儿童急性白血病患者外周血胸苷激酶1水平变化的临床意义

苌哲宗　余红岚　费樱

[摘要] 目的 探讨血清胸苷激酶1（TK1）水平变化对不同类型儿童急性白血病（AL）的诊断价值及临床意义。 方法 选取贵州医科大学附属医院及贵阳市儿童医院2015年10月～2017年9月86例儿童AL患者为研究组，分为急性B细胞型淋巴细胞白血病（B-ALL）组38例，急性髓系白血病（AML）组26例和急性T细胞型淋巴细胞白血病（T-ALL）组22例。同时将急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿分为标危组21例、中危组19例和高危组20例，另设86例健康体检儿童为对照组。空腹抽取静脉血，检测各组的血清TK1水平。 结果 B-ALL组、AML组以及T-ALL组血清TK1水平均高于对照组，T-ALL组血清TK1水平高于AML组，AML组血清TK1水平高于B-ALL组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。高危组血清TK1水平高于中危组，中危组TK1水平高于标危组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 检测血清TK1水平对儿童AL的筛查和实验室诊断有重要临床参考价值；血清TK1的水平与ALL患儿的临床危险分级有关，可作为其危险分级的一项参考指标。

[关键词] 急性白血病；急性B细胞型淋巴细胞白血病；急性T细胞型淋巴细胞白血病；急性髓系白血病；胸苷激酶1

[中图分类号] R729 [文獻标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）04（b）-0071-04

[Abstract] Objective To study the diagnostic value and clinical significance of serum thymidine kinase 1 （TK1） levels in different types of children with acute leukemia （AL）. Methods A total of 86 children with AL from the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University and Guiyang Children′s Hospital from October 2015 to September 2017 were selected as the study group， they were divided into acute B-cell lymphoblastic leukemia （B-ALL） group （38 cases）， acute myeloid leukemia （AML） group （26 cases） and acute T-cell lymphoblastic leukemia （T-ALL） group （22 cases）. At the same time， children with acute lymphoblastic leukemia （ALL） were divided into standard risk group （21 cases）， intermediate-risk group （19 cases） and high risk group （20 cases）， meanwhile 86 healthy children were selected as the control group. Fasting venous blood was collected and serum TK1 levels were measured. Results The levels of serum TK1 in B-ALL group， AML group and T-ALL group were higher than that of control group， the level of serum TK1 in T-ALL group was higher than that of AML group， the level of serum TK1 in AML group was higher than that of B-ALL group， with the statistically significant differences （P < 0.05）. The level of serum TK1 In the high-risk group was higher than that of the intermediate-risk group， the level of serum TK1 in the intermediate-risk group was higher than that of the standard risk group， with the statistically significant differences （P < 0.05）. Conclusion Detection of the level of serum TK1 has an important clinical reference value in the screening and laboratory diagnosis of AL in children. The level of serum TK1 is related to the clinical risk grade of children with ALL， which can be used as a reference index for its risk classification.

[Key words] Acute leukemia； Acute B-cell lymphoblastic leukemia； Acute T cell lymphoblastic leu？鄄kemia； Acute myeloid leukemia； Thymidine kinase 1

急性白血病（Acute leukemia，AL）是来源于造血系统的恶性肿瘤性疾病，原始细胞在骨髓异常增生和聚集并抑制正常造血，导致贫血和血小板减少。原始细胞也可侵犯髓外组织，如脑膜、性腺、胸腺、肝、脾或淋巴结等，引起相应病变。临床表现可有发热、胸骨疼痛、无力、皮肤出现紫癜等；外周血计数白细胞数量增高、正常或减少，镜检可发现有原始或幼稚细胞。根据受累的细胞类型，AL可以分为急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）和急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）两大类[1]。胸苷激酶（thymidine kinase，TK）是DNA补救合成途径的限速酶，TK1作为TK的一种亚型，存在于细胞浆中[2]。长期以来，TK被认为仅在细胞周期的S期的DNA复制过程中发挥作用。然而，进一步的研究表明，TK的缺乏使脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate，dTTP）减少，这与DNA损伤的增加有关，从而诱导细胞死亡和突变[3]。自发现血清TK1以来，其已经被用于研究多种血液系统恶性肿瘤的诊断、分类和细胞增殖特征[4]。TK1作为血清学标志物已经被用于临床疗效观察以及疾病的缓解和复发的监测[5]。TK1水平的增加亦被认为是ALL和AML患者的不利因素，因此，可作为患者随访的监测指标。由于急性白血病的遗传异质性，本研究根据AL患者细胞来源的不同，比较不同细胞来源的AL患者体内血清TK1水平的差异。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取贵州医科大学附属医院及贵阳市儿童医院2015年10月～2017年9月的86例AL患儿为研究组，同时选取86例健康体检儿童作为对照组。研究组中，男44例，女42例；年龄2～14岁，平均（7.68±3.55）岁；平均体重（20.35±8.21）kg。对照组中，男45例，女41例；年龄3～14岁，平均年龄（8.35±3.84）岁；平均体重（21.42±8.53）kg。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。

纳入标准：年龄2～14岁，符合《儿童急性淋巴细胞白血病诊疗建议（第四次修订）》的诊断标准[6]，患儿及家属同意及配合试验，并签署知情同意书。

排除标准：患者存在其他恶性肿瘤、炎症或其他危重疾病，可对研究的血清肿瘤标志物产生失真性干扰；患者存在肝肾功能不全、心功能障碍、神经脑血管系统疾病，身体基础条件较差；患者不配合者；资料不齐全者。

AL分类：应用流式细胞仪将研究组患儿分为急性B细胞型淋巴细胞白血病（B-ALL）组，AML组和急性T细胞型淋巴细胞白血病（T-ALL）组。并根据《儿童急性淋巴细胞白血病诊疗建议（第四次修订）》将急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿按危险度分为3组，即标危组，中危组和高危组[6]。

1.2 方法

抽取AL患儿治疗前空腹外周血并留取血清样本，同时抽取健康对照组儿童空腹外周血并留取血清样本，应用酶免疫点印迹化学发光法检测血清TK1含量，TK1细胞周期分析试剂盒及CIS-1化学发光数字成像分析仪由华瑞同康生物技术（深圳）有限公司提供。实验简要操作流程如下：

①加样：加3 μL待检样本于硝酸纤维素膜上，28～30℃晾干30 min至膜自然翘起，蒸馏水洗膜2次；②封闭：加入10 ml封闭剂，室温下振摇封闭30 min，倒掉封闭剂；③加入抗TK1-IgY抗体，室温振摇反应120 min，洗涤；④加入生物素化抗IgY二抗，室温下振摇反应40 min，洗涤；⑤加入SA-HRP，室温振摇反应60 min，洗涤；⑥加入ECL發光试剂，精确反应1 min，将膜片用吸水纸吸干，放入压膜胶片内，将压膜胶片放入化学发光成像分析仪内反应5 min后，进行拍摄、分析。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

将研究组患儿分为B-ALL组、AML组以及T-ALL组，其中B-ALL组38例（44.2%）、AML组26例（30.2%）及T-ALL组22例（25.6%）。三组的血清TK1水平分别为（4.50±1.36）、（7.24±1.67）和（9.28±2.13）pmol/L，对照组的血清TK1水平为（1.02±0.41）pmol/L。B-ALL组、AML组以及T-ALL组血清TK1水平均高于对照组血清TK1水平，T-ALL组血清TK1水平高于AML组，AML组血清TK1水平高于B-ALL组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。

再将60例ALL患儿按危险度分为3组，其中标危组21例（35%），中危组19例（31.7%）和高危组20例（33.3%）；三组的血清TK1水平分别为（3.61±0.65）、（4.66±0.91）和（6.31±1.07）pmol/L。高危组血清TK1水平高于中危组，中危组TK1水平高于标危组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。

3 讨论

AL是儿科常见血液系统恶性疾病[7]。TK1是一种调节细胞内胸苷含量的重要的酶[8]。TK1的活性与细胞增殖密切相关，细胞周期中，有多种机制调节其mRNA和蛋白质表达水平。当细胞进入S期时，TK1的mRNA和蛋白质水平增加[9]。TK1在G1期晚期开始表达，到S期增加20倍，其相应的DNA合成增加，而到G2期开始减少。S期mRNA和蛋白质水平的调节与TK1和细胞增殖密切相关[10]。在大多数正常或病理状况下，TK1具有95%的酶活性，当细胞增殖停止时，TK1水平减低；但是，在增殖细胞和肿瘤细胞中，TK1水平在G1期急剧增加直到S期晚期结束，从G2期开始又开始增加[11]。血清TK1水平和各种癌症的不同阶段、复发、缓解的相关性已经被证实[12]。肿瘤组织中的TK1水平与肿瘤细胞的生长速度相关，可能揭示了血液系统恶性肿瘤、脑肿瘤、结直肠癌、前列腺癌和乳腺癌的预后[13]。实体瘤患者体内的血清TK1水平可能会提示有肿瘤细胞的增生性活动[14]。因此，TK1在肿瘤疾病中的功能和作用已被广泛研究。

ALL在儿童白血病中占大多数，其病因和发病机制至今尚不十分清楚[15]。随着现代医学的发展及诊疗技术和水平的不断提高，ALL患儿可以实现长期生存或者治愈，在一些发达国家，ALL的5年无事件生存率已达到90%左右[16]，临床上，对于儿童ALL的诊断及化疗疗效观察，依赖于骨髓穿刺、细胞病理检查等手段。而减少骨髓穿刺和细胞病理检查次数，寻找其他辅助检查指标对疾病进行初筛、辅助诊断、疗效观察成为很多学者研究探索的方向[17-19]。有文献报道，血清TK1水平的检测对于儿童ALL的初筛、辅助诊断以及疗效观察均有临床价值[20]。基于以上分析，本研究将ALL患儿按细胞来源不同分为B-ALL组和T-ALL组。B-ALL组和T-ALL组的血清TK1水平均高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）；本研究还将ALL患儿分为标危组、中危组和高危组其中高危组的TK1水平高于中危组，中危组的TK1水平高于标危组，三组间的TK1水平差异均具有统计学意义（P < 0.05）；这与国外O′Neill[12]和Votava[21]等的研究报道相一致。

综上所述，血清TK1作为一个细胞增殖的标志物对儿童AL（包括AML和ALL）的筛查和实验室诊断有重要临床参考价值；血清TK1的水平对ALL患儿的临床危险分级有重要参考意义，可作为其危险分级的一项参考指标。

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