上皮间质转化标记物在大肠癌中的表达及意义*

申志华，吴建龙，刘海丽，段庆华

（承德市中心医院病理科，河北承德 067000）

目前，大肠癌已是欧洲排名第2位的致死性肿瘤，占肿瘤致死性疾病的10%左右。导致大肠癌发生的原因众多，如基因突变引起的家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous PolyPosis，FAP)、DNA错配修复基因(MMR)突变引起的遗传性非息肉性结肠癌(hereditary non-polyposis colon cancer，HNPCC)、Crohn's病、溃疡性结肠炎等，均与大肠癌的发生发展密切相关[1]。上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是指在生理或病理情况下发生的上皮-间质转变，同时伴随细胞形态与相关基因表达的改变。近来研究发现，EMT在恶性肿瘤的发生发展过程中起着重要作用，并与肿瘤细胞的浸润和转移有着非常密切的关系[2]。为此，本研究采用免疫组织化学方法检测了EMT标志物，上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、β-连环蛋白（β-catenin）、波形蛋白(Vimentin)在大肠癌组织中的表达情况，进一步探讨EMT与大肠癌进展的关系及大肠癌的发生机制。

1 材料与方法

1.1 材料 收集承德市中心医院病理科2016年1月-2017年12月存档的大肠癌组织标本131例，患者年龄32～71岁，平均（56±7.32）岁，男性72例、女性59例，低分化癌50例、高-中分化癌81例。所有患者术前均未接受化疗及放疗。从病理资料库获得患者年龄、性别、组织学类型、临床分期、淋巴结或远处转移等临床参数，组织学类型、临床分期参照WHO的分级系统。以同期切除，距离大肠癌组织边缘超过5cm的大肠黏膜作为癌旁组织。

1.2 方法 采用免疫组织化学染色SP法，鼠抗人E-adherin、β-catenin、Vimentin单克隆抗体（工作浓度均为1：300）及免疫组化试剂盒均购于福州迈新生物技术有限公司。实验设立阳性和阴性对照，以试剂公司提供的阳性切片作为阳性对照，以PBS代替一抗为作为阴性对照。DAB显色，苏木素复染。

1.3 结果判定 由两名病理医师按半定量评分方法独立评分，每例切片随机选取5个高倍视野（10×40），按染色强度及阳性细胞数综合计分。染色强度：无色计为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞数：小于总数的5%计为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，大于75%为4分。染色强度得分与阳性细胞数得分相乘判定最终结果：0～1分计为-、2～3分计为+/-、4～6分计为+、大于6分计为++，以总分≤3分为阴性组，总分＞3分为阳性组。

1.4 统计分析 采用SPSS l9.0统计学软件进行统计分析，以P＜0.05为差异有统计学意义，组间率的比较采用卡方检验。

2 结果

2.1 EMT标志物在大肠癌和癌旁组织中的表达 大肠癌组织E-cadherin、β-catenin的阳性表达率明显低于癌旁组织，Vimentin的阳性表达率明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1，图1：

表1 免疫组化染色EMT标志物在大肠癌及癌旁组织中的表达

图1 EMT标志物在大肠癌和癌旁组织中的表达（①②E-cadherin、③④β-catenin、⑤⑥Vimentin，①③⑤为癌旁组织、②④⑥为癌组织）

2.2 EMT标志物在不同分化程度大肠癌中的表达 低分化大肠癌组织E-cadherin、β-catenin的阳性表达率明显低于高-中分化，Vimentin的阳性表达率明显高于高-中分化，不同分化程度大肠癌比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2，图2：

表2 免疫组化染色EMT标志物在不同分化程度大肠癌中的表达

图2 EMT标志物在不同分化程度大肠癌中的表达（①②E-cadherin、③④β-catenin、⑤⑥Vimentin，①③⑤为高-中分化癌、②④⑥为低分化癌）

3 讨论

EMT的主要特征是上皮细胞表型的缺失及间质特性的获得[3]，其发生的标志之一是E-cadherin的低表达，E-cadherin低表达可降低细胞间的黏附性并能增强细胞的运动及迁移能力[4]。本研究显示，大肠癌组织E-cadherin的阳性表达率明显低于癌旁组织（87.79% vs 99.24%），提示大肠癌的发生与EMT标志物中E-cadherin的低表达有密切关系。β-catenin是由一条多肽链组成的蛋白，作为一种多功能蛋白质，β-catenin可与E-cadherin结合形成复合体，促进细胞间粘附性的稳定[5]。因此，E-cadherin/β-catenin复合物是构建和维持细胞间联系的关键，其缺失将导致细胞间粘附力下降，从而促进癌细胞侵袭能力的提升[6]。有研究发现，E-cadherin和β-catenin的表达呈伴随状态，随着E-cadherin表达的降低，β-catenin的表达也会相应减少，在此过程中，随着E-cadherin和β-catenin表达的变化促进了EMT的发生发展[7]；另有报道提示，大肠癌的组织学分级、分化程度及临床分期与E-cadherin和β-catenin的低表达密切相关，二者低表达可使肿瘤细胞间的粘附性降低，从而使肿瘤细胞容易发生浸润和转移[8]。本研究亦证实了上述研究结果，E-cadherin和β-catenin在大肠癌组织中的阳性表达率均明显低于癌旁组织，并且，低分化大肠癌明显低于高-中分化大肠癌，提示大肠癌的发生、发展和分化程度与E-cadherin和β-catenin的表达变化有关。

癌细胞表达间叶分化标记物Vimentin是发生EMT更为直接的证据。Vimentin是细胞骨架蛋白之一，主要表达于中胚层来源的细胞，是一种EMT相关间叶标志物，具有高度的选择性。Kidd等[9]究发现，Vimentinde可能与肿瘤的生物学行为有关，包括肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移及预后等。本研究亦证实，Vimentinde与大肠癌的发生和分化程度有关，大肠癌组织Vimentin的表达明显高于癌旁组织，低分化大肠癌Vimentinde的表达明显高于高-中分化癌。

综上所述，与癌旁组织比较，大肠癌组织EMT标志物E-cadherin、β-catenin和Vimentin的表达出现了明显异常变化，并且不同分化程度大肠癌组织E-cadherin、β-catenin和Vimentin的表达亦明显不同。因此提示，EMT标志物可能成为预测大肠癌发生发展的潜在新靶点。