HBsAg阳性肝癌患者ALK表达及预后影响因素分析

2018-06-19阮雅君潘登张雯静毛海香

现代实用医学 2018年5期

阮雅君，潘登，张雯静，毛海香

肝癌是世界范围内发病率及死亡率较高的恶性肿瘤，慢性肝炎及肝硬化是其致病的主要因素。近年来，随着医学研究的不断深入，肝癌的治疗取得了较为显著的成果，但患者治疗后易复发，5年总生存率普遍较低，严重威胁我国居民的生命和健康。间变性淋巴瘤激酶（ALK）属于胰岛素受体酪氨酸激酶超家族，它的激活可影响患者肿瘤细胞的增殖分化与凋亡，在肿瘤发生、发展中起着重要作用。迄今为止，ALK表达异常已在肺癌、乳腺癌及结肠癌中有较多的报道[1-2]，但肝癌中ALK表达的研究还比较少，因此，本研究回顾分析乙肝表面抗原（HBsAg）阳性肝癌患者ALK表达的情况及其预后影响因素，旨在为肝癌患者的治疗提供理论参考依据，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料收集 2010年 1月至2012年12月宁波市临床病理诊断中心经术后确诊为HBsAg阳性的154例肝癌患者的肿瘤组织标本，所有病理标本均经10%甲醛固定，石蜡包埋，并回顾性分析患者的临床病理资料。其中男98例，女56例；年龄33～82岁，平均（57.65±19.40）岁。纳入标准：（1）符合肝癌病理及组织学诊断标准；（2）经血清学检测为HBsAg阳性；（3）病理学标本及临床资料完整。排除合并其他恶性肿瘤者及免疫系统疾病者。

1.2试剂与方法

1.2.1主要试剂二甲苯（杭州双林化工试剂有限公司，106-42-3），二氨基联苯胺（DAB，北京中杉金桥生物技术有限公司，PV6000），兔抗人ALK单克隆抗体（福州迈新生物技术开发有限公司，RAB-0086），II抗 SP免疫组化试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司，PV6000）等。

1.2.2方法免疫组化方法：对肿瘤组织标本蜡块进行4 m厚连续切片，将切片于二甲苯中进行3次脱蜡，5 m in/次，依次过100%、90%、70%梯度乙醇水化处理各2 min；切片浸入3%的过氧化氢去离子水中3m in，消除内源性过氧化物酶，乙二胺四乙酸（EDTA、pH值8.0）修复液常规修复，以充分暴露抗原位点；自然冷却后，室温下加封闭液封闭15m in，兔抗人ALK单克隆抗体（1∶50）4℃孵育过夜；第2天，磷酸盐缓冲液（PBS）漂洗切片3次，5m in/次，然后加II抗孵育15m in，PBS漂洗 3 次，5 m in/次；加链霉卵白素孵育15min，PBS漂洗3次，5min/次；DAB显色10 m in，终止显色；苏木素复染，盐酸乙醇固定，封片胶封片；观察肿瘤组织ALK阳性表达情况。ALK免疫组化阳性判定方法：ALK阳性表达表现为胞浆内呈现棕褐色着色，按阳性细胞百分率判断ALK表达情况，阳性细胞＜10%为ALK阴性表达，阳性细胞≥10%为ALK阳性表达。

1.3随访将患者手术日期作为随访起始日期，患者死亡或2017年12月30日作为随访截止日期，观察患者5年总生存率及5年总生存时间（OS）。

1.4统计方法采用 SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差表示，采用检验；计数资料以率表示，采用2检验；预后影响因素采用Cox多因素分析＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.2影响患者预后的单因素分析对可能影响患者5年总生存率的单因素进行分析，结果表明ALK表达情况、肝功能Child-Pugh分级、肝癌结节数、肿瘤直径及术后辅助治疗是影响患者5年总生存率的因素（均＜0.05）。见表1。

2.3Cox多因素回归分析以患者5年总生存率为因变量，以单因素分析中有统计学意义的因素为自变量，进行Cox多因素回归分析，结果表明ALK表达情况、肿瘤直径及术后辅助治疗是影响患者5年总生存率的主要因素（均＜0.05）。见表 2。

3　讨论

肝癌是肝胆外科常见疾病，其发生、发展与多种基因突变及新生血管增生异常等有关。尽管目前临床对其治疗的研究已取得较大进展，但其发病机制尚不完全清楚，患者总生存率提高甚微，因此加强肝癌病因学研究，探索肝癌分子靶向治疗的潜在靶点至关重要。近年来，ALK抑制剂在 EML4-ALK阳性非小细胞肺癌（NSCLC）治疗中的高有效率[3]，使ALK在肿瘤细胞中的表达成为临床上研究的热点。因此，本研究探讨HBsAg阳性肝癌患者ALK的表达情况及预后影响因素，以期为肝癌个体化治疗提供理论参考。

ALK蛋白位于细胞膜上，正常情况下，细胞外的内源性配体肝素结合细胞因子（MK）和多效生长因子（PTN）将2个ALK蛋白偶联，激活胞内PI3K/AKT和MAPK通路，促进细胞生长。ALK蛋白主要在人体胚胎期表达，以促进神经细胞增殖，当神经系统发育完全后，进入休眠状态，除神经源性细胞外，人体其他细胞基本不表达ALK，如果ALK在错误的时间、部位表达，便会引发疾病[4]。本研究探讨了ALK在HBsAg阳性肝癌组织中的表达情况，发现ALK蛋白阳性表达率为30.52%，提示ALK在HBsAg阳性肝癌患者肿瘤组织中表达升高，有望成为HBsAg阳性肝癌分子靶向治疗的靶点及患者个体化治疗的依据。

另外，本研究在分析影响患者预后的因素中发现，ALK表达情况、肿瘤直径及术后辅助治疗是影响患者5年总生存率的主要因素（均＜ 0.05）。刘建化等[5]在ALK蛋白与HBsAg阳性肝癌临床病理相关性的研究中指出，患者ALK表达与肿瘤结节数及微转移等密切相关，提示ALK在肝癌的发生发展、浸润、转移过程中发挥着非常重要的作用，可能是由于ALK阳性的肝癌组织具有更强的侵袭能力，导致患者预后较差。另外，随着患者肿瘤直径的增加，患者肝脏代偿能力降低，考虑到肝切除术后残余肝不能满足生理功能的需要，患者常不能耐受根治性切除的范围，导致肿瘤切除不完全或手术切缘与肿瘤距离过小，患者术后更易复发，且肿瘤直径越大，肿瘤细胞向周边转移的机会越多，导致患者预后较差。肝癌具有起病隐匿及发展迅速等特点，一般发现时癌细胞已经发生转移，且外科手术在切除肿瘤病灶时，对肿瘤的推挤可能导致肿瘤组织和细胞脱落，并通过血液循环传播至其他组织。因此，术后预防性行肝动脉化疗栓塞术（TACE）有助于清除转移或脱落的癌细胞，起到预防复发及延长生存期的作用[6]。化疗是一种全身治疗的手段，给药后，药物会随着血液循环遍布全身大部分器官和组织，杀伤转移或脱落的癌细胞，提高患者预后。因此，术后可根据患者具体情况选择相应的辅助治疗。