落新妇超微粉与普通粉的有效成分溶出度及镇痛作用比较研究

周 叶 葛卫红 戴纯辉

1 浙江中医药大学中药饮片有限公司 浙江 杭州 310053 2 浙江省桐庐县邵畹生精神卫生诊所 浙江 桐庐 311500

落新妇，又名红升麻、阴阳虎、金毛三七等，为虎耳草科植物落新妇Astilbechinensis(Maxim.)Franch.et.Sav.或大落新妇Astilbe grandisStapf ex Wils.的干燥根茎。落新妇为浙江省地方习用药材，少数民族特色药材，现收载于《浙江省中药炮制规范》2015版，其性味辛、苦，温，具有活血散瘀、解毒止痛之功效，主要用于治疗跌打损伤、风湿痹痛、积聚疼痛等[1]。现代药理作用研究表明，落新妇具有镇痛、抗炎、抑菌、抗肿瘤以及抗内毒素的作用。对落新妇成分分析结果显示，岩白菜素为其主要成分，也是有效成分，落新妇中岩白菜素的含量可达3%以上[2-7]。

落新妇作为传统中药饮片广泛在中医临床中使用，收到很好的临床疗效。目前临床使用的传统饮片主要为落新妇片、落新妇常规粉等。该项目制备了落新妇超微粉，并与普通粉进行了有效成分溶出度和镇痛比较研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器：BP211D电子分析天平（万分之一、十万分之一）：sartorius；KQ3200DB型不锈钢新型电热恒温水浴锅（嘉兴市中新医疗仪器有限公司）；液相色谱仪：prostar 230（三元泵）、prostar330（二极管阵列检测器）、prostar410（自动进样器）；KromasilC18柱(5μm，4.6mm×150mm)。

1.2 材料：①试药：落新妇，采自浙江建德，经鉴定为虎耳草科植物落新妇Astilbe chinensis(Maxim.)Franch.et.Sav.的干燥根茎；岩白菜素（批号：BCTG-0740）：由中药固体制剂制造技术国家工程研究中心；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。②动物：健康昆明种小鼠，体重18～22g，由浙江省中医药研究院实验动物中心提供。

2 方法与结果

2.1 落新妇普通粉及超微粉的制备：将洗净的落新妇根和根状茎切制成厚片3mm的片子，得到落新妇饮片；将落新妇饮片采用连续投料粉碎机对落新妇饮片进行粉碎5min，以24目进行筛选，将能通过筛孔的筛下组份一部分用普通球磨粉碎机粉碎成细粉，即为普通粉，一部分采用气流粉碎，研磨气压为0.8Mpa，分级轮转速为5500rpm，粉碎时间为3h，粉碎成粒径≤75μm的粉末，得到超微粉。

2.2 有效成分岩白菜素的溶出度比较：分述如下。

2.2.1 色谱条件：色谱柱：KromasilC18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水(20：80)；流速1ml/min；检测波长275nm；柱温：30℃。

2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取岩白菜素对照品10.2mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备：取落新妇超微粉和普通粉(10g原药材制备而成的)加水200ml超声提取30分钟，取出，放冷，精密吸取4ml转移至50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得[8]。

2.2.4 样品检测：吸取上述供试品和对照品溶液各10μl分别进样，测得峰面积，计算含量，结果见表1。由试验结果可知，落新妇超微粉中的有效成分岩白菜素溶出度比普通粉显著提高。

2.3 落新妇超微粉与普通粉镇痛效果比较：分述如下。

2.3.1 药物制备：将落新妇超微粉和普通粉加0.5%的CMC-Na水溶液制成不同浓度的溶液。

表1 普通粉和超微粉溶出度比较

2.3.2 热板法：将恒温水浴箱加热到(55±0.5)℃，烧杯底部接触水面，加热后作为热刺激，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间(s)作为该鼠的痛阈值。在给药前测定每只小鼠的痛阈值，剔除喜跳跃者，以＞10s而＜30s的小鼠为合格。将筛选合格的小鼠(全部为雌性)禁食12h后(不禁水)，随机分为6组，生理盐水(NS)空白对照组给予生理盐水0.5ml/20g；落新妇组0.5ml/20g。给药后45min左右测定痛阈值，按公式计算其痛阈值提高百分率。结果表明，落新妇超微粉和普通粉均能明显提高小鼠的痛阈值（P＜0.01），其中超微粉两个剂量组（2g·kg-1、1g·kg-1）镇痛作用明显优于普通粉组（P＜0.01）。详见表2。

表2 对小鼠热板法痛阈值的影响(±s)

表2 对小鼠热板法痛阈值的影响(±s)

注：与给药前比较，★P＜0.01；与空白组比较，△P＜0.01；与普通粉组比较，□P＜0.01。

组别空白组超微粉组1超微粉组2超微粉组3超微粉组4普通粉组动物数（只）1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0剂量（g·k g-1）0.2 5 0.5 0 1.0 0 2.0 0 2.0 0痛阈值给药前2 1.5 8±0.9 9 2 3.0 1±1.5 5 2 0.5 8±1.2 3 2 2.0 3±0.8 7 2 1.4 5±2.0 0 2 1.2 1±1.7 6给药后2 1.7 7±3.4 5 2 6.2 6±1.2 3★△2 5.1 2±2.6 6★△2 9.9 5±2.2 5★△□3 2.3 7±2.9 8★△□2 6.3 3±1.5 9★△痛阈值提高百分率（%）0.8 8 1 4.4 7 2 2.0 6 3 5.9 5 5 0.9 0 2 4.1 4

2.3.3 扭体法：取雄性小鼠40只，禁食12h后(不禁水)，随机分为6组，分组及剂量同热板法。给药后60min左右，各小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.1ml/10g(醋酸临用前配制)，观察并记录注射醋酸溶液后15min内出现扭体反应的次数(腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部扭转)。

结果表明，不同剂量的落新妇超微粉和普通粉，均能明显减少醋酸所致的小鼠扭体次数（P＜0.01），超微粉三个剂量组（2g·kg-1、1g·kg-1、0.5g·kg-1）的作用明显强于普通粉组（P＜0.01），超微粉0.25g·kg-1剂量组的作用与普通粉组相当。见表3。

表3 对小鼠扭体次数的影响(±s)

表3 对小鼠扭体次数的影响(±s)

注：与空白组比较，★P＜0.01；与普通粉比较，△P＜0.01。

组别空白组超微粉组1超微粉组2超微粉组3超微粉组4普通粉组动物数（只）1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0剂量（g·k g-1）0.2 5 0.5 0 1.0 0 2.0 0 2.0 0扭体次数5 5.6 0±6.6 4 2 8.8 9±5.5 7 2 4.0 2±4.7 4 1 9.2 5±6.3 5 1 5.8 0±7.3 5 2 9.1 2±4.8 9镇痛率（%）4 8.0 4★5 6.8 0★△6 5.3 8★△7 1.5 8★△4 7.6 2★

3 结论

药物粉体颗粒大小与药材有效成分的释放、溶出及吸收密切相关。药材超微粉碎后，其体内有效成分的溶出过程将发生新的变化[9]，有利于药物的释放和吸收，可减少给药剂量和节省原料。因此，近年来超微粉粉碎技术发展十分迅速，得到医药行业的普遍关注和应用。超微粉是原粉经过超微粉碎技术而得，粉碎后的药物粒径为1～75μm，药物破壁率高、溶出速率和生物利用度也较高[10]、胃肠道停留时间延长、吸收快而且更充分。临床应用剂量可降低至原粉剂量的1/2、1/4、1/8，甚至1/16、1/32，可降低临床用药剂量、减少毒副作用、提高疗效和患者依从性[11]。

该研究采用超微粉碎技术，使落新妇粉末的粒径小于75μm，相对于普通粉，超微粉的溶出度明显提高。落新妇超微粉四个剂量组和普通粉都明显减少了热板上小鼠舔足次数和醋酸扭体反应，超微粉三个剂量组（2g·kg-1、1g·kg-1、0.5g·kg-1）镇痛效果优于普通粉。