瑞舒伐他汀联合厄贝沙坦对心肌肥厚大鼠模型心肌重构的逆转作用研究*

黄宏超 李 阳 魏文峰

(佛山市顺德区妇幼保健院内科，广东 佛山 528300)

心肌肥厚是导致冠心病、心力衰竭、脑卒中等疾病的独立危险因素[1]。众多研究证实[2-3]，瑞舒伐他汀和厄贝沙坦在抑制心肌肥厚进程，逆转心肌重构，改善心室功能方面具有重要作用。有关二者联合用药能否发挥协同作用，增强抗心肌肥厚的作用，尚无大宗文献报道。本实验通过注射异丙肾上腺素构建心肌肥厚大鼠模型，观察瑞舒伐他汀、厄贝沙坦以及联合用药对模型大鼠血管紧张素II(Ang II)、心脏质量指数、左心室质量指数、心房钠尿肽(ANF) mRNA和血管紧张素I受体等指标的影响，探讨瑞舒伐他汀联合厄贝沙坦对心肌肥厚鼠模型心肌重构的逆转作用，从而为心肌肥厚的临床治疗提供新的思路、方法及实验依据。

1 材料和方法

1.1动物和试剂

SD雄性大鼠40只，体重203～215 g，购自中国科学院斯莱克实验动物中心(SCXK京2011-0012)，购回后适应性饲养2周后再用于实验。异丙肾上腺素注射液(国药准字H31021344，上海禾丰制药有限公司)；瑞舒伐他汀(国药准字J20120006，英国阿斯利康制药有限公司))；厄贝沙坦(国药准字J20130049，赛诺菲(杭州)制药有限公司)。TRIzol总RNA提取试剂盒(Invitrogen，美国)；逆转录试剂盒(ABI Applied Biosystems，美国)； PCR试剂盒(TaKaRa，日本)。PCR引物委托上海生工生物工程有限公司合成：ANF引物(上游：5’-TGGAGCAAATCCCGTATA-3’，下游：5’-GAGCAGAGCCCTCAGTTT-3’)，AT1R引物(上游：5’-TCTCCACCGCATCCACAA-3’，下游：5’-AGACCCTCTGTCCAACCC-3’)，GAPDH引物(上游：5’-TGGAGCAAATCCCGTATA-3’，下游：5’-GAGCAGAGCCCTCAGTTT-3’)。兔抗大鼠AT1R一抗、山羊抗兔二抗、BAD显色试剂盒(Santa Cruz，美国)。

1.2心肌肥厚大鼠模型构建及给药

40只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、瑞舒伐他汀组、厄贝沙坦组、联合组，每组8只。空白组每天腹部注射生理盐水(2 mg/kg)，其它各组每天注射等量异丙肾上腺素，14 d后获得心肌肥厚大鼠模型。造模成功后次日开始，将瑞舒伐他汀和厄贝沙坦研磨后制成悬液，空白组和模型组每天生理盐水灌胃，其它各组分别采用瑞舒伐他汀、厄贝沙坦以及联合给药灌胃。每天1次，连续灌胃8周。

1.3标本采集和测定

灌胃给药8周后，取各组大鼠腹主动脉血2 ml，采用Elisa法检测血浆血管紧张素II(Ang II)含量。处死各组大鼠，游离心脏及左心室，计算心脏质量指数和左心室质量指数。取各组大鼠心肌组织，检测ANF mRNA及AT1R mRNA表达，以及AT1R蛋白表达。

1.4PCR检测ANF mRNA及AT1R mRNA表达

TRIzol法提取大鼠心肌组织总RNA，核酸蛋白分析仪进行RNA质量评估。按逆转录试剂盒操作说明，逆转录合成cDNA。以cDNA为模板进行PCR扩增，扩增条件：94℃/2 min，94℃/30 s，60℃/30 s，72℃/45 s，共35个循环，72℃/5 min。目的基因相对表达量=目的基因光密度值/GAPDH光密度值。

1.5Western blot检测AT1R蛋白表达

大鼠心肌组织加入蛋白裂解液，匀浆后提取总蛋白，BCA法测定蛋白浓度。80 μg蛋白上样，经SDS-PAGE电泳分离，转至PVDF膜。TBST漂洗，5%脱脂奶粉室温封闭1 h，加入兔抗大鼠AT1R一抗，4 ℃孵育过夜。TBST漂洗，加入山羊抗兔二抗，37 ℃孵育1 h。TBST漂洗，暗室内DAB显色、曝光。目的蛋白表达量=目的蛋白光密度值/β-actin光密度值。

1.6统计学方法

2 结 果

2.1各组大鼠Ang II含量、心脏质量指数和左心室质量指数比较

与空白组比较，模型组Ang II含量、心脏质量指数和左心室质量指数显著增加(P<0.05)。与模型组比较，瑞舒伐他汀组、厄贝沙坦组和联合组Ang II含量、心脏质量指数和左心室质量指数显著下降(P<0.05)，且联合组下降最明显(P<0.05)。

表1 各组大鼠Ang II含量、心脏质量指数和左心室质量指数比较

注：a表示与空白组比较，P<0.05；b表示与模型组比较，P<0.05；c表示与联合组比较，P<0.05

2.2各组大鼠ANF mRNA、AT1R mRNA及AT1R蛋白表达比较

与空白组比较，模型组ANF mRNA、AT1R mRNA及AT1R蛋白表达显著增加(P<0.05)。与模型组比较，瑞舒伐他汀组、厄贝沙坦组和联合组ANF mRNA、AT1R mRNA及AT1R蛋白表达显著下降(P<0.05)，且联合组下降最明显(P<0.05)。

表2 各组大鼠ANF mRNA、AT1R mRNA及AT1R蛋白表达比较

注：a表示与空白组比较，P<0.05；b表示与模型组比较，P<0.05；c表示与联合组比较，P<0.05

3 讨 论

心肌肥厚主要是指心肌细胞蛋白合成增加，心肌纤维组织增生，导致心肌的直径增宽或长度增加、体积增大。研究心肌肥厚发生的机制，及时治疗和逆转心肌肥厚的进程，对于减少脑卒中、心力衰竭、冠心病等疾病的发生，降低死亡率具有重要意义[4]。近年来，大量研究证实血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素受体阻断剂(ARB)类药物可以通过调控多条不同的信号转导途径从而抑制心肌肥厚进程，逆转心肌重构，改善心室收缩和舒张功能，从而有效降低各种心脑血管疾病的发生[5]。瑞舒伐他汀和厄贝沙坦是临床常用的ACEI和ARB类药物，虽然二者都能够抗心肌肥厚，但是有关二者联合用药能否发挥协同作用，增强抗心肌肥厚的作用，目前尚无大宗文献报道。

本实验通过注射异丙肾上腺素构建心肌肥厚大鼠模型，观察瑞舒伐他汀、厄贝沙坦以及联合用药的抗心肌肥厚作用。结果发现，模型组Ang II含量、心脏质量指数和左心室质量指数显著增加，而瑞舒伐他汀组、厄贝沙坦组和联合组上述各指标较模型组显著下降，且联合组下降最明显。心脏质量指数和左心室质量指数显是用来衡量心肌肥厚程度的最常用指标，而高水平的Ang II会诱导心肌肥厚的发生。本实验结果说明模型组大鼠心肌肥厚严重，而瑞舒伐他汀组和厄贝沙坦能够有效逆转模型大鼠心肌肥厚，且二者联合具有协同作用，可增强抗心肌肥厚的作用。此外本实验结果发现，模型组ANF mRNA、AT1R mRNA及AT1R蛋白表达显著增加，而瑞舒伐他汀组、厄贝沙坦组和联合组上述各指标较模型组显著下降，且联合组下降最明显。ANF可抑制血管内皮细胞、平滑肌细胞、心肌成纤维细胞增生，还具有利尿和利钠作用，发生心肌肥厚时心房肌细胞受到牵张而导致ANP反馈性释放增加，从而发挥抗心肌肥厚和利尿和利钠的作用[6-7]。研究证实AT1R在心肌肥厚及心肌重构中扮演重要角色，Ang II主要就是通过AT1R介导而发挥促进心肌细胞和血管平滑肌细胞增殖肥厚的作用[8]。本实验结果说明，瑞舒伐他汀和厄贝沙坦逆转心肌肥厚的机制可能与下调ANF和AT1R的表达有关。

综上所述，瑞舒伐他汀和厄贝沙坦均能够逆转心肌肥厚大鼠模型的心肌重构，且联合用药具有协同作用，其机制可能与下调ANF和AT1R的表达有关。本实验为心肌肥厚疾病的临床治疗提供了新的思路、方法及实验依据，对推动本地区心血管疾病的防治有积极的临床意义。