大、小叶榄仁叶小极性成分分析

吕闪闪，孙连娜，熊筱娟

(1.宜春学院化学与生物工程学院，江西，宜春 336000；2.上海中医药大学中药学院，上海 200032）

大叶榄仁(Terminalia catappa L.)是属于使君子科(Combretaceae)榄仁属（Terminalia）的一种植物。因其果实的形状与榄仁相似而得名。枝叶往上成层状分布，形似雨伞，因此又名雨伞树。在我国广东、广西、海南、台湾、福建地区也有广泛的分布。大叶榄仁树形态优美，具有很好的绿化和观赏价值，大多作为风景树种植。大叶榄仁叶在阿育吠陀是一个公认的草药，新鲜叶子的汁外敷可用来治疗麻风病和疥疮，内服可用于治胃痛和头痛。果实是一种可食用的坚果，具有重要的营养价值。大叶榄仁叶中含有酚类、类黄酮和类胡萝卜素以及小极性等成分[1]，众多药理研究证实了该植物表现出抗菌[2]、抗炎[3]、抗氧化剂[4-5]、肝保护[3]和抗癌[6]性质。大叶榄仁果实及叶子提取物具有抗糖尿病的作用[7-8]。

小叶榄仁（Terminalia mantaly.)，又称为雨伞树、非洲榄仁或细叶榄仁，属于使君子科榄仁属植物。在我国福建、广东、广西、香港、台湾等地作为风景树栽培，资源非常丰富。通过查阅文献，榄仁属植物的相关研究很多，主要化学成分是三萜类和鞣质类[9-12]。榄仁属植物对心血管疾病具有一定的治疗作用，小极性的三萜类化合物是其主要活性成分[13-14]。

由于大叶榄仁叶和小叶榄仁叶的化学成分的相关研究报道较少，因此本研究制备大、小叶榄仁叶的小极性部位，采用GC-MS方法分析大、小叶榄仁叶中小极性部位的化学成分，利用面积归一法计算各化合物相对含量[15]，对比其成分和相对含量的异同，旨在为进一步开发利用提供参考。

1 仪器和材料

1.1 仪器

Thermo DSQ Ⅱ质谱仪，Thermo Trace GC Ultra气相色谱仪（购自美国赛默飞世尔公司），Xcalibur工作站；ZX98-1旋转蒸发仪（购自上海鲁伊工贸有限公司）；SHB-Ⅲ循环真空泵（购自郑州长城科学工贸有限公司）；电热鼓风干燥箱（购自上海实验仪器厂有限公司）；JT3101N电子精密天平（购自上海精天科学仪器有限公司）。

1.2 试剂

乙醇（分析纯）、二氯甲烷（分析纯）、甲醇（分析纯），提取分离用水为蒸馏水，分析用水为娃哈哈纯净水。

1.3 植物原料

大、小叶榄仁叶，2016年10月采集自福建省福州市，经由第二军医大学药学院中药鉴定学教研室孙连娜副教授鉴定为使君子科(Combretaceae)榄仁属（Terminalia）植物大叶榄仁(Terminalia catappaL.)和小叶榄仁（Terminalia mantaly.)的干燥叶。

2 方法和结果

2.1 供试品的准备

大、小榄仁叶叶干燥药材采用相同的方法分别处理，使用药材量的15倍的 80%乙醇冷浸提取 3次，提取液合并后减压浓缩至浸膏状。加水混悬，采用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取极性由小到大依次萃取，采用减压旋蒸浓缩萃取液，得到二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四个萃取部位。二氯甲烷部位样品和硅胶粉 1：1拌样，使用十倍量的硅胶粉减压装柱，以石油醚-乙酸乙酯（50:1,30:1,15:1,7:1,5:1,3:1,1:1,0:1）梯度洗脱，得到的50:1部位采用GC-MS法进行成分鉴定。

2.2 GC-MS测试条件及方法

色谱条件：色谱柱：HP-1MS石英毛细管色谱柱30 m×0.32 mm×0.25 μm；程序升温条件：起始温度100 ℃，以每分钟20 ℃升温至160 ℃，保持时间8 min，然后以每分钟10 ℃升温到300 ℃，保持时间15 min；进样口的温度为250 ℃，分流比为10:1，进样量1µL，流速1.0 mL/min；载气为高纯氮气。

质谱条件：电离方式EI，电离能量70 eV，传输线温度为250 ℃，离子源温度200 ℃，扫描质量范围30～550。

2.3 样品测定

用气相色谱-质谱联用仪进行分析鉴定大、小叶榄仁叶的小极性部位样品。通过G1701BA化学工作站的数据处理系统，运用NIST98谱图库进行检索，并分别与八峰索引和EPA/NIH质谱图集的标准谱图进行对照、复核，再结合相关文献进行人工解析，确定大、小叶榄仁叶小极性中各个化学成分。采用峰面积归一化法进行定量分析，分别求得各化学成分在大、小叶榄仁叶中的相对百分含量。大叶榄仁叶小极性成分总离子见图1，化学成分及相对含量结果见表1；小叶榄仁叶小极性成分总离子见图2，化学成分及相对含量结果见表2。

图1 大叶榄仁叶小极性成分总离子Fig.1 Small polar components total ion map of Terminalia catappa L. Leaves

图2 小叶榄仁叶小极性成分总离子Fig.2 Small polar components total ion map of Terminalia mantaly Leaves

表1 大叶榄仁叶小极性成分化合物及含量Table 1 Small polar compounds and contents of Terminalia catappa L. Leaves

表2 小叶榄仁叶小极性成分化合物及含量Table 2 Small polar compounds and contents of Terminalia mantaly Leaves

3 讨论

对大叶榄仁叶中小极性成分进行 GC-MS 分析，共鉴定出 41个化合物；利用面积归一法计算各化合物相对含量，已鉴定化合物含量占总体的87.04%，主要为脂类33.81%、萜类32.21%、芳香族13.26%、烷烃类4.36%。含量最高的成分为植醇，占总量的25.42%；其次为9,12,15-十八碳三烯酸甲酯、十六碳烯酸乙酯和1 -乙基- 3 -甲基苯，分别占15.59%、13.34%、9.40%。据报道，萜类化合物中的羽扇豆醇具有抗炎、抗菌、抗疟疾、抗肿瘤等多种药理作用[16]。实验表明羽扇豆醇对乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤细胞具有明显的抑制活性[17]。芳香族的维生素E具有抗氧化的作用。

对小叶榄仁叶中小极性成分进行 GC-MS 分析，共鉴定出 42个化合物；利用面积归一法计算各化合物相对含量，已鉴定化合物含量占总体的91.12%，主要为脂类63.9%、烷烃类12.38%、萜类9.54%，芳香族3.9%。含量最高的成分为棕榈酸乙酯，占总量的20.58%；其次为亚麻酸乙酯、亚油酸乙酯、角鲨烯和花生酸乙酯，分别占 18.42%、14.71%、8.24%和6.91%。其中，萜类化合物中的β-广藿香烯具有抗炎活性[18]，木栓酮具有抗炎、抗肿瘤活性及抑制真菌生长的作用[19]，角鲨烯具有抗氧化[20]、抗癌[21]、降胆固醇[22]、解毒[23]等多种生理功能。芳香族中的生育酚具有抗氧化作用。

大、小叶榄仁叶中小极性成分进行的 GC-MS分析结果对比可知大、小叶榄仁中含量最高的一类化合物都是脂类，但是小叶榄仁叶中脂类化合物含量远高于大叶榄仁叶。大叶榄仁叶中含有较高的萜类化合物，其中植醇含量最高。二者中的成分差异较大，相同的化合物只有烷烃类的二十烷和二萜植醇，二者中均含有具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种活性的一些萜类化合物。因此，大叶榄仁叶和小叶榄仁叶具有较好的开发价值，各自都具有它的优势成分，值得后续进一步的分离。

[1]Anand A V,Divya N, Kotti P P. An up dated review ofTerminalia catappa[J].Pharmacognosy Reviews.,2015,9(18):93-98.

[2]Nair R, Chanda S.Antimicrobial activity ofTerminalia catappa, manilkarazapota and Piperbetel Leaf Extract[J].Indian J Pharm Sci..,2008,70(3): 390-391

[3]徐力致,高静,朱俐,等. 榄仁树叶提取物（LR-98）对实验性肝损伤的防护作用[J].南京大学学报:自然科学版,2000,36(02):197-201.

[4]Annegowda H V,Anwar L N,Mordi MN,et al.Influence of sonication on the phenolic content and antioxidant activity ofTerminalia catappaL. leaves[J]. Pharmacognosy Research.2010,2(6): 368-373.

[5]Pandya N B,Tigari P,Dupadahalli K, et al.Antitumor and antioxidant status ofTerminalia catappaagainst Enrlich ascites carcinoma in Swiss albino mice[J].Indian J Pharm.2013,45(5): 464-469.

[6]Naitik P,Prakash T,Kotresha D,et al.Effect ofTerminalia catappaon lipid profile in transplanted fibrosarcoma in rats[J].Indian J Pharm.,2012,44(3):390-392.

[7]Nagappa A N,Thakurdesai P A,Venka Rao N,et al.Anti-diabetic activity ofTerminalia catappaLinn fruits[J].J Ethnopharmacol.,2003,88(1):45-50.

[8]Ahmed S M,Vrushabendra Swamy B M,Gopkumar P,et al.Anti-Diabetic activity ofTerminalia catappaLinn.Leaf easracts in alloxan-induced diabetic rats[J]. Iranian J Pharmcol Ther.,2005,4:36-9.

[9]孔令义. 阿江榄仁树的化学和医疗用途[J].国外医药:植物药分册, 1989(2):81-82.

[10]王建业. 诃子成分的分离鉴定及两种分离方法的比较研究[D].呼和浩特:内蒙古大学,2017.

[11]卢丹. 千果榄仁树皮中的化学成分[J]. 国外医药(植物药分册), 2006(6):256.

[12]胡立志,周忠玉,贾永霞,等. 油榄仁果实化学成分的研究[J]. 热带亚热带植物学报, 2014,22(4):419-424.

[13]崔翰明. 阿江榄仁树树皮对离体大鼠心脏局部缺血-再灌注损伤的治疗[J].国外医药植物药分册)，2002,17(2)：68-69.

[14]张海龙,裴月湖,华会明,等. 诃子化学成分及药理活性的研究进展[J].沈阳药科大学学报,2001,18(6):452-455.

[15]胡文杰,江香梅. 闽楠果皮挥发油的化学成分分析[J].井冈山大学学报:自然科学版,2013,34(1):52-54.

[16]史栋栋,况媛媛,王桂明,等. 细胞代谢组学用于羽扇豆醇干预人乳腺癌细胞MCF-7的机理探究[J].色谱,2014,32(03):278-283.

[17]Mostafa M,Larsen M,Love R.Estrogen receptor,progesterone receptor, and her-2/neu oncogene expression in breast cancers among bangladeshi women[J]. Bangladesh Coll Phys Surg,2010,28(3):157

[18]陈晓盈. β-广藿香烯抗炎作用及机制研究[D]. 广州:广州中医药大学,2016.

[19]张嵘,刘卓刚. 木栓酮调控 K562细胞增殖和细胞周期机制的初步研究[J].山西医药杂志,2012,(11):1093-1095.

[20]Warleta F,Campos M,Allouche Y,et al. Squalene protects against oxidative DNA damage in MCF10A human mammary epithelial cells but not in MCF7 and MDA-MB-231 human breast cancer cells[J].Food and Chemical Toxicology,2010, 48(4):1092-1100

[21]Chinthalapally V R,Newmark H L. Bandaru S R.Chemopreventive effect of squalene on colon cancer[J].Carcinogenesis,1998,19(2):287-290.

[22]Harivardhan L R,Couvreur P. Squalene:A natural triterpene for use in disease management and therapy[J].Journal of Advanced Drug Delivery Reviews,2009,61(15):1412-1426.

[23]Senthilkumara S,Devaki T,Manohar B M,et al. Effect of squalene on cyclophosphamide- induced toxicity[J].Clinica Chimica Acta,2006,364(1):335-342.