低深度高通量测序技术在早期流产中的应用

罗家宏

（广东省江门市妇幼保健院医学遗传中心 江门529000）

随着环境变化及社会压力的增加，早期流产发病率呈逐年增加的趋势。相关临床研究显示[1]，早期流产多因染色体异常所致，占比率高达近60%。常规染色体分析是诊断早期流产的金标准，但其对样本、操作流程的要求较高，检出率也往往较低[2]。低深度高通量测序技术可在24 h内对机体的23对染色体进行碱基信息分析，可发现微量染色体缺失、重排等[3]。本研究观察低深度高通量测序技术在早期流产中的应用。现汇报如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2017年1月～2018年1月我院收治的265例早期流产患者（99例染色体核型异常）作为研究对象，本研究经医院伦理委员会批准。患者年龄 20～42岁，平均（26.68±6.26）岁；孕周6～28周，平均（13.36±2.14）周。入组标准：超声检查显示胚胎停止发育者；患者均签署检查同意书；无妊娠期感染者；无有害物质接触者。排除标准：患者未签署检查同意书；妊娠合并感染者；伴有害物质接触者；临床资料不完整或失访者。

1.2 治疗方法 清宫术后取患者绒毛组织或胚胎组织10 mg，提取患者DNA，采用紫外分光光度计测定DNA纯度浓度，琼脂糖电泳测定DNA片段的完整性。取50 ng基因组DNA，随机打断，末端修复，加A连接进行构建，测定DNA片段定量浓度及纯度，采用Bioelectron SEQ 3000基因测序进行低深度高通量测序技术分析，后将数据进行生物信息分析，序列对比软件对染色体进行核型异常判断。

1.3 观察项目 记录分析染色体异常的类型及检出率情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0软件分析观察项数据，采用百分率（%）表示数据，计数资料通过χ2检验表示。P＜0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 99例低深度高通量基因测序异常结果 265例早期流产患者中出现99例染色体核型异常者，发生率为37.36%，低深度高通量测序技术对染色体核型异常的检出99例，检出率为100.0%。其中染色体异常核型分布：16三体12例（12.12%）、13三体6例（6.06%）、21三体 9例（9.09%）、2三体 3例（3.03%）、3三体4例（4.04%）、8三体3例（3.03%）、10三体4例（4.04%）、22三体3例（3.03%）、常染色体缺失或 重 排 27例 （27.27%）、45,X 21例（21.21%）、47,XYY 3 例 （3.03%）、47,XXX 4 例（4.04%）。见表1。

表1 99例低深度高通量基因测序异常结果（%）

2.2 染色体核型异常不同检测方法比较 低深度高通量测序对核型异常检出率为100.00%，显著高于常规染色体分析的74.75%（P＜0.05），差异具有统计学意义。见表2。

表2 染色体核型异常不同检测方法比较

3 讨论

早期流产是威胁妇女健康与安全的妊娠病理性疾病，胎盘染色体异常是引起妊娠期胚胎停止发育的关键因素之一，染色体异常所致的自然流产率高达60%，严重影响其生存质量[4]。以往临床上主要采用常规染色体核型分析检测技术对早期流产患者组织进行分析，但其对样本处理的要求较高，操作较为复杂，培养时间也较长，同时具有一定程度的培养失败率[5]。因此，寻找敏感性高、简便迅速的染色体异常检测方法对指导临床妊娠具有较高的价值。

本研究观察低深度高通量测序技术在早期流产中的应用，其结果显示：265例早期流产患者中出现99例染色体核型异常者，发生率为38.67%；其中染色体异常核型分布：16三体12例（12.12%）、13三体 6例（6.06%）、21三体 9例（9.09%）、2三体 3例（3.03%）、3三体4例（4.04%）、8三体3例（3.03%）、10三体4例（4.04%）、22三体3例（3.03%）、常染色体缺 失 或 重 排 27例 （27.27%）、45,X 21例（21.21%）、47,XYY 3 例 （3.03%）、47,XXX 4 例（4.04%）。低深度高通量测序对核型异常检出率为100.00%显著高于常规染色体分析的74.75%，比较具有统计学差异（P＜0.05）。因此，低深度高通量测序技术较常规染色体分析对早期流产患者基因组信息的检出率较高。这一结果与国内相关研究相一致[6～7]。低深度高通量测序技术具有较高的检测能力，其可将上万个测序技术在同一个平台进行。结合生物学信息，可一次性检测23对染色体，同时可发现100 kb染色体缺失或重排等，从而避免常规染色体核型分析的细胞培养，对样本要求低，取材也较为方面，重复检测率也较高。本研究发现，通过低深度高通量测序技术对染色体三体的检出率较高，这可能与孕妇卵巢功能老化，黄体酮水平降低，卵泡纺锤体减弱，从而引起卵细胞在有丝分裂过程中出现错误、分离，染色体三倍体的发生率也较高。

综上所述，低深度高通量测序技术较常规染色体分析对早期流产患者基因组信息的检出率较高，值得临床应用和推广。

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