原发性肾病综合征肾穿刺检查结果为膜性肾病未使用激素或免疫抑制剂的患者20例，平均年龄（43±17.5）岁，男：女=14：6，无严重心、脑、肺、肝疾病及精神异常。

1.2 方法 所有患者均采用标准剂量激素甲泼尼松龙（1mg/kg/d）＋他克莫司（0.025mg/kg/d）治疗（激素大剂量使用8周后减量，他克莫司维持血药浓度5-10ng/ml），并辅以抗血小板聚集 （潘生丁50mg，一天3次）、抗凝（低分子肝素钠5000U皮下注射一天1次，疗程7-10d）及对症治疗。T淋巴细胞亚群检测：取100μl EDTA抗凝全血加入流式专用管中，再分别加入鼠抗人CD4、CD8荧光标记的单克隆抗体各20μl，每种抗体均做一管相应的同型对照，充分混匀，4℃避光孵育15min。孵育结束后，加入1ml预冷的0.1%BSA/PBS缓冲液，1500r/min，离心5min，离心结束后，弃去上清液，用剩余的100μl左右液体重悬细胞。再次加入预冷的0.1%BSA/PBS 缓冲液，1500r/min，离心 5min，离心结束后，弃去上清液，加入400μl的1%多聚甲醛固定液4℃避光保存，24h内上机检测。上述制备的标本使用美国BD公FACSCalibur流式细胞仪进行检测，结果采用Cell Quest软件进行分析。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件包进行资料分析。计量资料以（）表示，组间两两比较采用独立样本t检验。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

患者治疗前存在着T淋巴细胞亚群异常，与健康对照组比，CD4＋升高，CD8＋降低，CD4＋/CD8＋比例升高；治疗1个月后，尿蛋白明显减少，T淋巴细胞亚群的异常无明显改善；治疗3个月后尿蛋白减少，T淋巴细胞亚群的异常明显改善，与健康对照组比较无明显差异（结果见表1）。

3 讨论

T淋巴细胞来源于骨髓干细胞，在胸腺中发育和分化。在分化成熟的不同时期，细胞表面可以表达各种膜蛋白，经过两次选择，T淋巴细胞分化为CD4＋T淋巴细胞或CD8＋T淋巴细胞，随血流进入外周血或外周免疫器官，发挥抗原识别、介导免疫应答并参与免疫调节的作用。正常状态下各T淋巴细胞亚群均维持一定的比例，尤其是CD4＋/CD8＋的比值相当稳定，两者的平衡是机体发挥正常免疫功能的关键因素。1982年Cagnoli等[1]观察到膜性肾病患者CD4＋/CD8＋比值较健康对照组显著升高，其中表现为肾病综合征的患者该比值升高更为显著。随着肾病的临床缓解，CD4＋/CD8＋比值逐渐下降。有多个研究[2，3]均验证了上述结果。Frank 等[4]报道肾综患者体内CD8＋T淋巴细胞较正常人增加，CD4＋/CD8＋比值降低。 国内丁楠等[5]也提出，患者CD4＋降低、CD8＋升高，CD4＋/CD8＋比值降低。 说明在膜性肾病的发病中存在T淋巴细胞亚群失衡导致的免疫功能紊乱，免疫活跃程度整体较高。

表1 不同时期患者T淋巴细胞亚群及尿蛋白、血浆白蛋白、总胆固醇

我们的结果显示膜性肾病患者存在大量蛋白尿和明显T细胞亚群的异常，CD4＋明显提高，CD8＋降低，CD4＋/CD8＋明显提高，说明患者免疫异常活跃，与多数文献报道一致[1-3]。激素＋他克莫司治疗一个月后，尿蛋白减少、血浆白蛋白升高、总胆固醇降低，但T淋巴细胞亚群的异常无明显改善，和治疗前比较无差异性。说明激素＋他克莫司治疗短时间内可减少患者尿蛋白，但患者的免疫异常没有得到明显改善，两者没有相关性，提示我们不能仅凭临床尿蛋白的减少来判断治疗效果，改变他克莫司用量。治疗3个月后，患者尿蛋白减少、血浆白蛋白升高、总胆固醇降低，T淋巴细胞亚群的异常明显改善，与正常对照比无明显差异性。

总之，激素＋他克莫司治疗膜性肾病短时间可减少尿蛋白、升高血浆白蛋白、降低总胆固醇，但不能改善患者的免疫异常，T淋巴细胞亚群可以作为临床治疗效果的一个判断依据。随着治疗时间的延长，3个月后，患者尿蛋白和T淋巴细胞亚群同时改善，所以激素＋他克莫司的治疗提倡长程、足量，以减少病情复发。