纸片法及B-P平板法定量检测食品中金黄色葡萄球菌的临床对照研究

毛漫漫

（辽宁省辽阳县疾病预防控制中心检验科，辽宁 辽阳 111200）

金黄色葡萄球菌在自然界中普遍存在，是日常生活中最为常见的一种致病菌，特别是在食品中，是引起毒素型食物中毒的主要原因。在人类日常食品中存在的金黄色葡萄球菌数量超出一定范围，可导致食用者有出现发热、腹泻、恶心及呕吐等临床表现，严重者还可导致食用者死亡[1]。本文主要分析了不同检测方法在金黄色葡萄球菌检测方面的应用价值，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料：选择当地市场及超市内的生肉、熟肉制品、生牛奶、豆制品、水产品及糕点各40份作为样品。用B-P培养基、平板计数琼脂、金黄色葡萄球菌快速检验测试片、营养肉汤、BHI（脑心浸液）肉汤、卵黄亚碲酸钾增菌剂、鲜兔血浆、革兰染液与抗凝剂进行试验。试验设备包括无菌工作台、恒温培养箱、显微镜、振荡器、水浴箱、天平、无菌均质杯以及移液枪等。

1.2 方法

1.2.1 样品制备：B-P平板计数法操作内容：在无菌环境下将样品25 g放入无菌均质杯（已提前装入磷酸缓冲稀释液225 mL），转速为每分钟8000 r均质120 s，样品均液为1∶10的固样质量比，使用平板计数实施测定，为了保证测定准确定，每稀释度重复操作2次。

1.2.2 B-P平板法：根据标准SNT0172-2010中进出口食品金黄色葡萄球菌检验方法中的相关内容进行操作，将试验菌过夜培养的肉汤培养物采用生理盐水进行稀释，将合适菌浓度涂布于Baird-Parker平板上，取1 mL进行接种，在接种后48 h对可疑菌落进行挑取，将其置入BHI肉汤中，菌液在各培养基中的浓度为100～1000 cfu/mL，在36 ℃环境下进行24～48 h培养，观察其菌株情况并计数。

1.2.3 纸片法：在上层膜掀开后的测试片正中间使用移液枪将1 mL样品均液垂滴上去，随后缓慢的将上层膜覆盖上，保证接触面内无气泡，并使用压板对压板液进行轻压，确保样品液能在圆形培养面上均匀的覆盖，至少静置1 min待胶体凝固后在14～36 ℃条件下进行培养，培养时间为22～24 h。若无菌落或均为暗紫红色菌落，可视为测试完成。若为黑色或者蓝绿色可疑菌落，可于34～36 ℃环境下继续加入确认反应片，进行1～3 h培养后观察结果。金黄色葡萄球菌全部为暗紫红色菌落；确认片应用后，计数全部有或没有菌落的粉红色晕圈，可视为革兰杆菌或者其他，不进行计数。

1.3 统计学处理：数据资料用SPSS19.5进行统计分析，计量资料用（±s）表示，用t检验；计数资料用（%）表示，用χ2检验，P＜0.05表示有统计学意义。

2 结 果

2.1 两种测定方法金黄色葡萄球菌检出率比较：纸片法金黄色葡萄球菌检出率为31.67%，B-P平板法金黄色葡萄球菌检出率为20.42%，两组数据对比差异显著（χ2=7.886，P=0.000），见表1。

2.2 两种检测方法检测时长、成本及其他指标比较：纸片法与B-P平板法相比，操作度更为简便，计数准确度高、劳动强度小，检测时间较短，但成本高，见表2。

3 讨 论

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），隶属于葡萄球菌属，是人类常见的一种病原菌，抵抗力较强，属于典型的革兰阳性菌。该病原菌对营养要求不高，但耐盐性较高，所以容易造成乳品、水产品以及肉类污染[2]。金黄色葡萄球菌具有很强的致病力，经金黄色葡萄球菌产生的耐热肠毒素可造成食用者出现食物中毒，在细菌性食物中毒总发生率中排第三，仅次于沙门氏菌与副溶血性孤菌造成的食物中毒事件发生率[3]。

表2 两种检测方法检测时长、成本及其他指标比较

表1 对比两种测定方法金黄色葡萄球菌检出情况

B-P平板法、纸片法、MPN计数法及显色培养基计数法等是定量检测食品中金黄色葡萄球菌的主要方法，本文重点分析了B-P平板法、纸片法在食品中金黄色葡萄球菌检测的应用价值。纸片法金黄色葡萄球菌检出率为31.67%，明显高于B-P平板法20.42%的检出率，两数据对比差异显著（P＜0.05）。因B-P平板法需要在接种后48 h对其平板进行观察，并将可疑的菌落转种到BHI肉汤中培养18～24 h后实施血浆凝固酶试验，最后才能计数，所以检测时间较长。而纸片法具有操作简易、计数准确度高、劳动强度小的优势，但具有成本高的特点。除此之外，纸片法在判读期间因为深紫红色菌落和较浅的黑色菌落颜色相近，所以分辨难度大，该类颜色识别错误现象在速度食品及肉类食品中较为常见，需要相关人员紧跟时代进步研发出选择性更强的培养基，从而提高结果判读的准确性，降低试验成本。

综上所述，纸片法检测食品中金黄色葡萄球菌，检出率较高，虽然检测成本高，但具有易于操作、检测时间短、计数准确性高等优势，所以在检测行业具有较高的推广价值。