丹七软胶囊脂溶性成分的GC—MS指纹图谱研究

庞颖 刘汉伟 高峰 杨健

中图分类号 R283.6 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）06-0766-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.06.11

摘 要 目的：建立丹七软胶囊脂溶性成分的气相色谱-质谱（GC-MS）指纹图谱。方法：采用GC-MS 法。色谱柱为DB-5 ms毛细管色谱柱，载气为高纯度氦（99.999%），程序升温，流速为1.0 mL/min， 进样口温度为250 ℃，进样量为1 μL，分流比为1 ∶ 40，分流进样；电离方式为电子轰击离子源，离子源温度为280 ℃， 接口温度为300 ℃，电子能量为 70 eV，溶剂延迟时间为3 min，质荷比（m/z）为50～550。以棕榈酸乙酯为参照，测定11批样品的GC-MS图谱，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版）进行相似度评价，确定共有峰，并采用LC Solution 2工作站标准质谱图库（NIST05.LIB和NIST05s.LIB）确定共有峰成分。结果：11批样品相似度均大于0.90；经验证，11批样品的GC-MS图谱均与对照图谱具有较好的一致性。11批样品的GC-MS图谱有49个共有峰，鉴定出38个化学成分（占总峰面积的94.94%）。结论：所建指纹图谱可为丹七软胶囊质量评价提供参考。

关键词 丹七软胶囊；脂溶性成分；气相色谱-质谱联用；指纹图谱

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish GC-MS fingerprints of liposoluble constituents from Danqi soft capsule. METHODS： GC-MS method was adopted. GC chromatogram column was DB-5 ms capillary column with high purity helium （99.999%） as carrier gas at the flow rate of 1.0 mL/min， with temperature programming. The injector temperature was 250 ℃.The sample size was 1 μL. The shunt ratio was 1∶40， with distributary injection. Ionization mode was as follows as electron bombardment ion source， ion source temperature of 280 ℃， injector temperature of 300 ℃， electronic energy of 70 eV， solvent delay time of 3 min， mass charge ratio （m/z） of 50-550. Using ethyl palmitate as reference， MS spectrums of 11 batches of samples were determined. Similarity evaluation was conducted by using TCM Fingerprint Chromatogram Similarity Evaluation System （2004 A edition） to determine common peak. The common peaks were determined by LC Solution 2 workstation standard mass spectrometry Library （NIST05.LIB or NIST05s.LIB）. RESULTS： The similarity of 11 batches of samples was higher than 0.90. After validation， GC-MS chromatograms of 11 batches of samples were in good agreement with control fingerprint. There were 49 common peaks in GC-MS chromatogram， and 38 chemical constituents were identified， accounting for 94.94% of total peak areas. CONCLUSIONS： Established fingerprint can provide evidence for quality evaluation of Danqi soft capsule.

KEYWORDS Danqi soft capsule； Liposoluble constituents； GC-MS； Fingerprint

丹参、三七（合称“丹七”）是临床常用中成药的重要组成部分。丹七软胶囊，系在普通丹七片的基础上对其制备方法进行科学改良而成，并获得了国家知识产权局颁发的丹七软胶囊制备方法发明专利证书（证书公开号：CN17624A）。其具有活血化瘀、通脉止痛之功效，多用于瘀血闭阻所致的胸痹，症见胸部刺痛、痛处固定、眩晕头痛、经期腹痛等，广泛应用于心内科、神经内科、骨伤科、妇科、眼科等属“血瘀证”范畴疾病的治疗[1-4]。目前，对丹七类药物的研究主要集中于其极性部位，尚未见对该类药物脂溶性成分的图谱研究。有研究报道，三七药材中脂溶性成分对大脑和延髓具有一定的抑制作用，可镇静、安神[5-6]，其中α-松油醇还具有抑菌作用[7-8]；丹參药材中脂溶性成分β-石竹烯、β-榄香烯、δ-榄香烯和α-蛇麻烯等对肿瘤有抑制作用，是具有化疗潜力的活性成分[9-10]。为准确反映丹七软胶囊的内在品质，本研究首次对其中的脂溶性成分进行了探讨，建立了气相色谱-质谱（GC-MS）指纹图谱，以期为该类药物的质量控制及其有效成分的研究提供参考。

1 材料

1.1 仪器

TRACE 1310/TSQ 8000型GC-MS仪（美国Thermo公司）；BS210S型十万分之一电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）。

1.2 药品与试剂

丹七软胶囊[北京长城制药厂，批号：13110105、13110215、14080101、14080102、14090101、14090102、14100101、14100102、14110101、14110102、14110113（编号为S1～S11），规格： 0.6 g/粒]；棕榈酸乙酯对照品（批号：B21707-20160325，纯度：≥98%）、硅藻土（批号S30557-201603）均购自上海源叶生物科技有限公司；试验所用试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.3 药材

丹参、三七药材均购自河北安国药市，经中国中医科学院中药研究所唐仕欢副研究员鉴定为真品。

2 方法与结果

2.1 试验条件

2.1.1 GC条件 色谱柱：DB-5 ms毛细管色谱柱（30 mm × 0.25 mm，0.25 μm）；载气：高纯度氦（纯度：≥99.999%）；流速：1.0 mL/min；程序升温：起始温度 40 ℃，保持 1 min，以 4 ℃/min的速度升至 220 ℃，以 50 ℃/min的速度升至 280 ℃，保持 5 min；进样口温度： 250 ℃；进样量：1 μL；分流比：1 ∶ 40，分流进样[11-12]。

2.1.2 MS条件 电离方式：电子轰击离子源；离子源温度：280 ℃； 接口温度：300 ℃；电子能量：70 eV；溶剂延迟时间：3 min；荷质比（m/z）：50～550。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取棕榈酸乙酯对照品适量，置于10 mL量瓶中，加乙醇溶解并定容，即得。

2.2.2 供试品溶液 取样品内容物 2.0 g，精密称定，加入约0.5 g硅藻土，研匀，置于100 mL圆底烧瓶中，加乙酸乙酯 25 mL，回流提取 1 h，放至室温，滤过，取滤液加乙酸乙酯定容至 25 mL，摇匀，经0.22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 精密度试验 取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：14110113）适量，按“2.1”项下试验条件连续进样测定6次，以棕榈酸乙酯峰的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰相对保留时间和相对峰面积。结果，13个共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD为0.13%～1.95%（n=6），表明方法精密度良好。

2.3.2 稳定性试验 取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：14110113）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、12、16 h时按“2.1”项下试验条件进样测定，以棕榈酸乙酯峰的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰相对保留时间和相对峰面积。结果，13个共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD为 0.46% ～ 2.62%（n=6），表明供试品溶液室温放置16 h内基本稳定。

2.3.3 重复性试验 精密称取样品（批号：14110113）内容物适量，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下试验条件进样测定，以棕榈酸乙酯峰的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰相对保留时间和相对峰面积。结果，13个共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD为0.26%～2.02%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.4 GC-MS指纹图谱的生成、相似度及共有峰相关数据分析

2.4.1 GC-MS指纹图谱的生成 取11批样品内容物各适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下试验条件进样测定，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版）对11批样品的GC-MS图谱进行分析，得GC-MS指纹图谱，详见图1、图2。

2.4.2 相似度分析 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版），以样品共有模式为对照，进行整体相似度评价。结果显示，11批样品相似度均大于0.90，表明各样品间差异较小、质量稳定性良好，详见表1。

2.5 GC-MS指纹图谱中共有峰的归属和指认

采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A 版）对11批样品的GC-MS图谱进行比较分析。11批样品有49个共有峰，确定25号峰为棕榈酸乙酯，其峰面积较大，为所有药材样品共有，因此以25号峰为参照峰，根据共有峰的保留时间和通过检索LC Solution 2工作站标准质谱图库（NIST05.LIB和NIST05s.LIB）对比相关质谱图，鉴定出 38 个化合物（占总峰面积的94.94%）并指认其归属，详见表2。

3 讨论

本试验采用GC-MS法对丹七软胶囊脂溶性成分进行指纹图谱研究，为了更好地反映其脂溶性成分，笔者对提取条件和分析条件（色谱条件和质谱条件）进行了多次优化。同时，考察了正己烷、石油醚、二氯甲烷、乙醚和乙酸乙酯在样品超声和回流提取后的提取效率，结果表明乙酸乙酯提取最为完全、出峰数最多，故选择其作为提取溶剂。本试验采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2004 A版）生成了丹七软胶囊脂溶性成分指纹图谱的共有模式，计算了11批样品的GC-MS指纹图谱的相似度，结果均大于0.90，表明与对照图谱具有较好的一致性；且各色譜峰相对保留时间稳定，说明本方法所建立的指纹图谱具有较好的稳定性和可控性。

本研究同时对丹七软胶囊脂溶性成分指纹图谱进行了指认，得到49个共有峰，其中13个峰占总峰面积的71.71%（以13个峰进行方法学考察），38个峰占总峰面积的94.94%（鉴定38个峰化合物成分）。

综上所述，本研究所建指纹图谱可为丹七软胶囊的真伪鉴别和质量评价提供参考。

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（收稿日期：2017-05-09 修回日期：2017-07-07）

（编辑：张 静）