阿托伐他汀对2型糖尿病患者单核细胞toll样受体4表达和炎症因子的影响

任丽君，张麦叶，高彬

(1.咸阳市第一人民医院内分泌科，陕西 咸阳 712000；2.空军军医大学西京医院内分泌科，陕西 西安 710032；3.西安交通大学生命科学与技术学院，陕西 西安 710049)

随着社会经济的不断发展，人们的生活水平得到了极大的提高，与此同时，人们的饮食结构了发生了巨大的改变，因此2型糖尿病在人群中的发病率呈现出逐年上升的趋势，严重影响了患者的身体健康的生活质量，同时也造成了家庭和社会的重担[1-2]。有关资料报道[3]，已确诊的糖尿病患者发生心血管疾病的危险是正常人的3倍左右，且预后差。研究表明炎症因子和糖尿病的发生发展密切关联。也有研究表明[4]，toll样受体4与介导先天免疫参与了糖尿病的炎性反应。阿托伐他汀可以具有降低、炎症因子的浓度的效果，同时还可以提高细胞免疫力等作用。本研究通过对2型糖尿病患者予以阿托伐他汀药物治疗，比较此药物对2型糖尿病患者的单核细胞toll样受体4和炎症因子水平的影响，旨在分析阿托伐他汀对糖尿病患者的抗炎作用。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2013年1月至2015年1月咸阳市第一人民医院收治的60例2型糖尿病患者为观察组，同期在进行健康体检的60例正常人作为对照组。对照组包括男33例，女性27例，年龄(62.40±2.59)岁，年龄范围为59～78岁。患者的纳入标准为[5]：(1)符合糖尿病的诊断标准及分类标准；且其他临床症状不典型，主要表现为高血糖；(2)患者生活自理，没有严重的并发症；(3)所有患者均自愿配合本次调查。排除标准:(1)有严重的糖尿病并发症，如酮症酸中毒、严重糖尿病肾病等；(2)合并有严重甲亢、肺结核恶性肿瘤患者；(3)存在有精神病阳性家族史或个人史、有严重的认知功能障碍等无法配合护理指导的情况，或者不愿意随访的患者。本研究获咸阳市第一人民医院伦理委员会批准。将观察组患者分为观察Ⅰ组(n=30)和观察Ⅱ组(n=30)，其中观察Ⅰ组患者中包括男性18例，女性12例，年龄(62.40±2.59)岁，年龄范围为59～78岁，病程(5.90±0.89)年，病程范围为4～8年，使用胰岛素剂量为(38.99±2.34) U·d-1，舒张压(79.99±1.56) mmHg，收缩压(140.10±2.44) mmHg，血肌酐(99.02±2.52) μmol·L-1; 观察Ⅱ组患者中包括男性19例，女性11例，年龄(61.72±2.44)岁，年龄范围为56～75岁，病程(5.21±0.79)年,病程范围为4～8年，使用胰岛素剂量为(39.1±2.50) U·d-1，舒张压(78.41±1.33) mmHg，收缩压(138.87±2.12) mmHg，血肌酐(98.33 ±2.65) μmol·L-1。经比较，两组患者的基线资料(性别、年龄、病程、血肌酐等)差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法观察Ⅰ组患者予以常规的降糖治疗，包括健康的饮食指导、生活方式指导、口服降糖药(除二甲双胍和胰岛素增敏药)、皮下注射胰岛素等。观察Ⅱ组患者在常规治疗基础上予以阿托伐他汀药物(北京嘉林药业股份有限公司，生产批号141148)20 mg，每天1次，晚间口服，连服3个月。

1.3TRL4的检测方法静脉采血1 mL于ED-TA抗凝管。取100 μL抗凝血，再将10 μL加到TRL4抗体，混匀后避光孵育30 min，再裂解红细胞，离心后细胞沉淀即加0.5 mL PBS重悬，采用流式细胞仪检测单核细胞toll样受体4表达；采用半定量逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测单核细胞TLR4 mRNA表达，采用DNAMAN软件设计引物，由日本Takara生物技术有限公司合成。引物序列(上海申友公司合成)。扩增产物取每个反应体系10 μL于非变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳,电泳结果与β-actin的电泳结果相对照,得出TLR4表达的相对强度。TRL4：上游CCATTTCAGCTCTGCCTTCAC 下游ACAACAATCACCTTTGGGCTTT。

1.4血清因子的检测方法采用ELISA法分别测定血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6) 、总胆固醇(TC)、 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等水平。试剂盒购于武汉生物工程有限公司，严格按照说明书进行操作。

1.5观察指标采用流式细胞仪检测单核细胞toll样受体4表达；IL-6使用GC-911y计数仪测定，TNF-α与炎性反应密切相关，其浓度与病情的严重程度成正比，使用GC-911y计数仪测定，hs-CRP为肝脏合成，释放到血液中，常于炎性反应期水平增高，其水平的高低直接影响疾病的发生，使用C反应蛋白测定试剂盒测定。同时，对患者的治疗前后的血糖进行比较。其中血糖达标标准为：空腹血糖5～6 mmol·L-1，餐后2 h血糖6～8 mmol·L-1，糖化血红蛋白6.5%～7.0%。

1.6统计学方法应用SPSS 21.0统计软件包进行数据处理，两组之间差异的比较使用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1对照组和观察组患者的单个核细胞TRL4mRNA和蛋白表达比较较对照组而言，观察组的单个核细胞TRL4 mRNA和蛋白表达治疗后明显升高(P<0.05)，见表1。

表1 对照组和观察组患者的单个核细胞TRL4 mRNA和蛋白表达比较

注：与对照组治疗后比较

2.2观察Ⅰ组和观察Ⅱ组治疗前后的TRL4mRNA和蛋白表达比较与治疗前相比，治疗后观察Ⅰ组患者的单个核细胞TRL4 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)，而观察Ⅱ组患者治疗后的单个核细胞TRL4 mRNA和蛋白表达较治疗前明显降低，且更低于观察Ⅰ组患者(P<0.05)，见表2。

表2 A组和B组治疗前后的TRL4 mRNA和蛋白表达比较

注：与观察Ⅰ组组治疗后相比，aP<0.05

2.3观察Ⅰ组和观察Ⅱ组治疗前后的炎症因子水平比较与治疗前相比，治疗后观察Ⅰ组患者的hs-CRP、 TNF-α、IL-6 、TC、 LDL-C差异无统计学意义(P>0.05)，而观察Ⅱ组患者治疗后的hs-CRP、 TNF-α、IL-6 、TC、 LDL-C较治疗前明显降低，且更低于观察Ⅰ组患者(P<0.05)，见表3。

2.4观察Ⅰ组和观察Ⅱ组治疗前后的血糖指标比较两组治疗前后的空腹血糖、餐后2 h血糖和糖化血红蛋白情况差异有统计学意义(P<0.05)，两组组间的比较也差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 观察Ⅰ组和观察Ⅱ组治疗前后的血糖指标比较

2.5糖尿病疾病组相对表达与血清因子的相关性TRL4与病情活动的指标相关，见表5。

表5 糖尿病疾病组相对表达与血清因子的相关性

3 讨论

2型糖尿病的发病分别有遗传、肥胖、年龄和现代生活方式等几大因素相关，该疾病的治疗主要以控制血糖为主[6-7]。而目前，在临床中已有研究证明[8]，炎症亦在与2型糖尿病的发生和发展中起着重要的影响作用。其中，急性和慢性高血糖通过多种信号参与2型糖尿病患者机体的炎性反应[9]。所以，在对2型糖尿病患者进行有效的降糖治疗外，再进行抗炎亦是治疗此疾病的有效举措之一。

表3 观察Ⅰ组和观察Ⅱ组治疗前后的炎症因子水平比较

注：与观察Ⅰ组治疗后相比，aP<0.05

相关文献显示[10]，单核细胞toll样受体4信号通路和2型糖尿病的炎性反应具有相关性。因氧化应激，糖基化反应的存在，患者外周血中和外周血单核细胞中的TLR4配体增加，TLR4与之结合后，诱导炎症因子的产生。炎症的激活与TLR4高表达相关[11]。既往研究表明,2 型糖尿病患者TLR4表达增高,与血浆TNF-α呈正相关,Devaraj等[12]报道1型糖尿病大鼠，TLR4表达上调与炎症因子增加密切相关。TLR4缺陷的大鼠链脲佐 菌素诱导发生糖尿病后,TLR 下游分子 MyD88,磷酸化 IRAK-1 蛋白,Trif,IRF3,和 NF-κB 活性明显下降,血清炎症因子IL-1β,IL-6, MCP-1) 和 TNF-α降低。可见降低TLR4表达和抑制TLR4信号通路可能会减轻2型糖尿病的炎性反应。陈海英等[13]的报道中显示，2型糖尿病患者单细胞TLR4表达与血清炎症因子CRP和TNF-α等相关。罗成等[14]的研究发现，糖尿病大鼠TLR4表达与炎症因子亦具有相关性，TLR4缺陷的大鼠发生糖尿病后，其炎症因子亦随之降低。而在本研究发现，与健康的对照组相比，发生2型糖尿病患者的TRL4 mRNA和蛋白表达明显上调，与以上文献报道结果相似。由此说明了TLR4信号通路的激活和介导的炎性反应在2型糖尿病的机体中发挥了重要作用。

近年来，他汀类药物被临床中广为使用。他汀类药物降低糖尿病患者心血管风险不能单用血脂降低解释。他汀类药物具有调脂外的多向性作用，其临床获益可能与抗炎作用相关。有研究证明[15]，他汀类药物可以降低健康人群的TRL4表达和下游信号分子，但其在糖尿病患者中能否发挥抗炎的效果和是否与抑制TRL4通路相关尚未确定。而在本研究中的结果显示，通过阿托伐他汀进行治疗的2型糖尿病患者的TRL4 mRNA和蛋白表达、CRP、TNF-α、IL-6、LDL-C等因子明显降低，此外，本研究经相关性结果分析发现，TRL4与CRP、TNF-α、IL-6、LDL-C间具有相关性，这说明了阿托伐他汀在一定程度上降低糖尿病患者TRL4蛋白表达，进而降低TRL4通路激活介导的炎性介质产生，且可以起到有效的抗炎效果，同时，此发挥的作用和TRL4信号通路的抑制具有密切的关联。所以，我们认为可将TRL4信号通路和炎症因子作为评估2型糖尿病患者疾病情况和严重度以及疗效的有利指标。同时，本研究中发现，阿托伐他汀可以以辅助调节患者的糖代谢和控制血糖，由表4可以看出，B组的血糖指标比A组和干预前的改善更为显著。

综上所述，阿托伐他汀的机制与TRL4及炎症因子的释放相关，这可能成为有效治疗2型糖尿病治疗作用的机制之一，且TRL4信号通路亦可能成为治疗2型糖尿病的潜在靶点。