转化生长因子-β1基因多态性与新疆地区维汉妊娠期糖尿病易感性的关系分析

米丽邦古丽·吾布里，马 英，丁桂凤，李晓红

0 引言

妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus,GDM)为妇产科较常见妊娠期疾病，患者糖代谢一般正常，而在妊娠期才出现或发现糖代谢异常，以血糖升高为主要特征，该病发病率约为1%～14%[1]，在不同地区及民族差异较大，如北京地区[2]2013年下半年GDM发病率为19.7%，广州地区[3]2013年下半年GDM发病率为18.4%，而关于新疆等西北地区GDM的调查尤其是该地区维汉族人群GDM发病特点及研究较少涉及[4]。TGF-β1为TGF-β家族成员，可调节机体生长、发育、炎性反应、创伤修复及免疫等过程，在介导及维持抑制某些自身抗体的耐受性方面有重要作用，目前已有研究证实TGF-β1基因多态性与张家口汉族桥本甲状腺炎、上海汉族人群2型糖尿病均有一定相关性，而其与GDM易感性研究较少[5-6]。本文以2014年6月至2017年12月新疆乌鲁木齐市妇幼保健院收治的450例孕妇为研究对象，分析TGF-β1基因多态性与该地区维汉族人群GDM易感性的关系，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象 纳入2014年6月至2017年12月于新疆乌鲁木齐市妇幼保健院产检的450例孕妇为研究对象，其中200例经口服糖耐量筛查试验(OGTT)确诊为GDM，250例OGTT正常。OGTT确诊为GDM者纳入GDM组(200例)，OGTT试验正常的健康孕妇纳入对照组(250例)，GDM组年龄24～39岁，平均(31.2±3.4)岁；维族100例，汉族100例；孕周24～28周，平均(26.1±1.5)周；体重指数25～31 kg/m2，平均(28.1±1.4)kg/m2，对照组年龄25～38岁，平均(31.3±3.3)岁；维族100例，汉族150例；孕周25～28周，平均(26.2±1.4)周；体重指数26～30 kg/m2，平均(28.0±1.5)kg/m2，两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①GDM孕妇符合加拿大妇产科医生协会(SOGC)制定的妊娠期糖尿病指南[7]，均孕24～28周，尚未接受饮食控制及胰岛素治疗；②GDM孕妇OGTT试验时空腹血糖≥5.1 mmol/L、餐后1 h血糖≥10.0 mmol/L、餐后2 h血糖≥8.5 mmol/L，三项中符合任意一项即可诊断为GDM；③所有患者均无嗜酒嗜好、重要脏器疾病，知情同意本研究并签署知情同意书。

排除标准：①孕前及妊娠期高血压、肾脏、心脏与自身免疫性疾病等重要脏器疾病者；②全身急慢性感染或其他伴发疾病者；③孕前1周服用影响糖代谢药物、激素类药物或保健品。

1.3 方法 血样采集：均于入院次日分管采集清晨空腹肘静脉血4 ml(采血前夜22∶00以后禁食)，其中2 ml静置凝固，分离血清后置于-20 ℃冰箱中冻存备用，以酶联免疫吸附试验测定TGF-β1水平，另2 ml行EDTA抗凝，高速离心后分离白细胞，采用德国Qiagen DNA提取试剂盒按照说明书进行DNA提取，后置于-20 ℃下保存备用。

TGF-β1基因多态性检测：采用晶美生物工程有限公司提供的Taq DNA聚合酶、pfu DNA聚合酶、dNTPs、DNA marker，美国PE公司提供的PE-9600 PCR仪。应用Primer Preimer 5.0软件设计TGF-β1各位点引物：①-509C/T：前引物5′-GTCGCAGGGTGTTGAGTGACAG-3′，后引物5′-AGGGGGGAACAGGACACCTTA-3′；②+869T/C：前引物5′-CTCCGGGCTGCGGCTGCAGC-3′，后引物5′-GGCCTCGATGCGCTTCCGCTTCA-3′；③+915G/C：前引物5′-TACTGGTGCTGACGCCGGGC

C-3′，后引物5′-CTTGGACAGGATCTGGCCGCGG-3′。设计PCR扩增体系及循环体系，93 ℃预变性5 min，93 ℃变性40 s，56 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min；总体进行35个循环，后72 ℃延伸5 min，PCR反应体系：体积30 μl，内含模板DNF 50 ng，上下游引物各40 pmol/L，KCl 50 mmol/L，MgCl21.5 mmol/L，dNTP 200 μmmol/L，Taq DNA聚合酶1 U。PCR产物20 g/L凝胶电泳分带，确定基因型。

1.4 观察指标 比较GDM组、对照组TGF-β1水平；分析两组TGF-β1基因型频率及等位基因频率；分析GDM组中维族、汉族患者TGF-β1基因型频率及等位基因频率。

2 结果

2.1 电泳结果 见图1～图3。

图1 -509C/T位点基因型电泳结果

图2 +869T/C位点基因型电泳结果

图3 +915G/C位点基因型电泳结果

2.2 两组患者TGF-β1水平比较 GDM组血清TGF-β1总体水平高于对照组(t=30.56，P<0.01)，且GDM组中维族患者TGF-β1也高于汉族患者(t=17.13，P<0.01)，对照组中维、汉族患者TGF-β1水平比较差异无统计学意义(t=1.44，P>0.05)。见表1。

表1 两组患者TGF-β1水平比较(ng/L)

注：与对照组比较，*P<0.05；与汉族比较，#P<0.05

2.3 两组患者TGF-β1基因型频率及等位基因频率比较 GDM组+869T/C基因位点的TT、TC、CC基因型频率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，两组-509C/T基因位点的CC、CT、TT基因型频率及+915G/C位点的GG、GC、CC基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05)；GDM组等位基因T频率低于对照组，而等位基因C频率高于对照组(P<0.01)。见表2、表3。

表2 两组患者TGF-β1基因型频率比较(例，%)

表3 两组患者TGF-β1基因+869T/C位点等位基因频率比较(频数，%)

2.4 GDM组维族、汉族+869T/C位点基因型频率及等位基因频率比较 GDM组维族患者869T/C基因位点的TT、TC、CC基因型频率、+869T/C等位基因(T、C)频率与汉族患者比较差异有统计学意义，且维族等位基因T频率低于汉族，等位基因C频率高于汉族(P<0.01)。见表4、表5。

表4 GDM组维族、汉族+869T/C位点基因型频率比较(例，%)

3 讨论

GDM为孕期最常见的并发症，随着我国新标准的实施，各地诊断GDM的切点进一步降低，诊断GDM并不困难，但确诊后若未及时控制病情，可能增加剖宫产率，导致羊水过多、巨大儿、新生儿窒息、新生儿呼吸窘迫综合征等不良结局，而新疆处于西北地区，地域、饮食环境影响对血糖控制更为不利，因此，分析其GDM发病机制有重要意义[8-11]。胰岛素抵抗及胰岛B细胞功能受损是导致GDM的2个重要病理基础，Brunetti等[12]研究发现，许多细胞因子包括TGF-β1与胰岛素抵抗及胰岛细胞受损有关，因此，考虑TGF-β1可能参与GDM发生发展。TGF-β1为一种多功能细胞因子，属于TGF-β超家族，人类TGF-β1基因定位于染色体19q13.1，由7个外显子、6个内含子组成，是分子量为25 kD的多肽二聚体，研究发现，TGF-β1至少存在9个SNP位点，其中-509C/T、+869T/C、+915G/C为研究较多的3个SNP位点，而关于TGF-β1基因多态性与GDM易感性的研究较少[13-15]。

表5 GDM组中维族、汉族+869T/C位点等位基因频率比较(频数，%)

本研究发现，GDM组血清TGF-β1水平高于对照组，且GDM组中维族患者TGF-β1水平较汉族患者高，可见TGF-β1在新疆地区GDM发病中起着重要作用，TGF-β1信号传导通路参与调节并维持胚胎、成人胰岛细胞功能，继而参与血糖调控，调节胰岛素敏感性，而新疆地处西北地区，是维吾尔族聚居地，受饮食、风俗、文化、经济、地理条件等因素影响，使其在很多方面有一定遗传性，饮食以牛羊肉等高蛋白高脂肪肉类为主，蔬菜较少，对血糖控制较为不利，因此，GDM孕妇中维族患者血糖控制水平可能更差，TGF-β1水平较汉族人群高。在基因多态性方面，本研究结果显示，GDM组、对照组-509C/T基因位点的CC、CT、TT基因型频率及+915G/C位点的GG、GC、CC基因型频率比较差异无统计学意义，而GDM组、对照组+869T/C基因位点的TT、TC、CC基因型频率差异有统计学意义。其与赵静等[16]的研究结果相似，可见TGF-β1基因+869T/C基因位点的变异可能增加孕妇GDM危险性，该位点基因多态性可能通过影响TGF-β1基因功能而改变胰岛素基因的转录及胰岛B细胞功能，导致GDM的发生。在GDM孕妇等位基因频率方面，本研究中GDM组+869T/C等位基因T、C频率与对照组比较差异有统计学意义，且GDM组等位基因T频率低于对照组，而等位基因C频率高于对照组。其与赵静等[17]的研究结果相似，表明+869T/C位点T等位基因可能是GDM的保护因素，而C等位基因为危险因素；Zhou等[18]通过Meta分析得出，亚洲人群中+869T/C基因多态性位点的CC基因型及所携带的T等位基因均与糖尿病肾病(DN)发生风险相关，+869T/C基因多态性位点的CC基因型是患DN的1个危险因素，携带T等位基因是DN的保护因素。此外，本研究在既往研究基础上对比了本地区维汉族GDM孕妇TGF-β1基因的+869T/C位点基因多态性，结果显示，GDM组中维族患者869T/C基因位点的TT、TC、CC基因型频率、等位基因(T、C)频率与汉族患者比较差异有统计学意义，且维族人群等位基因T频率低于汉族，等位基因C频率则高于汉族，因此，新疆地区GDM中维汉族患者TGF-β1基因多态性也存在明显差异，维族GDM群体可能因饮食、遗传特性及高蛋白高脂肪饮食习惯而使胰岛细胞损伤更严重，血糖控制更差[19]，TGF-β1基因的+869T/C位点所携带的C等位基因及C等位基因包含的基因型可能是维族GDM的易感基因，携带T基因及TT基因可能是该地区GDM的保护因素。

综上所述，TGF-β1基因多态性与新疆地区维汉族人群GDM易感性密切相关，其中+869T/C位点的等位基因T是维族GDM的保护因素，而等位基因C为易感因素。