胸腺肽对脓毒症患者淋巴细胞凋亡及临床疗效的影响＊

杨蕙文，喻秋平，叶兴文，刘松，赵鑫

(九江学院附属医院ICU，九江 332000)

研究认为[1]，脓毒症患者存在不同程度的免疫功能受损或免疫抑制，患者外周血T淋巴细胞凋亡程度与脓毒症严重程度及预后密切相关[2-4]。胸腺肽α1能够增强T淋巴细胞对抗原的反应、改善细胞线粒体代谢、维持机体的免疫平衡，所以广泛应用于免疫缺陷和免疫损伤患者的临床治疗[5]。但其是否对脓毒症患者淋巴细胞的凋亡也起着重要的作用，未有进一步的研究报道。本研究拟通过对脓毒症患者早期应用胸腺肽，探讨其对患者T淋巴细胞凋亡以及临床疗效的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 根据Sepsis3.0定义标准，选取符合要求的2016年5月-2017年6月在我院重症医学科（ICU）住院的62例脓毒症患者。其中基础疾病构成：肺部感染35例，腹腔感染18例，皮肤软组织感染及颅内感染等9例。排除标准：合并恶性肿瘤及自身免疫系统疾病患者；半年内使用免疫抑制剂患者或有器官移植史；血液病；妊娠等疾病。所有入选患者需经医院伦理学会同意，患者及家属签署知情同意。根据随机数字表法随机分为胸腺肽组（n=32例）和常规组（n=30例）。2组患者的年龄、性别比、重量、疾病构成比较，差异无显著意义（P＞0.05），见表 1。

表1 2组患者一般资料比较（）

表1 2组患者一般资料比较（）

组别n疾病构成（肺/腹/其他）59.63±19.27 60.02±19.69年龄（岁）性别比（男/女）重量（kg）胸腺肽组常规组32 30 22/10 20/10 59.37±10.12 60.28±10.33 18/8/6 17/8/5

1.2 治疗方法 根据Sepsis3.0意见，2组患者入院后，常规组按指南要求给予控制感染源、液体复苏、保护重要脏器基本功能、加强营养支持等综合措施。2组患者控制感染使用抗生素等级未有差异，均未进行血液净化治疗。胸腺肽组在常规组治疗的基础上给予胸腺肽1.6mg（注射用胸腺法新，1.6mg/支，海南中和药业有限公司），皮下注射/qd，连续给药7d为1个疗程。

1.3 检测指标

1.3.1 淋巴细胞凋亡检测 分别抽取2组患者入院时及治疗第3、7d静脉血10ml，分离淋巴细胞，采用Annexin V/PI双染法，利用流式细胞仪（FACS CantoⅡTM，美国BD公司）检测2组患者以上各时点淋巴细胞凋亡率。

1.3.2 淋巴细胞亚群检测 抽取2组患者入院时及治疗后第3、7d空腹静脉血5ml，采用流式细胞仪（FACS CantoⅡTM，美国BD公司）检测2组患者各时点外周血T淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+）水平。

1.3.3 肝肾功能检测及APACHEII评分 抽取空腹静脉血，利用Beckman Coulter LX-20大型全自动生化分析仪检测入院时及治疗7d后2组患者肝肾功能（丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶 （AST）、总胆红素 （TBiL）以及尿素氮（BUN）、肌酐（Cr））；同时计算 2 组患者治疗入院时及治疗7d急性生理与慢性健康评分（APACHEII评分）。

1.3.4 计算2组患者ICU住院天数以及28d死亡率。

1.4 统计学处理 2组患者所有实验数据均采用SPSS 20.0软件进行分析处理，计量资料用均数±标准差（）表示，所获组间、组内实验数据比较采用配对t检验及独立样本的t检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 淋巴细胞凋亡率比较 2组患者治疗后各时点淋巴细胞凋亡率均较治疗前下降，治疗7d后下降明显。治疗3d后2组患者比较，胸腺肽组淋巴细胞凋亡率与常规组比较，差异无统计学意义 （P＞0.05）。治疗7d后胸腺肽组外周血淋巴细胞的凋亡率相较于于常规组有所下降，差异有统计学意义(P＜0.01)，见表 2。

表2 2组患者淋巴细胞凋亡率比较（）

表2 2组患者淋巴细胞凋亡率比较（）

注：二组患者比较，*P＜0.05，#P＜0.01。

组别胸腺肽组n 淋巴细胞凋亡（%）26.87±3.21 20.63±3.12 12.33±3.67#27.12±3.35 23.32±3.09 18.78±1.45 32常规组30入院时治疗3d治疗7d入院时治疗3d治疗7d

2.2 淋巴细胞亚群比较 2组患者治疗后各时点淋巴细胞亚群CD4+水平均较治疗前升高，CD8+水平均较治疗前降低。治疗3d后2组患者比较，胸腺肽组淋巴细胞（CD4+、CD8+）水平与常规组无明显差别，差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗7d后胸腺肽组患者淋巴细胞CD4+水平显著高于常规组，差异有统计学意义(P＜0.01)；CD8+水平低于常规组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表 3。

表3 2组患者淋巴细胞亚群水平比较（）

表3 2组患者淋巴细胞亚群水平比较（）

注：二组患者比较，*P＜0.05，#P＜0.01。

50.21±4.76 43.34±5.17 30.32±5.56*50.89±4.43 42.65±5.02 43.13±3.82组别胸腺肽组n 32常规组30入院时治疗3d治疗7d入院时治疗3d治疗7d CD4+（%） CD8+（%）40.98±3.98 48.82±3.54 59.53±4.96#41.25±4.09 45.56±3.67 50.32±2.44

2.3 肝肾功能、APACHEII评分以及ICU住院时间比较 2组患者治疗7d后肝肾功能较治疗前均有改善，治疗后2组患者相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 APACHEII评分比较，治疗后 2 组患者均较治疗前下降，治疗7d后胸腺肽组评分低于常规组，差异有统计学意义(P＜0.05)；胸腺肽组 ICU住院时间低于常规组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表 4、5。

2.4 2组患者28d死亡率比较胸腺肽组低于常规组，差异无统计学意(P＞0.05)，见表 6。

3 讨论

脓毒症（sepsis）是ICU常见的急危重症，病死率可达为30%[6-8]。脓毒症的发病机制复杂，涉及病原微生物、机体的免疫功能紊乱等众多方面[20]。普遍认为[9]，过度炎症反应、免疫抑制、淋巴细胞凋亡等共同构成了脓毒症的病理生理过程。T淋巴细胞是人体细胞免疫的重要组分，在参与细胞免疫、免疫调理等方面发挥着重要的作用[20]。研究证实，T淋巴细胞亚群水平的变化能反映机体的免疫状态[10]。Sharma等[11]通过脓毒症小鼠模型，发现其外周血中CD4+淋巴细胞水平下降明显。Chen等[12]通过临床对比研究，发现脓毒症患者CD4+淋巴细胞水平相比健康组显著下降。很多学者对于脓毒症患者T淋巴细胞CD4+亚群水平降低原因也作出了积极的研究。Garrabou等[13]发现脓毒症患者外周血中淋巴细胞凋亡标记物相比健康对照组增加。Li C等[14]进一步研究发现，T淋巴细胞的凋亡可导致CD4+淋巴细胞亚群水平降低。桂海波等[21]研究后认为，由于脓毒症患者T淋巴细胞凋亡增加，致使T淋巴细胞亚群比例发生变化，最终扰乱免疫稳态，引起脓毒症的免疫抑制或免疫麻痹。我们的课题研究同样显示，随着淋巴细胞凋亡增加，CD4+T淋巴细胞亚群水平下降明显。

表4 患者肝肾功能及APACHEII评分比较（）

表4 患者肝肾功能及APACHEII评分比较（）

组别 n胸腺肽组32常规组30入院时治疗7d入院时治疗7d ALT(U/L) AST(U/L) TBiL（umol/L） Cr(umol/L) BUN(mmol/L)121.35±22.36 56.73±12.96 126.87±22.45 59.89±13.07 256.15±12.32 80.63±12.06 260.05±13.01 83.55±12.57 127.12±23.79 54.15±18.61 130.23±24.02 56.78±19.12 153.26±26.33 126.39±18.35 155.02±26.45 128.16±18.62 25.69±3.32 12.75±1.57 26.07±3.44 13.54±1.63

表5 患者APACHEII评分以及ICU住院时间比较（

表5 患者APACHEII评分以及ICU住院时间比较（

注：二组患者比较，*P＜0.05

组别胸腺肽组n 3215.21±3.12*常规组30入院时治疗7d入院时治疗7d APACHEII评分 ICU住院时间22.32±3.28 15.65±4.23*21.97±3.54 18.34±2.89 20.36±5.79

表6 患者28d死亡率比较[n(%)]

近年来，免疫调节治疗对脓毒症的疗效成为临床研究的重点，选择合适的免疫调节剂至关重要。胸腺肽是已知众多的临床免疫调节效应剂之一，它是胸腺组织分泌的具有生理活性的一组多肽，能够调节T淋巴细胞亚群比例，促进T淋巴细胞成熟、分化，从而恢复机体免疫紊乱的功能[15，16]。目前临床上常用的制剂主要成份是胸腺肽a1，它能激活CD4+的辅助免疫作用，从而达到增强细胞免疫功能[17]。目前胸腺肽应用于脓毒症患者的免疫调节治疗，已有研究报道。Liu D等[18]发现，胸腺肽a1可以降低脓毒症患者再次入院率及机械辅助通气时间。Hyun等[19]报道免疫制剂胸腺肽a1与人免疫球蛋白联合治疗可以有效改善机体免疫功能障碍，调节T细胞亚群功能。这些研究都证实胸腺肽对于脓毒症患者而言，能够很好的改善患者的免疫功能，具有一定的临床疗效。

但胸腺肽究竟通过何种机制改善患者的免疫功能，研究较少，而且观点不一。戴凌燕等[20]等研究发现，脓毒症患者应用胸腺肽治疗后，T淋巴细胞的凋亡率显著低于常规综合治疗患者，可以很好的抑制淋巴细胞凋亡。本课题研究中也证实了这一点。本研究显示，随着胸腺肽临床疗程的加强，胸腺肽组淋巴细胞凋亡明显减少，治疗7d后与常规组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。随着T淋巴细胞凋亡的减少，胸腺肽组淋巴细胞CD4+水平明显比入院时明显改善，治疗7d后与常规组比较，CD4+水平显著高于常规组，差异有统计学意义(P＜0.01)。目前APACHEII评分已作为脓毒症患者临床治疗效果的重要观察指标，我们的研究采用APACHEII评分结合常规的肝肾功能评价临床治疗效果，同时利用治疗后肝肾功能的变化评价药物使用的安全性。研究显示，二组患者治疗7d后肝肾功能较治疗前均有改善，治疗后二组患者相比较，差异无统计学意义 （P＞0.05）；二组患者APACHEII评分比较，治疗7d疗程后胸腺肽组APACHEII评分低于常规组，差异有统计学意义(P＜0.05)；胸腺肽组ICU住院时间低于常规组，差异有统计学意义(P＜0.05)，但二组患者28d死亡率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。表明胸腺肽对于脓毒症患者的治疗而言，安全且具有一定的临床疗效。

因此，我们认为，胸腺肽可能通过抑制脓毒症患者淋巴细胞凋亡机制来调节淋巴细胞亚群水平，从而改善患者的免疫抑制状态，在一定程度上提高患者的临床疗效。由于样本限制原因，我们未能就胸腺肽影响脓毒症T淋巴细胞凋亡的具体可能机制作出分析，期待更深层次的研究。