儿童肺炎支原体肺炎肺泡灌洗液中细胞因子分析

郭伟，张同强，徐勇胜，刘福军

肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumoniae，MPP）是常见的儿童社区获得性疾病，发病率逐年增高，发病年龄呈逐年减小趋势［1］。尽管MPP大多预后良好，但部分病例可并发多器官、多系统损害，对儿童的生命健康造成很大的危害［2］。在有关MPP发病机制的研究中，细胞因子激活在肺部炎症反应中的作用受到越来越多的关注，肺炎支原体感染能诱导机体产生各种细胞因子，这些细胞因子通过与细胞表面受体结合，介导和调节免疫功能及炎症反应［3-4］。本研究以MPP患儿肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中细胞因子为切入点，旨在探讨MPP局部病变的发病机制。

1 对象与方法

1.1 研究对象 以2017年1月—12月间收入院的90例MPP患儿为研究对象，年龄1～15岁，性别不限。纳入标准：（1）符合MPP的诊断标准［5］。（2）胸部影像学表现为大片状阴影，占据1个或以上肺段范围。（3）无混合其他感染的依据，如衣原体、细菌、病毒等病原体感染。（4）不伴有肺结核、支气管哮喘等其他呼吸系统疾病。（5）既往未诊断患有免疫性疾病，无不明原因的长期发热、关节肿痛。（6）无近期或长期服用糖皮质激素史，近2个月内未应用免疫球蛋白、干扰素等免疫调节剂和免疫抑制剂。所有患儿按病程分为3组，每组30例。分为发病＜7 d组（A1组），发病7～14 d组（A2组），发病15～30 d组（A3组）。对照组（B组）为同期因支气管异物（21例）或者慢性咳嗽（9例）行纤维支气管镜检查的患儿，共30例，无退组现象。各组在年龄、性别差异无统计学意义（均P＞0.05），见表1。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有研究对象均取得家属同意后经纤维支气管镜进行局部肺泡灌洗，并留取BALF，对照组选择非病变部位进行局部灌洗，留取BALF。所有标本经离心留取上清液置-20℃冰箱保存待测。

1.2.2 细胞因子测定 采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测BALF中肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-6和IL-10的含量，试剂盒购自杭州联科生物技术股份有限公司，严格按照说明书进行操作。

1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，多组样本间均数比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），组内多重比较采用LSD-t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

MPP患儿BALF中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10水平较对照组明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。IFN-γ、IL-2水平在A1组最高，与A2及A3组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。TNF-α分泌高峰在A1组，高于A2及A3组（P＜0.01），A2与A3组相比无明显变化。IL-4与IL-6水平在A2组高于A1和A3组，差异有统计学意义（P＜0.05）。IL-10在A1及A2组明显高于A3组（P＜0.01），而A1组与A2组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

Tab.1 Expression of BALF inflammatory factors in treatment group and control group表1 治疗组与对照组BALF炎症因子表达结果（n=30）

3 讨论

肺炎支原体感染后，可促使淋巴细胞、中性粒细胞和上皮细胞产生大量细胞因子及炎症介质，从而调节人体免疫［4，6］。目前国内外文献对MPP在细胞因子方面的研究结论不一，争议颇多。Oishi等［7］研究证实，在肺炎支原体感染急性期，血清TNF-α、IL-18明显升高，恢复期明显降低。乔红梅等［8］研究发现MPP患儿BALF和血清中IL-6、IL-10、TNF-α水平在发病的急性期明显高于对照组，并且BALF中IL-6、IL-10、TNF-α浓度高于血清中相应细胞因子浓度，血清细胞因子与BALF中相应的细胞因子有相关性，提示患儿血清炎症水平间接反映肺部炎症情况，最能直接反映肺部炎症情况的却是BALF中的细胞因子水平。另有研究发现，在难治性MPP中，患儿BALF中细胞因子IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ较对照组明显升高，并且IL-2、IL-8持续高水平可能与难治性MPP患儿激素治疗后持续发热有关［9］。本研究中MPP组各期细胞因子较对照组明显升高，其中IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-8和IL-10变化与之有类似发现。Guo等［3］研究证实在BALF中，T细胞的激活在急性和严重MPP患儿的炎症反应中期发挥重要作用，并且IL-6水平与疾病的严重性及预后有关。康妍萌等［10］研究发现在严重MPP患儿BALF中IFN-γ、IL-4水平明显升高，IL-4/IFN-γ比例亦明显升高。本研究中BALF中IFN-γ、IL-4水平较对照组明显升高，提示上述细胞因子参与MPP疾病的发病过程，与上述研究相符合。

有研究证实血清及BALF中TNF-α在MPP急性期明显升高［8］，并且与病情严重程度呈正相关［11］。但急性期中具体何时分泌高峰少见相关研究。本研究中TNF-α在病程1周内达到高峰，后逐渐下降，至病程15～30 d仍高于对照组。陈丹等［12］研究发现急性期MPP患儿与普通肺炎患儿相比，血清IFN-γ明显升高；在儿童MPP急性期BALF中亦有相同发现［9］，与本研究结果相类似。本研究更进一步阐述了BALF中IFN-γ随病程的变化规律，为进一步了解MPP的发病机制提供了依据。IL-2细胞水平在不同的研究中结论不一。有报道在难治性MPP患儿BALF中IL-2持续高水平可能与患儿激素治疗后持续发热有关［9］，而史良俊等［13］研究发现难治性MPP组急性期及恢复期血清IL-2水平均显著低于MPP组和对照组，考虑与病例选择、标本收集、标本类型及测量方式不同等有关。本研究中MPP患儿发病1个月内BALF中IL-2水平明显升高，在发病1周时分泌达到高峰，后逐渐下降，提示细胞IL-2参与MPP发病过程。细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2主要由Th1分泌，能增强T细胞、NK细胞及B细胞等的免疫活性，本研究中细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2均在发病＜7 d时达到高峰，可间接提示MPP患儿在病程7 d内以Th1免疫反应为主。

Ye等［14］发现MPP患儿在急性期血清IL-4、IL-6水平明显高于恢复期，并且IL-4水平与疾病严重性有关，同时CD4+/CD8+T细胞比例明显升高，证明MPP患儿发病机制中Th1/Th2细胞平衡起重要作用。蓝引乐等［9］研究证实在难治性MPP患儿BALF中IL-4、IL-6和IL-10较对照组明显升高，本研究中选取的病例严重程度与上述研究相比相对较轻，但细胞因子IL-4、IL-6和IL-10有类似的研究发现，并且动态研究相关细胞因子随病程的变化规律，证实细胞因子IL-4和IL-6在病程7～14 d达到高峰。乔红梅等［8］研究发现MPP患儿BALF和血清中IL-6及IL-10水平在发病的急性期明显高于对照组，并且BALF中IL-6和IL-10浓度高于血清中相应细胞因子浓度。陈良东等［11］研究发现MPP患儿病情严重程度与IL-6浓度变化呈正相关，与T细胞亚群CD3+、CD3+CD4+细胞百分率及 CD4+/CD8+变化呈负相关。Ding等［4］研究发现血清细胞因子IL-10在儿童MPP患儿中明显升高，而轻度MPP患儿较重症MPP患儿明显升高，提示IL-10作为重要的细胞因子参与MPP的发病过程，与疾病的严重程度相关。IL-4、IL-6和IL-10主要由Th2分泌，主要参与体液免疫反应，而IL-4和IL-6分泌高峰在病程7～14 d，间接反映该期Th2介导的免疫反应可能在MPP的发病机制中起重要作用。

总之，本研究证实细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10参与MPP的发病机制，并且动态阐述了分泌水平随病程的变化规律，为进一步治疗MPP提供了理论依据。

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