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加速溶剂萃取/液相色谱-串联质谱测定底泥中氯硝柳胺及其降解产物

2018-08-02廖且根张大文罗林广

分析测试学报 2018年7期
关键词:溶剂萃取底泥氧化铝

廖且根,张大文,罗林广

(江西省农业科学院 农产品质量安全与标准研究所,江西 南昌 330200)

氯硝柳胺作为WHO推荐使用的杀螺药,可用于灭杀水生环境中尾蚴阶段血吸虫[1],以及血吸虫的载体如钉螺[2]、斑马贻贝[3]和福寿螺[4]。此外,氯硝柳胺可以杀死能捕食鱼苗的鱼,在水和光照条件下能自发降解[5-6],主要降解产物为5-氯水杨酸(5-CSA)和2-氯-4-硝基苯胺(2C4NA)[7],氯硝柳胺可作为理想的清塘剂。氯硝柳胺及其降解产物对水生生物具有毒副作用[8-9]。长期反复使用将导致氯硝柳胺及其降解产物蓄积在底泥中,因此有必要建立底泥中氯硝柳胺及其降解产物的分析方法。

氯硝柳胺的测定方法有荧光法[10]、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)[11-12]、高效液相色谱法(HPLC)[13-14]和电化学方法[15-16]。荧光法、电化学方法简单,但易受干扰,仅适用于简单体系,如水样、药剂;高效液相色谱法因灵敏度不高而应用受限。液相色谱-串联质谱法的灵敏度和选择性高,对于底泥样品,仍需必要的前处理过程。底泥样品的常用提取方法为索氏提取法,但该法萃取时间长,有机溶剂消耗多,且需人工操作;更有效的自动提取技术,如加速溶剂萃取(ASE)得到了广泛应用[17]。然而,ASE技术对分析物的选择性较低,提取后样品需净化以除去同时提取的干扰物质[18]。通过在ASE萃取仪内放置足够的吸附剂可实现萃取和纯化同时进行,减少了事后除杂的需要,并允许净化步骤的自动化。该技术已应用于污泥和沉积物中一些新型和持久性污染物的分析[19-21],常用吸附剂有硫酸化二氧化硅、C18和弗罗里硅土[22-24]。

本研究以中性氧化铝为池内吸附剂,加速溶剂萃取底泥中的氯硝柳胺及其降解产物。优化了提取溶剂及种类、温度、静态时间、吸附剂种类及与样品比例等加速溶剂萃取条件,并对实际样品进行了测试。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

LC-1290Ⅱ-6495-MS/MS液相色谱-串联质谱仪(美国安捷伦公司),ASE350加速溶剂萃取仪(美国戴安公司)。氯硝柳胺(NIC)、5-氯水杨酸(5-CSA)和2-氯-4-硝基苯胺(2C4NA)纯度分别为98%、99%、98.5%,均购自Sigma公司;甲醇(色谱纯,德国默克公司);中性、酸性和碱性氧化铝、乙二胺-N-丙基(PSA)、弗罗里硅土、C18和硅藻土购于天津艾杰尔公司。实验用水为密理博纯水机(德国默克公司)制备的二次水。

1.2 实验方法

液相色谱条件:色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm,1.8 mm );柱温40 ℃;流速为0.4 mL/min;进样量为5 mL。 流动相:A为水,B为甲醇。梯度洗脱条件:0~4 min,40% ~100% B;4~5 min,100% B;5~5.1 min,100%~40% B;5.1~6.0 min,40% B。

质谱条件:Agilent 6495三重四极杆质谱仪;ESI(-),毛细管电压3 000 V,多反应监测条件见表1。

表1 氯硝柳胺及其降解产物的质谱条件Table 1 MS conditions of niclosamide and its degradates

1.3 样品收集

所有底泥用抓斗式采泥器采集,含有40%~70%水分。底泥的理化性质参照文献[25]测定,采用pH 计测定底泥的pH值,重铬酸钾容量法测定有机质含量,乙酸铵法测定阳离子交换量(CEC)。测得所有底泥样品的pH值范围为 5.28~7.23,有机质含量为8.5~63.2 g/kg,CEC含量为80.6~203 mol/kg。样品经冷冻干燥后,磨碎、过筛,置于干燥器中室温保存。

1.4 样品提取与净化

底泥样品用ASE 350加速溶剂萃取仪进行萃取。在萃取池内依次填入5 g中性氧化铝、5 g底泥样品和6 g硅藻土混合物,采用乙腈和水(3∶1,体积比)混合溶液萃取,萃取液加入氯化钠饱和,液液分配后,转移萃取液有机相的1/2至100 mL鸡心瓶,旋转蒸发近干后,加入1.0 mL甲醇-水(4∶6,体积比)溶液溶解,过0.22 mm滤膜,待LC-MS/MS分析。

2 结果与讨论

2.1 加速溶剂萃取条件的优化

氯硝柳胺及其降解产物在极性和溶解性上有较大差异,提取溶剂的种类和比率选择显得尤为重要。本实验选用乙腈(ACN)、甲醇(MeOH)、乙酸乙酯(EA)和水作为单一或组合溶剂,提取结果显示,采用单一溶剂提取时,其中1种或2种分析物的提取效率低,平均回收率低于60%,尤其是采用乙酸乙酯作提取试剂时,2-氯-4-硝基苯胺的回收率低于40%;而以乙腈-水组合溶剂提取时,回收率明显增加,5-氯水杨酸和2-氯-4-硝基苯胺的回收率均超过70%,当乙腈和水的体积比为3∶1时,氯硝柳胺及其降解产物的提取回收率最好,为80%~100%,因此实验选择乙腈-水(3∶1)为提取溶剂。

图1 温度对ASE萃取效果的影响Fig.1 Effect of extraction temperature on recovery

温度是影响萃取效率的重要因素,升高温度能增加溶剂的渗透性,降低分析物在基质表面的吸附,从而提高萃取效率,但同时可能会导致分析物降解,引入更多共提杂质。实验考察了温度(60、80、100、120、140 ℃)对ASE萃取效果的影响,结果见图1。在60~100 ℃范围内,随着温度的增加,目标分析物的提取回收率均增加,100 ℃时5-CSA的提取回收率达105%,氯硝柳胺和2-氯-4-硝基苯胺的提取回收率达95%。之后继续升高温度,提取回收率反而降低,140 ℃时氯硝柳胺的提取回收率约下降10%,这可能是由于氯硝柳胺存在部分降解。因此,实验选择最佳萃取温度为100 ℃。

静态萃取时间和循环次数也是影响萃取效率的因素之一。实验对不同的静态萃取时间(4、 8、10、20、30 min)和循环次数(1、2、3次)进行了优化。结果表明,随着萃取时间从 4 min 增至10 min,提取回收率约增加9%,继续增加萃取时间,回收率反而降低,可能是共提的杂质干扰所致。循环2次比循环1次的提取效率约增加10.2%,继续增加循环次数,提取效率无明显增大,反而增加了样品前处理时间和共提杂质。因此,实验选择最佳的静态萃取时间为10 min,循环2次。

图2 吸附剂对净化效果的影响Fig.2 Influence of sorbent type on the recovery

池内净化是通过在提取前加入不同吸附剂来实现共提杂质的去除。实验分别考察了吸附剂种类(弗罗里硅土,中性、酸性和碱性氧化铝,C18,PSA)以及吸附剂与样品的质量比(1∶2、1∶1、3∶2)对萃取效率的影响,结果如图2所示。有水存在时,C18对氯硝柳胺有吸附作用,使得其提取回收率低于40%;而以PSA、酸性氧化铝和碱性氧化铝作为吸附剂时,5-氯水杨酸的提取回收率低于20%,可能是PSA和酸性氧化铝通过静电作用,而碱性氧化铝通过氢键作用吸附5-氯水杨酸所致。以中性氧化铝为吸附剂时,溶液更澄清,色谱峰信号显著增加,干扰峰少,表明吸附剂对杂质有移除效果;而弗罗里硅土对氯硝柳胺及其降解产物可能存在部分非特异性吸附,作为吸附剂时的提取效率均略低于中性氧化铝。随着吸附剂与样品质量比的增大,提取效率有所增加,当比例从1∶2增至到1∶1时,提取效率约增加10%,继续增大质量比,提取效率增加不明显。因此,实验选择中性氧化铝作为吸附剂,吸附剂与样品量的质量比为1∶1。

2.2 方法确证

在优化条件下,于空白底泥基质中加入氯硝柳胺及其降解产物标准溶液,其在0.1~20.0 μg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.999。以3倍和10倍信噪比计算得检出限和定量下限分别为0.04~0.1 μg/kg和0.2 ~0.5 μg/kg(表2),优于目前已有方法对土壤中氯硝柳胺的检出限50.0 μg/kg[26]和定量下限30.0 μg/kg[27],且已有文献方法不涉及对氯硝柳胺降解产物的分析。

表2 氯硝柳胺及其降解产物的检出限、定量下限、平均回收率及相对标准偏差(n=5)Table 2 Limits of detection(LODs),limits of quantitation(LOQs),average recoveries and relative standard deviations(RSDs) of niclosamide and its degradates(n=5)

2.3 实际样品的测定

在优化条件下,对鄱阳湖及其周边池塘30个底泥样品中的氯硝柳胺进行分析,其中有5个样品检出氯硝柳胺残留,残留量为1.5~3.6 μg/kg,其余样品未检出氯硝柳胺及其降解产物。在未检出的底泥样品中,分别添加0.5、1.0、2.0 μg/kg 3个不同水平的氯硝柳胺及其降解产物储备液,按照优化的条件进行萃取和测定,结果见表2。3个加标水平下氯硝柳胺及其降解产物的平均回收率为 93.5%~101.9%,相对标准偏差(RSD,n=5)为3.7%~6.7%。加标样品(2.0 μg/kg)的色谱图见图3。

3 结 论

本文建立了加速溶剂萃取/高效液相色谱-串联质谱法测定底泥中氯硝柳胺及其降解产物的方法。方法的检出限为0.04~0.1 μg/kg,回收率为93.5%~101.9%,相对标准偏差为3.7%~6.7%。结果表明,方法具有萃取效率高,灵敏度好等特点,可用于实际样品的分析。

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