血液透析对尿毒症患者Treg与Th17水平失衡的影响分析

王明波，谭永顺，王自良，王 敏

(山东省莱芜市人民医院：1.肾内科；2.检验科 271199)

尿毒症患者由于慢性肾衰竭通常需要接受维持性血液透析进行肾替代治疗。血液透析不仅可有效清除患者体循环中的毒素，还有助于缓解尿毒症相关并发症，延长患者的生存时间，其在尿毒症患者中的应用优势已得到临床公认[1]。

尿毒症患者体循环中炎性细胞因子水平轻度增高，机体往往处于低强度进展的微炎症状态，导致多器官、多系统发生免疫病理损伤。调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)是一群具有免疫抑制功能的T细胞，在维持机体免疫稳定、防止自身免疫性疾病方面具有重要的意义[2]。辅助性T细胞17(Th17)则是重要的促炎性细胞，Treg/Th17比例失衡可导致血管钙化，增加动脉血管粥样硬化风险，对尿毒症患者预后不利。维持性血液透析对尿毒症患者Treg和Th17水平是否有影响的相关研究较少[3]。本研究探讨了维持性血液透析对尿毒症患者Treg和Th17的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年2月至2017年2月在本院治疗的尿毒症患者185例为研究对象，其中行血液透析治疗患者102例为透析组，未行血液透析治疗患者83例为非透析组。纳入标准：(1)近2周内无急性感染；(2)近6个月内未使用过激素和免疫抑制剂；(3)近1个月内未使用过他汀类药物、左旋卡尼汀、噻唑烷二酮类降糖药；(4)患者及家属知情同意并签署同意书,本研究通过伦理委员会认证。排除标准：(1)近3个月有手术、外伤史；(2)有缺血性心脏病、脑血管病、血液病、肝炎、恶性肿瘤、艾滋、精神疾病等；(3)资料不全者。同时选取在本院门诊做健康体检的志愿者100例作为对照组。3组受试者年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 3组受试者一般资料比较

1.2方法 非透析组患者给予药物保守治疗，透析组在药物治疗基础上接受血液透析，经上肢动静脉内瘘透析，应用聚砜膜透析器、碳酸氢盐透析液，流量500 mL/min。血流量200～250 mL/min，时间4～5 h，视病情每周透析2～3次，透析治疗时间3 个月以上。3组研究对象均于清晨取空腹肘前静脉血置入肝素抗凝试管，离心分离血清后采用双抗体酶联免疫吸附法检测IL-10、IL-6、IL-17，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。采用Ficoll 淋巴细胞分离液密度梯度离心分离血中单个核细胞，以1640培养液混悬，调整细胞浓度至每毫升3×106个，离心后取上清液冻存于-80 ℃冰箱待测。采用美国贝克曼库尔特公司流式细胞仪检测 Treg，将CD4抗体、CD25抗体对细胞表面染色，加入Foxp3抗体检测，经PBS洗涤后重悬后应用流式细胞仪分析。检测Th17时，在单个核细胞中加入CD4单抗，置于4 ℃培养20 min，再进行固定、透化处理，加入IL-17单抗进行检测。设置同型对照确保抗体特异性和有效补充。

2 结 果

2.1各组Treg、Th17水平比较 对照组Treg和Th17水平明显低于非透析组和透析组(P<0.05)，透析组Treg和Th17明显低于非透析组(P<0.05)，见表2。

表2 各组Treg、Th17水平比较

2.2各组IL-10、IL-6及IL-17比较 对照组IL-10水平明显高于非透析组和透析组(P<0.05)，而IL-6和IL-17明显低于非透析组和透析组(P<0.05)；透析组IL-10明显高于非透析组(P<0.05)，而IL-6和IL-17明显低于非透析组(P<0.05)，见表3。

表3 各组IL-10、IL-6及IL-17比较

3 讨 论

尿毒症是各种肾病的终末阶段，肾脏功能几乎丧失，体内毒素大量蓄积。尿毒症患者在接受血液透析治疗后体循环中的大、中分子毒性物质被滤除，在一定程度上起到代替肾脏的作用，使患者的生存时间得到延长[4]。但仍有相当一部分患者由于血管钙化、心血管并发症而死亡。尿毒症患者的肾功能损伤呈慢性、进行性、不可逆性加重，经过较长时间的发展最终进展至肾衰竭，在这一病变过程中患者存在着多器官、多系统的免疫病理损伤，尤其以心肌损伤最常见[5]。肾性高血压、酸中毒、高钾血症、水钠潴留、肾性贫血、毒性物质蓄积等均可导致心肌损伤[6]。有研究认为，心血管并发症是引起尿毒症血液透析患者死亡的独立危险因素[7]。

单个核细胞是一种重要的免疫性活性细胞，分离得到的Treg和Th17与机体免疫功能存在着密切的关系[8]。单个核细胞受到刺激活化后Treg和Th17比例失衡，诱导相关非免疫细胞的功能变化，参与心血管疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病的发生和发展[9]。免疫激活后机体处于炎性反应，导致细胞因子水平升高，引起左心室重构、心肌收缩力下降、β-肾上腺素受体失耦联等一系列病理改变，从而引发或加重心血管病变，增加尿毒症患者的死亡风险[10]。

Treg是抑制性T细胞亚群，可抑制CD4+、CD8+的活化、增殖，起到调节免疫应答的作用[11]。Th17具有强大的促炎性作用，通过分泌细胞因子IL-17发挥其作用[12]。本研究中尿毒症患者的Treg、Th17水平明显高于对照组，提示尿毒症患者机体的免疫抑制功能下降，大量的效应性CD4+T细胞活化，进而引起IL-6、IL-17等促炎性细胞因子水平增高，这可能是尿毒症患者机体普遍处于微炎症状态的原因之一[13]。经血液透析治疗后，患者Treg、Th17、IL-6和IL-17水平均低于未接受血液透析治疗者，说明血液透析治疗有助于改善尿毒症患者机体微炎症状态，降低其心血管不良事件的风险，对患者的预后有益。

IL-10 是一种多潜能的细胞因子，对巨噬细胞、树突状细胞和Treg等均可产生免疫抑制作用，使炎性细胞因子、趋化因子的分泌减少，同时可抑制组织相容性复合体、协同刺激分子的表达，对心肌产生一定的保护作用，因而被认为是一种抗炎性细胞因子[14]。本研究中尿毒症患者IL-10水平明显低于对照组，这一结果提示，尿毒症患者机体均处于不同程度的自身免疫功能紊乱状态，血液透析治疗可减轻免疫功能紊乱程度，这可能是通过促进Treg特异性表达Foxp3，分泌IL-10等抗炎因子而发挥抑制炎症、维持免疫耐受的作用，从而有利于心肌保护[15]。本研究认为，血液透析除了清除体循环内毒素、控制容量负荷之外，还可以改善患者的自身免疫功能，进而降低尿毒症患者心血管病发症的风险，这可能是血液透析治疗改善尿毒症患者预后的作用机制之一。

本研究探讨了血液透析治疗改善尿毒症患者预后的作用机制，认为尿毒症患者存在Treg与Th17水平失衡，而血液透析可帮助改善患者Treg与Th17水平失衡，基于这一结果，在今后的临床工作中可通过药物或其他治疗手段进一步干预尿毒症患者机体Treg与Th17水平，以改善其预后。

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