脐血干细胞对失代偿性肝硬化凝血功能和血流动力学的影响

杨文义，韩大正，武利萍，闫春晓，黄祎诺，谭莉霞，王航宇，董勇，杨国威

(河南大学第一附属医院消化内科，河南 开封 475000)

肝硬化（Liver cirrhosis，LC）是由不同病因长期作用于肝脏引起的慢性、进行性、弥漫性肝病的终末阶段，是以肝组织弥漫性纤维化、假小叶和再生结节形成为特征的慢性肝病[1，2]。当疾病处于代偿期时，可无明显症状，当疾病进展至失代偿期时，以肝功能减退和门静脉高压为主要特征，常出现消化道出血、肝性脑病、肝肾综合症、继发感染等严重并发症，该病临床救治困难，病死率高，严重影响患者的生活质量[3－5]。对于失代偿期肝硬化患者，常规的保肝治疗效果不明显，死亡率很高，而肝移植作为肝硬化失代偿期患者唯一的根治手段，因供体不足、风险较高、免疫排斥、费用高昂等问题难以广泛开展[6，7]。目前，干细胞研究在医学再生领域取得了令人瞩目的成就，其中，脐血干细胞是一类具有多向分化潜能的原始祖细胞，可以分化为多种组织如软骨组织、骨组织、脂肪组织以及骨髓组织和血液系统成分，研究发现，将脐血中的干细胞分离后移植到肝脏内，可分化为有功能的实质细胞，以替代受损的肝细胞，重构肝脏的结构和功能[8－10]。本研究通过对失代偿期肝硬化患者进行脐血干细胞移植，探讨脐血干细胞治疗失代偿期肝硬化的临床效果以及对凝血功能和血流动力学的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院2013年6月至2016年12月期间确诊收治的肝硬化失代偿期患者48例，所有病例均符合失代偿期肝硬化诊断标准，所有患者根据自愿随机分为观察组和对照组，每组24例，其中，观察组，男 18例，女 6例；平均年龄（53.7±9.5）岁；乙肝肝硬化 18 例，酒精性肝硬化 3，胆汁性肝硬化2例，丙肝肝硬化1例；肝功能Child分级：B级11例，C级13例。对照组，男16例，女8 例；平均年龄（55.3±10.2）岁；乙肝肝硬化 19 例，酒精性肝硬化2，胆汁性肝硬化2例，丙肝肝硬化1例；肝功能Child分级：B级12例，C级12例。患者排除标准：⑴肝癌或其他恶性肿瘤；⑵严重的脏器功能衰竭；⑶严重的细菌感染；⑷妊娠期妇女。本研究经本院伦理委员会同意和批准，术前均告知患者及家属并签署知情同意书。

1.2 脐血干细胞制备 选择本院收治的健康产妇，排除病毒性肝炎、艾滋病、梅毒等传染病者，无病理妊娠，经产妇同意，胎儿娩出后断脐，封闭式采血法采集健康、足月分娩的胎儿挤带血100ml，采用宁夏中联达生物有限公司生产的脐带血细胞处理试剂盒进行分离、纯化，并对干细胞计数，制成干细胞悬液 10ml，每份干细胞数量为 1×108～3×108个，同时留样做细菌、内毒素、支原体等检测。

1.3 治疗方案 观察组患者采取B超定位或在透视下经皮经肝穿刺门静脉右支，穿刺成功后放置导管端于门静脉主干造影，造影后经门静脉主干灌注脐血干细胞悬液10ml，缓慢灌注20～30min，术毕拔管，穿刺点加压包扎后返回病房，术侧下肢制动24h，监测生命体征。对照组患者给予常规保肝治疗。

1.4 观察指标 分别抽取两组患者手术当天和术后1个月、3个月、6个月的晨起空腹静脉抗凝血，室温静置30min，3000rpm，离心15min，收集血清，保存于－80℃，根据试剂盒说明书，采用AU5800全自动生化分析仪（贝克曼库尔特公司，所用试剂盒均有上海长征提供）进行血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)、甲胎蛋白(AFP)、总胆红素(TB)和血清蛋白(ALB)水平的检测；根据试剂盒说明书，采用CA－500全自动血凝仪配套的凝血指标检测试剂盒（日本Sysmex公司）进行凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血时间(TT)的检测；采用彩色多普勒超声诊断仪检测患者门静脉内径、门静脉内压、门静脉血流量和门静脉血流速度；采用多层螺旋CT机对两组患者进行常规全肝CT平扫，经软件处理后，自动快速获取肝脏体积。

1.5 统计学分析 采用SPSS 18.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料以率(%)表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者肝功能变化 对两组患者治疗前后肝功能检测结果显示，与治疗前比较，两组患者治疗后，ALT、AST 和 TB 水平均有下降 （P＜0.05），ALB 和 AFP 水平均有升高（P＜0.05）， 且观察组患者肝功能改善明显优于对照组，在同时间点的指标比较差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者肝功能变化

2.2 两组患者凝血功能变化 对两组患者治疗前后凝血功能检测结果显示，与治疗前比较，从治疗后1个月开始，观察组患者PT、APTT和TT均显著下降，Fg水平显著升高，治疗3个月和6个月各项指标改善更为显著，（P＜0.05），而对照组患者PT、APTT、Fg和 TT 指标变化不显著 （P＞0.05），见表2。

2.3 两组患者血流动力学变化 B超结果显示，与治疗前相比，观察组患者门静脉内径减小，门静脉内压和门静脉血流量下降，门静脉血流速度升高（P＜0.05），而观察组患者血流动力学变化不显著（P＞0.05），见表 3。

2.4 两组患者肝脏体积变化 CT平扫结果显示，与治疗前比较，两组患者治疗后肝脏体积均有增大趋势，且观察组患者肝脏体积改善明显优于对照组，两组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），见表4。

3 讨论

众所周知，肝硬化是我国消化系统常见病和多发病，具有病情重、并发症多、临床救治困难、病死率高的特点[11]。肝硬化进展至失代偿期后可出现严重肝功能损害、腹水、食道胃底静脉曲张破裂出血、脾脏肿大、自发性腹膜炎（SBP）、肝肾综合征（HRS）等严重并发症，是损害我国国民健康的疾病之一[12-14]，一旦患者进入肝硬化失代偿期，若不及时治疗将最终导致肝功能衰竭。

表2 两组患者凝血功能变化

表3 两组患者血流动力学变化

表4 两组患者肝脏体积变化（±s，cm3）

表4 两组患者肝脏体积变化（±s，cm3）

注：对照组与治疗前比较，*P＞0.05，观察组与与治疗前比较，*P＜0.05，与对照组治疗后同时点比较，#P＜0.05。

24 24组别 例数(n)对照组观察组治疗前 治疗后1个月 治疗后3个月 治疗后3个月901.33±103.27 909.86±106.32 926.53±112.31*949.21±116.77*#941.23±118.03*992.57±125.36*#971.32±121.27*1041.45±145.86*#

近年来，以干细胞为基础的细胞治疗为失代偿期肝硬化患者提供了新的治疗方法研究表明，干细胞在特定环境下可被诱导分化成肝细胞，可促进肝脏自我更新、减轻肝脏的纤维化，参与损伤肝脏的修复和重构[15]。脐带血中含有丰富的造血干细胞和间充质干细胞，间充质干细胞在一定的条件下能向肝细胞定向分化[16]。脐血干细胞比骨髓干细胞抗原性更弱，更为原始，增殖能力更强，在肝脏微环境中有极强的向肝系细胞分化的能力，具有长时间持续扩增的能力，而且治疗安全、有效，因此成为干细胞移植的重要来源之一。另外，由于脐带血具有来源丰富、采集方便、无移植抗宿主反应和伦理学问题等优点，受到广大患者和临床研究者的欢迎[17，18]。目前，以干细胞为基础的细胞治疗慢性肝病多经肝动脉、门静脉、外周静脉、经脾内注射等途径，因经门静脉或肝动脉介入移植到达肝内的干细胞数量较多、疗效较肯定及并发症少等优势，故临床常见的干细胞移植途径主要经门静脉和肝动脉途径[19，20]。

本研究通过对失代偿期肝硬化患者进行门静脉内脐血干细胞移植，探讨脐血干细胞治疗失代偿期肝硬化的临床效果以及对凝血功能和血流动力学的影响，结果显示，在干细胞移植1个月后，观察组患者ALT、AST和TB水平较对照组治疗后显著下调，而ALB和AFP水平均有升高，说明观察组患者肝功能得到了明显改善。凝血功能方面，观察组患者PT、APTT和TT均显著下降，Fg显著升高，而对照组患者上述指标较治疗前没有显著的变化，这一结果说明采用脐血干细胞移植治疗可以改善失代偿期肝硬化患者的凝血功能。此外，在血流动力学方面，与治疗前相比，观察组患者门静脉内径减小，门静脉内压和门静脉血流量下降，门静脉血流速度升高，而对照组患者血流动力学变化不显著，说明观察组患者采用脐血干细胞治疗后显著改善了患者的血流动力学指标。

综上所述，脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化可以有效改善患者肝功能、凝血功能和静脉血流情况，进而改善肝脏合成功能，促进肝组织再生，改变门静脉血流动力学并促进新血管生成，起到暂时性的肝脏支持作用，为临床肝病的治疗提供了一定的指导作用。

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