黄精多糖的提取及抗氧化作用的研究

方欢乐，李晓明，李秋全，王丽

（西安培华学院医学院，陕西西安 710125）

随着时代的发展，老龄人口不断增长，人们的生活伴随着更多的压力，更多的人患上了慢性疾病、免疫疾病等[1]。因此，人们更关注健康和长寿的问题。黄精有很多功能，一般多用于疲倦乏力、肺虚干咳、解热消渴等[2]。黄精的主要活性成分有糖类、甾体皂苷、黄酮、蒽醌类化合物、氨基酸和微量元素等[3]。黄精在临床上的应用较多，其主要活性成分就是黄精多糖（Rhizomapolygonatum polysaccharide）[4]。黄精多糖具有抗氧化、降抗动脉粥样硬化、抗炎、抗病毒的、抑制癌细胞、保肝等作用[5-6]。文章研究了黄精多糖的提取方法及其抗氧化功效，对黄精多糖在医药行业、保健品方面以及在疾病的预防和治疗中有现实意义，为黄精多糖的开发提供一定的实验数据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

YP102N电子天平、RE-52AAA旋转蒸发器、DZF型真空干燥箱、SHB-III循环水式多用真空泵、752型紫外可见分光光度计、G-26C高速离心机。

1.2 动物

昆明种雄性大鼠，购于西安交通大学动物中心，动物的质量合格证号：SCXK(陕)2010-001。

1.3 药品

黄精粗粉（产自汉中勉县）、浓硫酸、葡萄糖、无水乙醇、蒸馏水、3%氢氧化钠溶液、活性碳、30%盐酸、异丙肾上腺素（美国Sigma公司）、蒸馏水、生理盐水、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），其他为分析纯。

2 实验方法

2.1 黄精多糖的提取

黄精多糖的提取参照文献提取方法进行[7]，黄精粗粉100g，过60目筛，加入1500mL3%NaOH溶液过夜后，过滤，将滤渣再加3%NaOH（加入量为滤渣的2倍）溶液过夜。然后过滤，合并上清液调pH至中性（要迅速，否则会破坏多糖的结构），旋转蒸发浓缩至原溶液体积1/4，浓缩时温度必须控制在70～80℃，盐酸除蛋白调至pH为3，静置除去沉淀，浓缩，加无水乙醇（无水乙醇加量为浓缩液体积的4倍）沉淀，用蒸馏水洗涤、溶解沉淀，过滤除去不溶杂质。真空干燥黄精多糖，得到纯多糖。

2.2 黄精多糖的含量测定

2.2.1 葡萄糖标准溶液的测定

用分析天平称取葡萄糖干燥标准品0.1002g，然后将葡萄糖放入100mL容量瓶内，再加蒸馏水溶解，最后稀释至刻度即可，搅匀以后，取上述配制好的葡萄糖溶液10mL稀释至50mL于容量中，留作标准液。把配制好的葡萄糖标准溶液分别量取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6和1.8mL，然后依次置于10mL具塞试管中，再将蒸馏水加入，使各管中的总体积至2mL即可，再将1.0mL的6%苯酚溶液依次加入各管，充分搅拌混匀后，迅速加入5.0mL浓硫酸（加浓硫酸时把移液管放于试管正上方）溶液，混匀，放置等待5min，在沸水浴中加热15min后，取出冷却即可。再取2.0mL蒸馏水作为对照组，和上述操作相同，加入各溶液，最后将所有溶液在490nm下测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线如图1所示。得回归方程y=7422x+0.2607，R2=0.797。

图1葡萄糖溶液标准浓度曲线图

2.2.2 多糖含量的测定

用移液管量取黄精多糖溶液1mL，按照上述葡萄糖标准溶液的测定方法，再用同样的方法测定黄精多糖的吸光度，运用公式计算样品中多糖的百分含量：

多糖含量(%)=C·D·F/W

公式中，C为供试液中葡萄糖的浓度（mg/mL）；D为供试液中黄精多糖溶液的稀释倍数，F为换算因子，W为供试品的质量（mg）。测得供试液中的黄精多糖的吸光度A=1.907，由曲线方程A=7422C+0.2607可得C=0.0002499mg/mL。多糖的含量（%）=C·D·F/W=88.7%。

2.3 黄精多糖对心肌肥厚大鼠抗氧化作用研究

2.3.1 大鼠心肌肥厚的模型

采用异丙肾上腺素皮下注射建立心肌肥厚的大鼠模型，给药剂量选取5mg/kg.d，皮下注射连续给药7天。

2.3.2 分组及给药

32只大鼠，随机分成4个组，每组放8只大鼠，并对每组大鼠做好标记。分别为对照组、模型组、黄精多糖高剂量组（0.72g/kg）、黄精多糖低剂量组（0.27g/kg）。给ISO后隔40min在给黄精多糖，连续给黄精多糖治疗二十天。

2.3.3 大鼠血液中SOD活性和MDA含量测定

大鼠称重，然后依次进行眼球取血，将血液放置于离心机中，3600r/min, 离心15分钟，取上清液，采用黄嘌呤氧化酶法在550nm处测定SOD含量，用硫代巴比妥酸法在532nm处测定MDA含量。

3 实验结果

心肌肥厚大鼠的体内抗氧化作用影响的实验结果见表1。从表1中可以看出，ISO组大鼠血液中的SOD含量明显下降、MDA含量明显增加。而黄精多糖高剂量组较ISO诱导的大鼠血液中的SOD含量升高、MDA含量降低,与异丙肾上腺素模型组相比具有统计学意义（P＜0.05）。

表1 心肌肥厚大鼠的体内抗氧化作用影响（x-±s）

4 结论

本实验运用了碱提醇沉法，提取多糖浓度相对比较高多糖比较纯的。但是用碱溶液提取浓缩时一定不能温度过高，否则会破坏多糖的结构。在调pH时要迅速，稀碱易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解，可溶性杂质也随之浸出，为了提高稀碱提取的黄精多糖的纯度，本实验用了盐酸脱蛋白法。测定 SOD活性和 MDA含量可间接反映氧化应激的程度[8]。本研究显示ISO诱导的心肌肥厚模型中，大鼠血液中MDA含量明显增加，SOD含量降低。用黄精多糖后发现血液中SOD活性增加，MDA含量降低。表明了黄精多糖具有一定的抗氧作用，提示黄精多糖对心肌肥厚可能有一定的改善作用。

[1]梁引库.黄精多糖提取工艺的研究[J].中国农学通报,2012,28(12):269-272.

[2]薛丹,黄豆豆,黄光辉,等.植物多糖提取分离纯化的研究进展[J].中药材2014,37(1):157-161.

[3]周桃英,陈年友,陈中建,等.超声波-微波协同法提取黄精多糖工艺研究[J].江苏农业科学,2013,41(6):231-233.

[4]张庭延,胡威,汪好芬,等.九华山黄精多糖的分离纯化及化学表征[J].食品科学,2011,32(10):48-51.

[5]夏晓凯,张庭廷,陈传平.黄精多糖的体外抗氧化作用研究[J].湖南中医杂志,2006,22(4):90,96.

[6]陆建平,张静,张艳贞,等.黄精多糖的功能活性及应用前景[J].食品安全质量检测学报,2013,4(1):273-278.

[7]赵瑞萌，孙庭阁，张玲.碱法提取黄精多糖及提取工艺流程的优化[N]，泰山医学院学报，2010,(01).

［8］ 鲍探. 灵芝孢子粉对帕金森病大鼠氧化应激反应和神经炎症的影响［J］实用药物与临床，2014,17(4):402-404.