高效液相串联质谱法检测辣椒油中的罗丹明B

罗丹明B是一种被怀疑致癌物质，又称玫瑰红B，或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。辣椒油中罗丹明B的检测是日常检测项目，一般采用液相串联质谱法进行检测。本文优化了已有方法，简洁方便地检测辣椒油中的罗丹明B。

实验部分

仪器、试剂与材料ACQUⅠTY UPLC Ⅰ-Class超高效液相色谱仪、Xevo TQ-S micro电喷雾串联四级杆质谱仪；PCX柱子；乙腈，色谱纯；正己烷，色谱纯；实验用水为milli-Q高纯水；罗丹明B标准溶液。

实验条件 液相色谱条件：Waters ACQUⅠTY UPLC BEH C18柱（50mmx2.1mm,1.7μm）色谱柱；柱温40oC；进样量1μL；流速为0.3mL/min；流动相A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈。梯度洗脱程序为：0.00～1.00min,85%～85%A；1.00～2.00min,85%～15%A；2.00～3.00min,15%～15%A；3.00～4.00min,15%～85%A；4.00～5.00min,85%～85%A。

质谱条件：电喷雾离子源；正离子扫描；毛细管电压0.5kV；离子源温度150oC；去溶剂气500oC；去溶剂气流量（氮气）800L/h；气帘气流量50L/h；多反应监测（MRM）模式检测；罗丹明B的离子监测条件为下表所示。

物质 监测离子(m/z)Cone voltage(V)Collision energy(V)罗丹明B 443.3/399.2 30 15 443.3/355.2 30 17

样品处理：取1.0g辣椒油，加入10ml含2%三氯乙酸的正己烷溶液，超声萃取5min。依次用5ml甲醇，5ml水，5ml甲醇活化PCX柱子。10ml上述正己烷提取液直接上样净化，弃去滤液。5ml氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。洗脱液用氮气吹至近干，用初始流动相溶液重新溶解，定容至2ml。涡旋混匀后，LCMSMS测定。

结果与讨论

样品提取方法的优化 本实验对比了乙腈、正己烷、甲醇、二氯甲烷等萃取溶剂，结果表明，辣椒油易溶于正己烷，不易溶于乙腈等，所以采用正己烷溶液提取。罗丹明B在酸性提取液中呈离子状态，有利于在PCX柱子上的保留，所以添加三氯乙酸调节酸性。

质谱分析条件的优化 将一定浓度的标准溶液以注射式连续直接进样的方式进行一级质谱全扫描分析，得到罗丹明B的准分子离子峰([M+H]+)，然后选取准分子离子峰进行轰击，通过优化碰撞能量、质谱分辨率等参数，最大化地提高检测的灵敏度。通过分析二级质谱信息得出，罗丹明B的二级质谱碎片主要包括m/z399.2，m/z355.2。根据欧盟的标准，选取443.3/399.2，443.3/355.2作为监测离子。

流动相条件的优化 本研究考察了甲醇+0.1%甲酸水溶液，乙腈+0.1%甲酸水溶液，甲醇+水溶液，乙腈+水溶液四种混合溶液体系。结果表明，含有0.1%甲酸的水溶液体系响应值更好，原因是罗丹明B采用正离子模式测定，增加酸的浓度有利于产物的离子化。甲醇是一种亲核试剂，我们发现它与三苯甲烷结构化合物能够发生亲核反应，因此不采用甲醇作为流动相。反应式如图所示。

线性范围、检出限、回收率与精密度 测定其标准曲线，结果表明，在线性范围5～100μg/L，线性关系良好，其相关系数r大于0.9995。检出限一般以方法检出限作为其检出限，按照10倍信噪比作为其方法检出限，计算其检出限为1ug/L。选用经过测定不含有罗丹明B的辣椒油样品，分成三组。三组样品分别添加10ug/L、20ug/L、50ug/L低、中、高三个浓度，按照本方法进行添加回收率和精密度（n=3）实验，计算得到回收率为81%～107%，RSD为2.5～3.7%。

对比国标SN/T 2430-2010采用GPC净化的方式，本方法处理简单，快捷，适合于大量样品的处理，为日常生活食品安全的监测与预警提供技术支持。