大花还亮草中的黄酮类化合物

何 隽，邵 倩，付茂洁，艾洪莲

(中南民族大学 药学院，武汉 430074)

毛茛科(Ranunculaceae)翠雀属(Delphinium)植物主要分布于北温带，全球约有300种以上，我国约有113种，除台湾省和海南岛以外的其他各省均有分布[1]. 该属植物有20余种为药用植物，具有镇痛、镇静、祛风湿、治疗跌打损伤、止咳平喘、解热等功效[2]. 翠雀属植物含有与乌头碱结构类似的二萜生物碱，该类成分是翠雀属植物特征性化学成分，也被公认为该属植物的有效成分和毒性成分[3-5].

大花还亮草(D.anthriscifoliumvar.majus)为还亮草的变种，多年生草本植物，主要分布在贵州(剑河)、四川东部、陕西南部、湖北、安徽(霍山)，全草可供药用，有清热解毒、祛痰止咳的作用. 文献资料显示，大花还亮草中含有多种翠雀碱[6-8]，但还未见其非碱成分的报道. 通过对该种植物的化学成分研究，发现了6个黄酮类化学成分，通过波谱学数据及理化性质确定结构分别为：3,4,2′,4′-tetramethoxy dihydrochalcone (1)，4,2′,4′,6′-tetramethoxy dihydrochalcone (2)，3,4,2′,4′,6′-pentamethoxy dihydrochalcone (3)，6′-hydroxy-3,4,2′,4′,6′-tetramethoxy dihydrochalcone (4)，(-)-3′,4′,7-trimethoxyflavanone (5)，(-)-3′,4′,5,7-tetramethoxyflavanone (6)(图1).

图1 大花还亮草中的黄酮类化合物Fig.1 Flavonoids isolated from Delphinium anthriscifolium var. majus

1 实验部分

1.1 样品、试剂和仪器

大花还亮草(D.anthriscifoliumvar.majus)2016年采于湖北省神龙架，由中南民族大学艾洪莲博士鉴定，标本保存于中南民族大学药学院(标本号：SNU20160712).

1H和13C NMR由Bruker AM-600测定，内标为TMS，化学位移(δ)的单位是ppm，偶合常数(J)的单位为Hz；ESI-MS由API QSTAR Pulsar测定.

分离材料：柱层析硅胶(80～100及200～300 目)、薄层层析硅胶(GF254)和硅胶H由青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20(瑞士Amersham Biosciences公司)；反相硅胶Chromatores(日本Fuji公司)；Agilent 1260HPLC，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm × 150 mm)，粒径5 μm；半制备型色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(9.4 mm×150 mm)，粒径5 μm. 显色方法为254、365 nm紫外灯下观察荧光，10%硫酸乙醇溶液加热显色.

1.2 提取和分离

大花还亮草2.5 kg晾干后粉碎，用10 L甲醇室温浸提3次，每次24 h，浓缩物用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩后得浸膏70 g. 用100 g硅胶(80～100目)拌样以500 g硅胶(80～100目)进行柱层析，石油醚-丙酮梯度洗脱，用TLC进行检测，合并相同馏分，得到6个馏分.

第3馏分(7 g)，10 g(200～300目)硅胶拌样后以50 g(200～300目)硅胶柱层析，氯仿:丙酮(1:0～0:1)洗脱，得4个组分：3-1；3-2；3-3；3-4. 3-1进硅胶柱层析(200～300目)得到3-1-1和3-1-2两部分. 其中3-1-1再经硅胶柱层析(硅胶H)纯化，得到化合物3(7 mg)；3-1-2用半制备型HPLC纯化(65%乙腈/水)，得到化合物1(12 mg，13.5 min)和2(15 mg，16.2 min). 3-2段进行Saphadex LH-20(甲醇)层析，得到4个组分：3-2-1；3-2-2；3-2-3；3-2-4. 3-2-4用半制备型HPLC纯化(65%甲醇/水)，得到化合物5(5 mg，13.4 min)和6(6 mg，15.5 min).

第4馏分(9.8 g)，15 g(200～300目)硅胶拌样后以80 g(200～300目)硅胶柱层析，氯仿:丙酮(98:2)洗脱，得到化合物4(4.5 g).

2 结构鉴定

化合物1 C19H22O5黄色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.81(d,J=8.8 Hz,1H),6.78(d,J=9.9 Hz,1H),6.53(d,J=8.7 Hz,1H),6.45(s,1H),3.25(t,J=7.7 Hz,2H),2.95(t,J=7.7 Hz,2H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 199.6(s),164.4(s),160.8(s),148.7(s),147.1(s),134.7(s),132.8(d),121.1(s),120.2(d),111.9(d),111.2(d),105.1(d),98.4(d),55.9(q),55.8(q),55.6(q),55.5(q),45.6(t),30.3(t); ESI-MS m/z: 331[M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[9]一致，鉴定为3,4,2′,4′-tetramethoxy dihydrochalcone.

化合物2 C19H22O5; 黄色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.13(d,J=8.5 Hz,2H),6.81(d,J=8.5 Hz,2H),6.09(s,2H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.75(s,6H),3.03(m,2H),2.94(m,2H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 203.8(s),162.3(s),158.2(s),157.8(s),133.7(s),129.3(d),113.7(d),113.3(d),90.5(d),55.8(q),55.5(q),55.3(q),46.1(t),29.1(t); ESI-MS m/z: 331[M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[10]一致，鉴定为4,2′,4′,6′-tetramethoxy dihydrochalcone.

化合物3 C20H24O6; 黄色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 6.78(dJ=8.2 Hz,1H),6.75(overlapped,2H),6.09(s,2H),3.86(s,3H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.75(s,6H),3.05(dd,J=8.7,6.8 Hz,2H),2.95(dd,J=8.6,6.8 Hz,2H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 203.7(s),162.3(s),158.2(s),148.7(s),147.1(s),134.3(s),120.2(d),113.3(s),111.8(d),111.1(d),90.5(d),55.9(q),55.8(q),55.5(q),46.6(t),29.6(t); ESI-MS m/z: 361[M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[10]一致，因此鉴定为3,4,2′,4′,6′-pentamethoxy dihydrochalcone.

化合物4 C19H22O6; 黄色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 14.04(s,1H),7.26(s,1H),6.82(dJ=8.2 Hz,1H),6.79(overlapped,2H),6.08(d,J=2.4 Hz,1H),5.93(d,J=2.4 Hz,1H),3.88(s,3H),3.87(s,3H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.30(t,J=7.7 Hz,2H),2.95(t,J=7.7 Hz,2H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 204.6(s),167.7(s),166.0(s),162.7(s),148.7(s),147.2(s),134.3(s),120.1(d),111.8(d),111.1(d),105.7(s),93.6(d),90.8(d),55.9(q),55.8(q),55.6(q),55.5(q),46.0(t),30.3(t); ESI-MS m/z: 347[M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[11]一致，鉴定为6′-hydroxy-3,4,2′,4′,6′-tetramethoxy-dihydrochalcone.

化合物5 C19H20O6; 黄色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.00(overlapped,2H),6.90(d,J=7.9 Hz,1H),6.16(d,J=2.4 Hz,1H),6.10(d,J=2.4 Hz,1H),5.36(dd,J=13.3,2.8 Hz,1H),3.93(s,3H),3.91(s,6H),3.83(s,3H),3.05(dd,J=16.5,13.3 Hz,1H),2.78(dd,J=16.5,2.8 Hz,1H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 189.5(s),166.0(s),165.0(s),162.3(s),149.3(s),149.2(s),131.1(s),118.8(d),111.0(d),109.3(d),105.6(s),93.5(d),93.2(d),79.2(d),56.2(q),56.0(q),55.9(q),55.6(q),45.5(t); ESI-MS m/z: 345[M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[12]一致,故鉴定为(-)-3′,4′,5,7-tetramethoxyflavanone.

化合物6 C18H18O5; 黄色粉末;1H NMR(600 MHz,CDCl3)δ: 7.88(d,J=8.7 Hz,1H),7.01(overlapped,2H),6.91(d,J=8.1 Hz,1H),6.63(dd,J=8.8,2.4 Hz,1H),6.51(d,J=2.4 Hz,1H),5.42(dd,J=13.4,2.8 Hz,1H),3.93(s,3H),3.91(s,3H),3.84(s,3H),3.07(dd,J=16.9,13.4 Hz,1H),2.82(dd,J=16.9,2.8 Hz,1H);13C NMR(150 MHz,CDCl3)δ: 190.8(s),166.2(s),163.5(s),149.4(s),149.2(s),131.2(s),128.8(d),118.9(d),114.8(s),111.1(d),110.3(d),109.3(d),100.9(d),80.0(d),56.0(q),55.9(q),55.7(q),44.3(t); ESI-MS m/z: 315[M + H]+. 以上波谱数据与参考文献[13]一致，故鉴定为(-)-3′,4′,7-trimethoxyflavanone.

3 结语

翠雀属植物的特征性化学成分为二萜生物碱，也被公认为该属植物的有效成分和毒性成分. 文献调研发现很少该属植物的非碱成分报道[14]. 采用现代色谱技术从大花还亮草(D.anthriscifoliumvar. majus)的地上部分中分离纯化获得到6个黄酮类化学成分，其中化合物1～6均为首次从该植物中分离得到. 本研究成果丰富了翠雀属植物的化学成分的结构类型，可为进一步开发这一属植物提供新的物质基础.

参 考 文 献

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