血清β2微球蛋白、视黄醇结合蛋白、胱抑素C、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白及基质金属蛋白酶2多指标联合检测在糖尿病肾病患者中的价值

赵亚妮, 王　君, 赵　棉

(1. 陕西省西安第五医院 检验科, 陕西 西安, 710082; 2. 陕西省西安市第一医院 检验科, 陕西 西安, 710002)

糖尿病肾病(DN)是2型糖尿病(T2DM)患者最为常见的合并症之一，仅次于肾小球肾炎，在终末期肾病中位居第2位，给患者的健康与生活质量带来了严重的影响[1]。由于DN存在复杂的代谢紊乱，若进展为终末期肾脏病，往往比其他肾病的治疗更为棘手。及时通过有效的措施明确诊断并治疗DN, 对延缓疾病进展具有重要的意义[2-3]。目前，尿微量白蛋白是诊断与评估DN预后的主要指标，然而该指标易受发热、尿路感染等多种因素的影响，稳定性较差[4]。本研究分析血清β2微球蛋白(β2-MG)、视黄醇结合蛋白(RBP)、胱抑素C(Cys C)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)及基质金属蛋白酶2(MMP2)多指标联合检测对DN的诊断价值，现将结果报告如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料

选择2015年10月—2017年10月本院收治的260例T2DM患者，根据尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)将其分为DN组(UACR 30～<300 μg/mg)112例与单纯T2DM组(UACR<30 μg/mg)148例。选择同期于本院进行体验的130例健康对象作为对照组。DN组男60例，女52例; 年龄38～72岁，平均年龄(58.5±5.3)岁。单纯T2DM组男76例，女72例; 年龄40～74岁，平均年龄(58.2±4.8)岁。对照组男70例，女60例; 年龄37～75岁，平均年龄(58.4±4.2)岁。本研究经医院伦理委员会批准，且研究内容告知研究对象知情同意，已签署知情同意书。2组性别、年龄构成比比较，差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准: 符合世界卫生组织(WHO)制定的相关标准。排除标准: 患有严重心血管疾病; 肝、肾功能障碍; 内分泌系统、血液系统与泌尿系统疾病; 伴有急慢性感染; 其他肾脏疾病。

1.2　方法

3组研究对象在晨起空腹状态下采集静脉血3 mL, 放置30 min后，以3 000转/min的速度离心10 min, 分离血清，放置在-20 ℃的冰箱内存储。通过免疫比浊法检测RBP(试剂盒由上海盈公生物技术有限公司提供)、Cys C(试剂盒由武汉明德生物科技股份有限公司提供)与β2-MG(试剂盒由南京建成生物工程研究所提供)，胶乳增加免疫比浊法检测NGAL(试剂盒由上海纪宁生物有限公司提供); 通过全自动酶标仪ELISA法检测MMP-2(试剂盒由上海和序生物科技有限公司提供); 质控品与校准品均与试剂配套，具体操作方法严格按照说明书执行。

1.3　观察指标

① 比较3组研究对象血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2水平。② 比较DN组血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2与联合检测的阳性率。其中MMP-2低于正常值范围为阳性, β2-MG、RBP、Cys C、NGAL检测高于正常参考范围为阳性, β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2中任意1项阳性为联合检测阳性。③ 分析UACR与β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2的相关性。

1.4　统计学分析

2　结　果

2.1　3组研究对象血清β2-MG、RBP、Cys C、 NGAL及MMP-2水平对比

3组研究对象血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2水平对比有显著差异，即DN组血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL>单纯T2DM组>对照组(P<0.05), MMP-2<单纯T2DM组<对照组(P<0.05)。见表1。

表1　3组研究对象血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2水平对比

与对照组对比, *P<0.05; 与单纯T2DM组对比, #P<0.05。

2.2　DN组血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、 MMP-2与联合检测的阳性率对比

DN组联合检测阳性率为88.39%(99/112), 均显著高于单纯β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2阳性率62.50%(70/112)、60.71%(68/112)、59.82%(67/112)、60.71%(68/112)、63.39%(71/112) (P<0.05)。

2.3　UACR与β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及 MMP-2的相关性

UACR与β2-MG、RBP、Cys C、NGAL呈正相关性(r=-0.575,P<0.01); UACR与MMP-2呈负相关性(r=-0.420,P<0.01)。

3　讨　论

DN是糖尿病患者死亡的重要原因之一，该病具有发病隐匿、进展速度慢等特点，若能及时采取有效的诊疗措施可以延缓甚至逆转疾病[5]。有研究[6]指出，由于早期DN无典型的症状表现，尿微量清蛋白排泄率(UAER )与血清肌酐(Scr)均处于正常水平，而当UAER与SCr浓度升高时，肾小球滤过率往往已降至正常值的50%, 所以传统指标难以监测早期肾功能的变化，且易受到饮食、运动、感染、发热等多因素的影响。现阶段，肾活检是诊断肾脏病变的金标准，然而此项技术不仅操作繁琐，且具有较大的创伤性，无法作为临床筛查手段。此外，若DN患者已出现明显的临床症状与持续蛋白尿，说明其肾功能损伤已无法逆转，仅能延续病情进展[7]。因此，尽早采取有效的诊断与治疗措施改善DN患者的预后，降低终末期肾衰竭的发生率与死亡率十分必要。

NGAL属于一种脂质运载蛋白，广泛分布于人体组织，其中在中性粒细胞中的表达最高，并在肾脏、胸腺、支气管也有所表达[8]。NGAL与机体免疫应答、炎症等具有密切的相关性，可以有效评价早期肾损伤程度。有学者[9]发现, NGAL通常在远侧肾单位与近端小管表达，并具有铁转运作用，调控肾小管上皮细胞与肾间充质细胞的转化与生长，诱导已损伤肾脏的肾小管上皮细胞成熟与再生，继而改善肾功能。所以，在肾脏发生病变与病情进展的过程中，机体血清内NGAL值会出现明显变化。本研究结果显示, DN组血清NGAL>单纯T2DM组>对照组(P<0.05)。可见, DN患者血清NGAL与肾损伤程度密切相关。在炎症的刺激下，中性粒细胞可释放出大量的NGAL, 并诱导机体肝脏过量表达NGAL, 而已出现的肾病必然破坏了肾小球滤过率，减少对NGAL的清除，致使血清NGAL水平增高。

RBP是肝细胞粗面内质网中的一种分子蛋白，当其与受体结合后，主要经肾小球滤过，并由肾小管降解与吸收[10]。肾脏损伤后，肾小球滤过能力也随之受损，导致血清内RBP显著增高。本研究中, DN组血清RBP >单纯T2DM组>对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。可见，血清RBP也是评价肾脏功能的有效指标之一。

Cys C属于非糖化小分子蛋白，其分子较小，可以自由通过肾小球滤过，之后由近曲小管重吸收与代谢，所以肾脏是清除Cys C的重要器官。然而，当肾小球损伤时，血液内Cys C可持续高水平表达，并随着肾病的加重，其表达也会逐渐增加[11]。因此, Cys C是评价肾小球功能的重要内源性指标。本研究结果显示, DN组血清Cys C>单纯T2DM组>对照组(P<0.05)。可见, Cys C变化可以有效反映出肾小球滤过率，对DN的诊断与治疗具有重要的指导意义。

β2-MG是机体白细胞抗原分子中的β轻链，具有较小的分子量，合成速度平稳，可以自由通过肾小球滤过膜，且经肾小球滤过的β2-MG几乎完全被吸收，所以其浓度可以有效反映肾小管吸收功能与肾小球滤过功能[12]。本研究结果显示, DN组血清β2-MG >单纯T2DM组>对照组(P<0.05)。DN患者糖原反应阳性物质沉着与肾小球基底膜增厚，继而诱发肾小球滤过能力损伤，所以血清内β2-MG水平增高，可说明肾小管重吸收障碍。

MMP-2是一种活性较强的基质金属酶，主要用于调控基膜的新陈代谢，当其异常表达时，可以影响机体内的Ⅳ型胶原降解与表达，导致细胞外基质的降解、肾小管间质纤维化与肾小球硬化。有研究[13]发现, MMP-2异常表达可以诱导肾小球系膜细胞向炎症表型转变，且加快了增殖速度，致使部分细胞外基质沉积，最终造成肾小球硬化。本研究显示，DN组MMP-2<单纯T2DM组<对照组(P<0.05)。可见, MMP-2能够作为DN的有效诊断指标，随着UACR的升高, MMP-2明显下降，这与以往研究结果相符[14-15]。

本研究结果显示, DN组联合检测阳性率88.39%, 均显著高于单纯β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2阳性率62.50%、60.71%、59.82%、60.71%、63.39%(P<0.05)。UACR与β2-MG、RBP、Cys C、NGAL呈正相关性(P<0.01), 与MMP-2呈负相关性(P<0.01)。可见, DN病情进展与β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2密切相关，且联合检测的效果明显优于单项检测，可以有效提高检测的准确性，为临床诊疗工作提供可靠的依据。