HPLC法测定蒙成药波仁-12(保肾散)中盐酸小檗碱的含量

2018-06-01包长龙

中国民族医药杂志 2018年1期

包长龙

(内蒙古通辽市食品药品检验所，内蒙古通辽 028000)

波仁-12(保肾散)的处方由鹿茸、紫河车、杜仲、龟甲(制)、关黄柏、麦冬、冬虫夏草、巴戟天、锁阳、党参、千年健、续断等12味单药组成的散剂。主要用于各种肾病及早期尿毒症[1]。本试验对波仁-12(保肾散)中关黄柏药材中所含的药用成分盐酸小檗碱利用HPLC法进行含量测定，结果，测定准确，方法可行，可作为波仁-12(保肾散)的质量控制方法。

1 仪器和试剂

1.1 仪器：岛津LC-10AT型高效液相色谱仪(日本产)，SPD-VP紫外检测器，CLASS-VP色谱工作站，TP-300超声波清洗机，色谱柱：shim-pack VP-ODS C18柱(250×4.6mm，粒度5μm)。

1.2 试剂与试药：甲醇、乙腈(色谱纯，天津天大化学试剂厂)；水为试验用高纯水。其它试剂均为分析纯。盐酸小檗碱对照品(编号：110713-201212，供含量测定用，纯度98.1%计)：由中国食品药品检定研究院提供；供试品由内蒙古通辽市科左中旗蒙医院提供。批号为: 20081106、20090205、20090508。

2 方法学考察

2.1 色谱条件：流动相：乙腈-0.05%磷酸二氢钾溶液(氢氧化钠试液调节PH值至5.0)(30:70)为流动相；流速1.0mL/min；柱温25℃；检测波长为346nm；进样量：10μL[2]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品13.12mg(实际为13.12mg×98.1%=12.87mg)，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1mL含盐酸小檗碱25.74μg)。

2.2.2 供试品溶液的制备：精密称取本品约2g，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1:100)溶液25mL，称重，密塞，加热回流30分钟，放冷，再称重，用盐酸-甲醇(1:100)溶液补足减失的重量，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察：精密量取上述对照品溶液各1、3、5、7、9、10mL，分别置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。各精密吸取10μl进样，按上述色谱条件测定，记录谱图及峰面积值，以进样量(W:μg)为纵坐标，以峰面积值(A)为横坐标，绘制标准曲线，结果盐酸小檗碱在0.05148～0.5148μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=4.2E+6X-8620.7，r=1.0000。

2.4 精密度试验：精密量取盐酸小檗碱对照品溶液(25.74μg /mL)10μL，连续进5次，测定对照品溶液峰面积，结果峰面积平均值为1065205，RSD为0.72%。

2.5 稳定性试验：精密量取同一批供试品溶液10μl，每间隔0、4、8、14h注入色谱仪中，测定记录峰面积值，结果平均峰面积值为1061875，RSD为2.0%，表明供试品溶液在1h内稳定性良好。

2.6 重现性实验：取同一批号为20081106供试品溶液6份，研细，精密称取约2g，按上述色谱条件测定每份样品含量。按外标法计算含量。结果平均含量(mg/g)为0.312，RSD为1.4%，表明本试验重现性良好。

2.7 加样回收率试验：加样回收试验：精密称取含量为0.32mg/g的供试品6份，各约1.0g，精密加入用甲醇配制的浓度为0.1287mg/mL的盐酸小檗碱对照品溶液3mL，再精密加入甲醇22mL，分别按含量测定项下的方法测定每份供试品含量，计算回收率，结果见表1。