克林霉素磷酸酯凝胶的制备和质量评价

陈洪波

摘 要：本实验研究克林霉素磷酸酯凝胶的制备方法并建立反相高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯凝胶中克林霉素磷酸酯的含量。方法：采用安捷伦十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（218mm×4.6mm，5μm），0.1mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20），检测波长为210nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。克林霉素磷酸酯在10～50ug·mL-1范围内呈良好的线性关系。克林霉素磷酸酯平均回收率为99.3%。结论：本制剂稳定、可靠，测定方法简便、准确。

关键词：克林霉素磷酸酯；制备；质量

克林霉素磷酸酯化学名称为（2s-反式）-6-（1-甲基-4-丙基-2-吡咯烷碳酰氨基）-1-硫代-甲基-7-氯-6，7，8-三脱氧-L-苏式-α-D-半乳糖吡喃糖苷-2-二氢磷酸酯。克林霉素磷酸酯为化学合成的克林霉素衍生物，它在体外无抗菌活性，进入机体迅速水解为克林霉素发挥抗菌活性。克林霉素磷酸酯具有抑制痤疮丙酸杆菌、颗粒丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等的生长作用。本实验研究克林霉素磷酸酯凝胶的制备方法并建立反相高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯凝胶中克林霉素磷酸酯的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器：电子天平FA1004型（南京华欣分析仪器制造有限公司）；YL9100液相色谱仪（汕头市科毅仪器设备有限公司）；MPC-K6s加热制冷型恒温水浴油浴（北京赛美思仪器设备有限公司）；德国SIGMA小型台式高速（冷冻）离心机（北京博劢行仪器有限公司）；15升超声波清洗器US-15A（中科仪（北京）仪器有限公司）。

1.2 色谱柱：安捷伦 十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（218mm×4.6mm，5μm）。

1.3 对照品：克林霉素磷酸酯 购自中国药品生物制品检定所。

1.4 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

1.5 辅料：卡波姆（江苏省海安石油化工厂）、脂肪醇聚氧乙烯醚（江苏省海安石油化工厂）、依地酸二钠（江苏采薇生物科技有限公司）。

2 制备方法

2.1 处方

克林霉素磷酸酯、卡波姆、三乙醇胺、甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亚硫酸氢钠、依地酸二钠。

2.2 制备

将亚硫酸氢钠、依地酸二钠溶于水中，搅拌下加入卡波姆，克林霉素磷酸酯甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亚硫酸氢钠等，搅拌均匀得药物溶液，分装，即得。

3 质量控制

3.1 性状

本品为透明凝胶。符合《中国药典》2015年版对凝胶的要求。

3.2 含量测定

3.2.1 流动相的选择。0.1mol/L磷酸二氢钾-甲醇-乙腈（70：10：20）， 0.2%三乙胺溶液（用磷酸调pH至5.3）-乙腈（65∶35），甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59），0.1mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）不同比例的流动相，结果以0.1mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）；为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.1mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20）为流动相。依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。流动相：0.1mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调pH2.5）-甲醇-乙腈（70：10：20），检测波长：210nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按克林霉素磷酸酯峰计算应不得低于2000。

3.2.2 对照品溶液的制备

精密称取克林霉素磷酸酯对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含20ug的溶液，即得。

3.2.3 供试品溶液的制备

取适量供试品精密称定，用流动相溶解至10ml容量瓶中并稀释定容，摇匀后，离心5分钟，取上清液，即得。

3.2.4 专属性试验

依照处方取卡波姆、三乙醇胺、甘油、乙醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、亚硫酸氢钠、依地酸二钠等，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照3.2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在克林霉素磷酸酯出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

3.2.5 精密度试验

精密称取克林霉素磷酸酯对照品适量，加甲醇使溶解，制成浓度为20ug·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.58%，表明本方法精密度良好。

3.2.6 对照品的线性考察

精密称取克林霉素磷酸酯对照品10mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照3.2.2项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，克林霉素磷酸酯在10～50μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

3.2.7 重现性试验

称取同一批的克林霉素磷酸酯凝胶样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.83%，结果表明此方法的重现性良好。

3.2.8 准确度试验

精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的克林霉素磷酸酯对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.1%，RSD=0.89%，结果表明样品加样回收率良好。

3.3 微生物限度检查

按照《中国药典》2015年版附录所载方法测定，结果符合规定。

4 讨论

本制剂稳定、可靠，符合中国药典相关规定。此测定方法可用于克林霉素磷酸酯凝胶中克林霉素磷酸酯的含量测定。依照上述含量测定方法，测定克林霉素磷酸酯凝胶三批样品中克林霉素磷酸酯的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.1%、99.6%、99.6%。克林霉素磷酸酯凝胶中克林霉素磷酸酯的含量为标示量的95%-105%。

参考文献

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