三阴性乳腺癌中P53和Ki67表达情况的相关研究

沈恩超，黄中晶，赵志泓

(江苏大学附属医院甲乳外科，镇江 212001)

三阴性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌的一种类型，是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)以及人类表皮生长因子受体2(HER-2)三者均为阴性的乳腺癌[1，2]。据报道统计TNBC在所有乳腺癌病例中占的比例约为20%。TNBC的组织学分级和恶性程度较高，侵袭性强，容易发生转移，因此具有高复发率、低生存率以及预后差的特点[3，4]。目前临床对于TNBC的患者缺乏行之有效的治疗方案，内分泌治疗以及靶向治疗的效果也不够理想，是临床治疗较为棘手的疾病。有研究认为TNBC与P53、Ki67的表达情况之间存在密切的联系，p53、Ki67的高表达是TNBC的特点之一[5，6]。本次研究收集2014年1月-2017年12月我院确诊收治三阴性乳腺癌以及非三阴性乳腺癌患者的P53和Ki67的表达情况进行相关分析研究，进一步探讨TNBC患者的P53和Ki67的表达情况以及临床意义，为TNBC的治疗提供更多的信息。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2014年1月-2017年12月我院确诊收治的71例三阴性乳腺癌患者作为研究对象，并选取同期确诊的71例非三阴性乳腺癌患者，所有患者均经外科病理或者穿刺病理学确诊组织病理学分级G2-G3，术前均未接受过放化疗以及内分泌治疗。已排除患有精神疾病以及严重脏器功能异常的患者。三阴性乳腺癌组患者年龄29-58岁，平均年龄（43.8±6.5）岁，其中绝经后期 16例，绝经前期 55 例，肿瘤大小（3.9±1.1）cm，其中 TNM分期Ⅰ期19例，Ⅱ期30例，Ⅲ期22例。非三阴性乳腺癌组患者年龄28-57岁，平均年龄（43.5±6.3）岁，其中绝经后期18例，绝经前期53例，肿瘤大小（3.7±1.0）cm，其中TNM分期Ⅰ期18例，Ⅱ期32例，Ⅲ期21例。两组患者的资料比较无统计学差异(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 检测方法 对采集的所有标本采用10%甲醛固定后进行包埋切片，切片厚度约3μm，然后采用免疫组织化学EnVision二步法进行检测。先对标本进行脱蜡水化，然后在pH 6.0的枸橼酸煮沸8-10min并保温10min左右。待其冷却后分别加入福建迈新生物技术开发公司的鼠抗人P53以及Ki67蛋白免疫组织化学单克隆抗体孵育过夜，次日采用PBS冲液冲洗后加入生物素标记的二抗并进行室温孵育20min。接着通过二氨基联苯胺（DAB）显色冲洗后以苏木精复染并封片。以辣根酶标记链霉卵白素代替一抗作为实验的阴性对照，并设阳性对照。由两名资深的病理科医师采用双盲法进行观察切片并根据实验手册的说明进行结果判读：P53阳性细胞比例超过10%即视为阳性（＋），否者为阴性（-）。Ki67阳性细胞的比例低于14%即视为阴性（-），比例在 14%-25%为（＋），比例在 26%-50%为（＋＋），比例超过 50%为（＋＋＋）。

1.3 观察指标 比较P53和Ki67在两组中的表达情况，分析三阴性乳腺癌（TNBC）的P53和Ki67表达水平与患者临床病理学特征的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行统计学分析，计数资料以百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P53和Ki67在三阴性乳腺癌、非三阴性乳腺癌中的表达情况 P53在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌的阳性表达率分别为64.8%（46/71）和28.2%（20/71），Ki67在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌的阳性表达率分别为76.1%（54/71）和32.4%（23/71）。三阴性乳腺癌组的P53和Ki67表达阳性率均明显高于非三阴性乳腺癌组，差异存在统计意义（P＜0.05）。 见表 1。

2.2 TNBC患者的P53、Ki67表达情况与临床病理参数的关系 TNBC患者的P53表达阳性与肿瘤的直径、组织学分级、脉管内癌浸润以及淋巴结转移情况有关(P＜0.05)，与患者的年龄无关（P＞0.05)；而Ki67的表达阳性则与肿瘤的组织学分级有关(P＜0.05)，与患者的其他病理参数无关(P＞0.05)。见表2。3讨论

表1 P53和Ki67在三阴性乳腺癌、非三阴性乳腺癌中的表达情况[n(%)]

表2 TNBC患者的P53、Ki67表达情况与临床病理参数的关系

TNBC在组织形态学以及免疫表型学方面与其他类型的乳腺癌存在较大的差异，其特殊的三阴性以及高度异质性，导致内分泌方面治疗以及HER-2分子靶向治疗效果不佳，临床治疗困难，预后较差，成为目前临床研究的焦点所在[7]。有学者认为P53以及Ki67基因的高表达是TNBC的特点之一，与患者的病情发展、疾病预后存在着紧密关系[8]。P53是一种肿瘤抑制基因包括野生型和突变型两类，它对肿瘤的增殖分化能起到调控的作用，并且还参与肿瘤细胞的凋亡过程，在防止肿瘤发生、消除突变细胞方面担任着重要角色。野生型的P53基因具有抑癌作用，其表达的产物半衰期较短，使用免疫组织化学染色法无法检测到。而发生突变的P53基因则失去了抑癌的功能，还会促进细胞恶化，延迟肿瘤细胞凋亡，其基因产生的产物半衰期明显延长，能够被免疫组织化学染色法所检测到[9，10]。研究发现近60%的乳腺癌患者P53基因有发生突变的风险，而发生P53基因突变的乳腺癌肿瘤组织侵袭性强，容易发生转移，而且对放化疗治疗不敏感，因此多数学者认为P53基因的突变与乳腺癌患者预后不良相关[11]。Ki67是存在于增殖细胞中的一种核抗原，与细胞周期有着密切联系，除了在细胞增殖周期中G0期没有表达，其他时期均有明确表达，临床多用其作为评估细胞增殖活性的标志。目前临床研究表明Ki67在乳腺癌、胃癌等多种恶性肿瘤中的表达水平均大幅度提高，提示Ki67与多种恶性肿瘤的发生、发展及转归有关，对于判断肿瘤的增殖状态和危害程度有重要意义[12，13]。

而在本次研究发现TNBC患者的P53以及Ki67基因均呈现出高水平表达，与非三阴性乳腺癌相比表达阳性明显提高，而且P53表达阳性与TNBC肿瘤大小、组织学分级、脉管浸润以及淋巴结转移有关，Ki67表达阳性与TNBC肿瘤组织学分级有关，表明TNBC患者的P53以及Ki67高表达与肿瘤的恶性程度有关，与管小青等[14，15]的研究结论一致。相信随着临床研究的深入，通过对Ki67及P53蛋白在TNBC中表达以及TNBC的基因谱的进一步探究，有可能会找到潜在的治疗靶点[16-18]，为TNBC治疗提供新的思路。由于时间限制，本次研究没有比较P53以及Ki67高表达在三阴性乳腺癌患者预后方面的影响。

综上，三阴性乳腺癌患者的P53和Ki67的表达阳性情况均有所上调。P53和Ki67表达与肿瘤的恶性程度、增殖能力有关，对于患者的病情判断具有一定的指导意义。