山东省某肉鸡场大肠杆菌病的诊断与防治

王仰杰，周 键

（1. 安丘市兴安畜牧兽医管理站，山东安丘 262100；2. 安丘市畜牧局，山东安丘 262100）

肉鸡大肠杆菌病是由禽病原性大肠埃希氏菌引起的一种急性或慢性细菌性传染病[1]。该病菌血清型众多，分布范围较广，表现形式复杂多变，具有较强的地域性，且易导致其他病原的并发感染或继发感染，是危害养鸡业发展的主要细菌性传染病之一[2]。大肠杆菌在自然环境中分布很广，在鸡舍的垫料、饲料、粪便及灰尘中广泛存在，是鸡肠道内常在菌和条件性致病菌，其发生常与鸡舍环境恶劣、空气质量差、饲养密度高、免疫接种不到位、饲料或饮水污染等因素有关，引起的临床症状主要表现为腹泻，还可造成心包炎、肝周炎、脐炎、卵黄囊炎、输卵管炎等。致病性大肠杆菌易产生耐药性，这也是导致目前使用抗生素防治大肠杆菌病效果越来越不理想的主要原因。致病性大肠杆菌具有区域流行性，其致病性在不同地区也存在较大差异，因此加强本地区肉鸡大肠杆菌病的诊断与防治研究具有重要意义。为有效诊断和控制鸡场大肠杆菌病疫情，了解当地肉鸡大肠杆菌的病原学特性及耐药性，采用临床诊断、细菌分离培养、镜检、生化试验等方法，对安丘市某肉鸡养殖场鸡群进行了鸡大肠杆菌病的诊断和菌株耐药分析，以期为当地大肠杆菌病的诊断与防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病例来源 山东省安丘市发生疑似大肠杆菌病疫情的某饲养90 000只罗斯308品种的肉鸡养殖场。该场养殖模式为笼养，采用自动加料、自助饮水、自动出粪方式。

1.1.2 主要试剂 麦康凯培养基、普通琼脂培养基：购自青岛海博生物技术有限公司；细菌微量生化反应管：购自杭州天和微生物试剂有限公司；革兰氏染色液：购自潍坊康华生物技术有限公司；头孢噻呋钠、头孢喹肟、阿莫西林、氟苯尼考、恩诺沙星、新霉素、硫酸粘菌素、多西环素、替米考星：购自天津瑞普生物技术股份有限公司。

1.2 现场调查

到养殖场问询，并到鸡舍实地观察鸡群临床表现，对死亡鸡只进行剖检观察。

1.3 分离培养

将病死鸡剖检，无菌取肝脏在麦康凯培养基上进行三区划线无菌接种，放置37 ℃恒温箱，倒置培养18～24 h后观察菌落形态。挑取可疑单个菌落于普通琼脂平板上进行三区划线纯培养，放置37 ℃恒温箱，培养 18～24 h 后，4 ℃保存备用[3-4]。

1.4 染色镜检

挑取单个细菌涂片，经革兰氏染色，在显微镜下观察菌体形态[5]。

1.5 生化试验

将分离纯化的细菌无菌接种于细菌微量生化反应管（枸橼酸盐酸、靛基质、M-R、V-P）中，然后放入恒温箱，37 ℃培养24～48 h，观察结果[6]。

1.6 药敏试验

采用纸片法，对分离菌株进行7种单一兽用抗菌药物和8种联合抗菌药物的药敏试验，测量抑菌圈大小并记录结果[7]。

1.7 药物治疗试验

利用药敏试验筛选出的敏感药物，对发病鸡群进行药物治疗，每天记录采食量和死淘率。

2 结果与分析

2.1 临床及剖检诊断

3 日龄鸡群发病，采食量偏少，部分鸡只出现闭眼、缩脖等症状，大群均匀度差，发病率为20%，死淘率为5%。剖检10只病鸡，均发现明显的心包炎（图1）、肝周炎（图2）。根据临床及解剖症状，判断为疑似大肠杆菌感染。

图1 病死鸡心包炎症状

2.2 分离鉴定

分离菌在麦康凯培养基上，37 ℃培养 24 h后，可见边缘整齐，稍凸起，表面光滑湿润，直径为1.5～2 mm的粉红色小菌落（图3）。经革兰氏染色后，在油镜下可见大量散在的、卵圆形或杆状、中等大小的细菌。

2.3 生化试验

挑取疑似大肠杆菌菌落，经纯化培养后进行生化鉴定，发现靛基质试验和MR 试验均为阳性，枸橼酸盐酸试验和VP 试验均为阴性，均符合大肠杆菌的生化特性（表1、图4）。

2.4 药敏试验

图2 病死鸡肝周炎症状

图3 分离菌在麦康凯培养基上的生长状态

药敏试验结果表明（表2、图5）：分离出的大肠杆菌对头孢噻呋钠、头孢喹肟，以及“头孢噻呋钠+硫酸粘菌素”“头孢噻呋钠+阿莫西林”“头孢噻呋钠+恩诺沙星”“头孢噻呋钠+新霉素”“替米考星+阿莫西林”“替米考星+头孢噻呋钠”达到了S级敏感。S级敏感比例从高到低依次为头孢喹肟、“头孢噻呋钠+阿莫西林”“头孢噻呋钠+恩诺沙星”、头孢噻呋钠、“头孢噻呋钠+硫酸粘菌素”“头孢噻呋钠+替米考星”“头孢噻呋钠+新霉素”“阿莫西林+替米考星”。

表1 分离菌生化试验鉴定结果

图4 生化试验前后试验结果对比

对新霉素、硫酸粘菌素、“多西环素+氟苯尼考”“替米考星+硫酸粘菌素”达到I级敏感，敏感比例从高到底依次为新霉素、“替米考星+硫酸粘菌素”、硫酸粘菌素、“多西环素+氟苯尼考”。

对氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素达到R级敏感。

2.5 药物治疗试验

根据药敏试验结果，选用头孢噻呋钠对患病鸡群进行饮水治疗，每天1次，用药治疗1 d后，死淘率明显减少，采食量逐渐增加，连续使用4 d，死淘率降为0.2%。

3 讨论

肉鸡大肠杆菌病一年四季均可发生，冬季和夏季多发，饲养管理不当，如养殖密度过大、舍内氨气浓度高、通风不畅、卫生条件差等均可促进该病发生[8]。通过对该肉鸡养殖场的现场调查及询问了解，发现该场的饲养管理存在许多问题，主要表现在养殖密度大、氨气浓度高、养殖用具消毒不彻底等，这是导致大肠杆菌病发生的重要诱因。

药敏试验结果显示，该肉鸡源大肠杆菌对头孢噻呋钠、头孢喹肟等β内酰胺酶类药物表现敏感，因此该类药物应作为肉鸡养殖场今后大肠杆菌病防治的首选药物。该肉鸡源大肠杆菌对新霉素、硫酸粘菌素等药物表现中度敏感，对氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素等药物高度耐药，与李海华等[9]、Tikhonova等[10]的研究结果一致。这与该场不按流程用药，随意加大药物剂量，频繁换药等不合理使用这些药物相关。

表2 药敏试验结果

图5 药敏试验结果

表3 药物治疗结果

为了验证联合用药效果，本研究进行了两种药物联合用药体外药敏试验，并同单一药物使用效果进行了比较，发现大肠杆菌菌株对“头孢噻呋钠+阿莫西林”“头孢噻呋钠+恩诺沙星”的敏感性高于单一药物。同时，将头孢噻呋钠同恩诺沙星、新霉素、硫酸粘菌素、替米考星组成联合用药，将阿莫西林同替米考星组成联合用药，均能达到敏感级别，且比“多西环素+氟苯尼考”“替米考星+硫酸粘菌素”等联合用药敏感性好，说明针对肉鸡大肠杆菌病，选择β内酰胺酶类药物作为必要的抗菌药物，同其他药物联合用药，可达到最好的防治效果。

本试验表明，药敏试验对于大肠杆菌病等细菌病的防治具有积极作用。由于在不同地区、不同鸡只、鸡只不同生长时期的药敏结果不一样，而大肠杆菌极易对抗菌药物产生耐药性，因此应尽可能通过药敏试验筛选敏感药物进行防治。否则，耐药性一旦产生，克隆株不断向外界传播，会导致养殖场内或周边地区耐药性的蔓延扩散[11]。因而，养殖企业应将大肠杆菌纳入监测目标，实时监控其耐药性的产生和发展过程，并根据监测结果，制定科学、合理的防治方案。

4 结论

根据现场观察、临床症状、剖检病理变化及实验室检测结果，最后确诊该病为鸡大肠杆菌病。分离的大肠杆菌菌株对头孢噻呋钠、头孢喹肟等β内酰胺酶类药物表现敏感，因此该类药物应作为该肉鸡养殖场大肠杆菌病防治的首选药物。该菌对新霉素、硫酸粘菌素等中度敏感，对氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素等高度耐药，说明养殖场需要科学合理使用抗菌药物，避免长期使用单一药物，可采取联合用药、轮换用药、交叉用药等多种方式。通过药敏试验筛选敏感药物，对于鸡大肠杆菌病的防治具有积极作用。