结直肠癌错配修复蛋白MLH1,PMS2,MSH2和MSH6及P16的表达及意义

彭芳 ，王志 ，王建 ，张功亮 ，钟斌

(1、赣州市人民医院病理科，江西 赣州 341000；2、赣南医学院第一附属医院药剂科，江西 赣州 341000)

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，近年来，结直肠癌的发病率逐年上升，其中有部分结直肠癌是由于错配修复基因突变型失活或错配修复基因甲基化失活[1－7]， 导致微卫星不稳定（MSI）， 从 而 导 致 错 配 修 复 蛋 白 MLH1，PMS2，MSH2及MSH6表达异常。有研究表明P16蛋白表达与结直肠癌的发生发展密切相关[8－13]，P16蛋白表达是结直肠癌患者诊断及预后的候选标志物。以免疫组化的检查方法检查结直肠癌中错配修复蛋白 MLH1，PMS2，MSH2和 MSH6以及 P16蛋白的表达情况，并结合统计学分析，分析其在结直肠癌的表达情况。

1 材料和方法

1．1 病例资料 收集本院2016年1月至2017年10月间原发于结直肠腺癌共60例。其中男性35例，女性25例，年龄28～79岁，平均年龄50岁。肿瘤平均最大径4．6cm，31例呈浸润溃疡型，20例呈隆起菜花型，5例呈平坦型，4例呈浅表溃疡型。肿物切面呈实性，灰白灰红色，质中偏硬，灶性区域伴出血坏死。

1．2 实验材料 免疫组化SP法检测试剂盒及DAB显色剂均购自福建迈新生物技术有限公司。

1．3 免疫组织化学方法 免疫组织化学试剂一抗福建迈新生物技术有限公司生产的MLH1，PMS2，MSH2及MSH6多克隆抗体。检测系统采用福建迈新公司的Elivision试剂盒。石蜡切片厚3微米，60度烤箱烤片1h，二甲苯脱蜡，乙醇水化，浸泡5min，3%过氧化氢室温孵育10min，PBS液冲洗，高压锅修复，并自然冷却。二步法Elivision试剂盒中试剂A，室温孵育 20min，PBS冲洗3次，每次5min，加入试剂 B，孵育 30min，PBS冲洗 3次，每次5min。控制DAB显色，蒸馏水冲洗终止反应。苏木素复染，盐酸酒精分化，返蓝、脱水、透明、中性树胶封片，并做阳性对照和阴性对照。

1．4 免疫组织化学判断的标准 定位准确，呈棕黄色颗粒为阳性，I阳性定位于细胞浆/膜或细胞核，阳性细胞小于10%为 （－），阳性细胞11－25%为（+），阳性细胞 26－50%为（++），阳性细胞 51－75%为（+++），阳性细胞 76－100%为（++++）。

1．5 统计分析方法 实验数据采用SPSS 17．0统计软件进行处理，P＜0．05为差别有统计学意义。

2 实验结果

2．1 免疫组织化学方法检测结直肠腺癌中MLH1，PMS2，MSH2和 MSH6蛋白的表达情况：MMR蛋白的表达缺失率分别为：MLH1缺失率 28．5%，PMS2 缺 失率 25．2%，MSH2 缺 失 率 27．2%，MSH6缺失率27．3%；正常组织中的缺失率分别为：MLH1缺失率 2．5%，PMS2 缺 失 率 3．2%，MSH2 缺 失 率2．2%，MSH6 缺失率 1．9%。 差别具有统计学意义(P＜0．05)，肿瘤组织中MMR蛋白的表达缺失率表达远高于正常组织。见图1。

2．2 免疫组织化学方法检测结直肠腺癌中P16蛋白的表达情况：P16蛋白在结直肠腺癌的表达率为78．3%（47/60）。 高、中分化腺癌中 P16蛋白的表达率为88．3%(53/60），低分化腺癌中P16蛋白的表达率为 15%（9/60）， 差别具有统计学意义 (P＜0．05)，高、中分化腺癌中P16蛋白表达远高于低分化腺癌。见图2。

图1 MLH1蛋白免疫组织化学结果（×400）

图2 P16蛋白免疫组织化学结果（×200）

3 讨论

结直肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，在我国男、女性恶性肿瘤发病率排名中分别列第三位、第二位[1－3]，严重危害人类健康。研究结直肠癌发生、发展的分子遗传学机制，寻找和利用有效的早期诊断、分期、分型以及预后的分子生物学标志物，提高结直肠癌的预防、诊断和治疗水平，对降低结直肠癌的发病率和死亡率有着重要的意义。

近年来，结直肠癌的发病率逐年上升，其中有部分结直肠癌是由于错配修复基因突变型失活或错配修复基因甲基化失活[4－7]，导致微卫星不稳定，从而导致错配修复蛋白 MLH1，PMS2，MSH2及MSH6表达异常。有研究表明P16蛋白表达与结直肠癌的发生发展密切相关[8－15]，P16蛋白表达是结直肠癌患者诊断及预后的候选标志物。本研究以免疫组化的检查方法检查结直肠癌中错配修复蛋白 MLH1，PMS2，MSH2和 MSH6以及 P16蛋白的表达情况，我们的研究发现在结直肠癌中，MMR基因缺失是导致 MLH1，PMS2，MSH2和 MSH6蛋白表达率降低。高、中分化腺癌中P16蛋白表达远高于低分化腺癌，提示P16蛋白可能与结直肠癌的高侵袭性有关。