宫颈鳞癌及CIN中FOXP3的表达及其意义

袁利

（遵义医学院附属医院妇科 贵州 遵义 563000）

宫颈癌在全球妇女癌症死亡率中居第二位，也是与病毒感染密切相关的癌症之一。目前认为，免疫逃逸是肿瘤的发生发展的重要机制，而越来越多的证据表明CD4+CD25+Treg在肿瘤免疫逃逸中扮演了重要角色。叉样头转录因子3（forkheadbox protein 3，FOXP3）是CD4+CD25+Treg的特异性标志，并在其分化发育及介导的肿瘤免疫逃逸中发挥关键作用。本研究意在探讨FOXP3在宫颈癌及癌前病变中的表达及其意义。

1.材料与方法

1.1 标本采集

收集2011年10月—2012年6月首次在遵义医学院附属医院妇科门诊接受宫颈活检患者共67例，经遵义医学院附属医院病理科确诊宫颈鳞癌26例（Ⅰ级5例，Ⅱ级14例，Ⅲ级7例），癌前病变21例，慢性宫颈炎20例。

1.2 试剂

鼠抗人FOXP3单克隆抗体（工作浓度为1：50）购自美国abcam公司；Envision试剂盒及其他配套试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 方法

将病理科存档蜡块作4μm厚连续切片，行HE染色重新阅片进一步明确诊断，Envision免疫组化染色。免疫组化实验过程严格按照说明书操作步骤进行，DAB显色，苏木精复染。用淋巴结组织染色作阳性切片对照。组织抗原修复采用高压处理。

1.4 结果判断

FOXP3蛋白阳性信号染色呈棕黄色或棕褐色，定位于细胞核。免疫组织化学染色强度按如下标准进行评分：着浅黄色为1分，着棕黄色为2分，着棕褐色为3分。随机选择10个高倍视野，每个视野计数100个细胞，共计1000个细胞，计算出每张切片上的阳性表达百分比(公式为：阳性细胞数/总细胞数@100%)。阳性细胞数10%～30%为2分，阳性细胞数31%～50%为3分，阳性细胞数＞51%为4分；无明显阳性细胞或不论染色强度只要阳性细胞数＜10%为阴性(-)，3分为(+)，4～5分为(6)，6～7分为(7)，+、6、7均归为阳性表达[4]。综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行半定量处理。

1.5 统计学方法

所得数据采用SPSS17.0统计软件对相关数据进行分析，计数资料采用等级相关秩和检验，两者之间的相关性采用spearman相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 观察切片

FOXP3阳性反应呈棕黄色或棕褐颗粒，表达于淋巴细胞，定位在细胞核，集中在癌巢周围的间质中，宫颈鳞癌及CIN细胞中无表达。

2.2 慢性宫颈炎组织中可见FOXP3呈弱表达或无表达，宫颈鳞癌及CIN中见FOXP3呈强表达；宫颈鳞癌组织中FOXP3的表达高于CIN组织及慢性宫颈炎组织（P＜0.05），CIN组织中FOXP3表达高于慢性宫颈炎组（P＜0.05）。

2.3 尚不能认为宫颈鳞癌中FOXP3的表达与组织学分级及年龄无关（P＞0.05）。(见表1、表2)。

表1 FOXP3在各宫颈组织中的表达情况Tab.1 The results of FOXP3 expression in different group

表2 FOXP3在宫颈癌组织中阳性表达与病理特征的关系Tab.2 In cervical squamous carcinoma, the comparision of the positive expression of FOXP3 in different histological grade and age

3.讨论

目前，已在动物模型及多种人类恶性肿瘤中检测到FOXP3的表达增加，且数目与肿瘤的进展程度和预后、生存率等呈负相关[1]。去除Tregs或封闭其抑制功能，可增强抗肿瘤免疫反应[2]。FOXP3在某些恶性肿瘤中除表达于CD4+CD25+Treg外，其在肿瘤细胞上也有表达，如在胰腺导管细胞癌[3]、黑色素瘤[4]、食道鳞癌[5]等肿瘤的癌细胞中，均有Foxp3阳性表达。同时在肺癌、乳腺癌、结肠癌等细胞株上也观察到有Foxp3的表达[6]。国内在对皮肤癌及癌前病变中FOXP3的表达情况进行研究时发现，Foxp3+Tregs和Foxp3在皮肤癌前病变和恶性肿瘤中均有表达，但在正常表皮上未见表达。且Foxp3在皮肤肿瘤中的阳性率与病情的恶性程度呈现相关性[7]。

目前宫颈癌中FOXP3表达特异性定位于胞浆或薄膜上及定位于细胞核均有报道，本实验与后者相符，FOXP3在宫颈鳞癌中仅表达于淋巴细胞，癌细胞中无表达，定位于细胞核。现有研究表明，FOXP3在慢性宫颈炎、CIN及宫颈癌中表达逐渐加强，本实验也提示宫颈癌中FOXP3的表达与其余两组存在差异（P＜0.05）。通过检测宫颈鳞癌局部FOXP3表达增强，可能提示其局部CD4+CD25+Treg数量增多或功能加强，这能使机体局部的免疫抑制功能加强，使其处于一种高度的免疫耐受状态，导致肿瘤能在一定程度上逃避免疫攻击。

在对CIN中局部免疫的研究中也发现，CINⅠ与CINⅡ之间的变化无统计意义，而CINⅢ与CINⅠ、CINII比较有明显差异。对FOXP3在CIN中的表达进行研究时发现，宫颈炎、CINΙ级及CINⅡ级各组病变组织中Foxp3 表达无差异（P＞0.05），而CINⅢ级与其他各组间Foxp3表达均有统计学差异（P＜0.05）[9]。

[1]Hiraoka N，Onozato K，Kosuge T，et al.Prevalence of FOXP3+ regulatory T cells increases during the progression of pancreatic ductal adenocarcinoma and its premalignant lesions[J].Clin Cancer Res，2006，12（18）:5423-5434.

[2]Nagai H，Horikawa T，Hara I，et al.In vivo elimination of CD25+ regulatory T cells leads to tumor rejection of B16F-10 melanoma，when combined with interleukin-12 genetransfer[J].Exp Dermatol，2004，13（10）:613-620.

[3]Sebastian Hinz，Laia Pagerols-Raluy，Hans-Heinrich Oberg，et al. Foxp3 expression in pancreatic carcinoma cells as a novel mechanism of immune evasion in cancer[J].Cancer Res，2007，67（17）:8344-8350.

[4]Lisa M.Eber，Bee Shin Tan，Judy Browning，et al.The Regulatory Tcell-associated transcription factor FoxP3 is expressed by tumor cells [J].Cancer Res，2008，68（8）:3001-3009.

[5]Xue L，Lu H Q，He J，et al.Expression of FOXP3 in esophagial squamous cell carcinoma relating to the clinical data[J].Dis Esophagus，2010，23（4）:340-346.

[6]Vaios Karanikas，Matthaios Speletas，Maria Zamanakou，et al.Foxp3 expression in human cancer cells[J].Journal of Translational Medicine，2008，6（1）:19.

[7]刘干，黄堒.皮肤鳞癌及癌前病变中Foxp3蛋白的表达[J].重庆医科大学学报，2011，36（6）：660-663.