VEGF 、HSP 70和NBNA 评分与新生儿窒息的相关性

王幽梦 鲁利群 屈艺

1成都医学院（成都610500）；2成都医学院第一附属医院儿科（成都610500）；3四川大学华西第二医院（成都610000）

新生儿窒息是临床常见的新生儿缺氧性疾病，也是引起新生儿死亡的主要因素之一。其不仅能诱导脑细胞缺氧性凋亡的发生，还会遗留严重的神经后遗症，如脑瘫、智力低下等，给家庭带来了巨大的负担［1］。研究［2］显示，我国新生儿窒息发生率为1.03%～12.6%。当前对于诊断新生儿窒息缺乏统一的标准，临床常用的Apgar评分带有浓烈的主观性，且受各方面因素影响，不能客观地判断新生儿窒息的严重程度及其远期预后，因此研究与新生儿窒息严重程度有关的因子对预后评估及神经修复具有重要的意义。目前国内外有关细胞因子在缺血缺氧组织中的表达的研究很多，但尚未发现与新生儿窒息密切相关或高度特异性的细胞因子。近年来研究显示［3］血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、热休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP 70）可参与窒息新生儿体内的血流重新分配，增加这些重要器官的血流量，以保证其氧供及物质代谢的需要。目前尚未见有关于VEGF、HSP 70和NBNA评分与新生儿窒息相关性的报道，有待进一步研究。本研究通过检测血清中VEGF、HSP 70的表达水平，并比较VEGF、HSP 70和NBNA评分与新生儿窒息的相关性，旨在为临床提供更有意义的参考价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象 经我院伦理委员会批准，纳入2012年5月至2017年5月在本院产科出生的足月新生儿138例，轻度室息52例，重度室息36例，另随机选取Apgar评分正常的新生儿50例为对照组。纳入标准：胎龄：37～42周；体质量2 500～4 000 g。排除遗传代谢性疾病及先天性心脏病患儿。抽取所有血样本前患儿家属均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及ELISA检测 各组新生儿生后立即抽取脐动脉血2 mL，静置30 min，温度控制在22～27℃，3℃下以3 000 r/min离心10 min，-80℃冰箱储存血清待测。采用酶联免疫吸附法分别检测3组血清中VEGF、HSP 70的表达水平。所有检测步骤均按照ELISA试剂盒进行操作。

1.2.2 临床窒息诊断标准 参照2016年新生儿窒息诊断的专家共识［4］：（1）轻度窒息：Apgar评分1 min≤7分或 5 min≤7分，伴脐动脉血pH＜7.2；（2）重度窒息：Apgar评分 1 min≤3分或 5 min≤5分，伴脐动脉血pH＜7.0；（3）补充说明：未取脐动脉血气分析结果的，Apgar评分≤7分列为轻度窒息，Apgar评分≤3分列为重度窒息。

1.2.3 NBNA评分 分别于新生儿生后第7、14、28天行NBNA测定。测查均在两次喂奶之间进行，在新生儿睡眠状态下进行评分，室温保持在24～26℃，室内环境安静、半暗，需要的辅助工具有长方形红色塑料盒、小红球和手电筒各一个，时间控制在12 min以内。评分者曾参加过NBNA学习班并考核通过。NBNA评分标准参照鲍秀兰教授的评分标准［5］，以评分结果＜35分判定可能有神经行为异常。

1.3 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件处理，计数资料以例描述，组间比较采用χ2检验；计量资料以±s描述，多组间比较采用方差分析，各组间的两两比较采用t检验；应用pearson相关分析进行相关性分析；通过计算AUC值进一步分析脐血中VEGF、HSP 70对新生儿窒息预测的特异度及灵敏度。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 3组新生儿性别、出生体重、生产方式、胎龄差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 一般资料比较Tab.1 The comparison of general data ±s

表1 一般资料比较Tab.1 The comparison of general data ±s

组别对照组轻度窒息组重度窒息组χ2/F值P值例数50 52 36男/女30/20 28/24 19/17 0.571 0.751顺16 22 14剖宫产34 30 22 1.184 0.553出生体重（g）3 028±135.10 3 120±317.21 3 095±279.26 1.746 0.178胎龄（周）38.9±1.31 38.5±1.04 38.3±1.28 2.834 0.062

表2 各组新生儿VEGF、HSP 70表达水平及NBNA评分比较Tab.2 The Comparison of VEGF,HSP 70 expression level and NBNA score in each group ±s

表2 各组新生儿VEGF、HSP 70表达水平及NBNA评分比较Tab.2 The Comparison of VEGF,HSP 70 expression level and NBNA score in each group ±s

注：VEGF为血管内皮生长因子、HSP 70为热休克蛋白70

组别对照组轻度窒息组重度窒息组F值P值VEGF（pg/mL）105±12.54 246±22.40 415±95.34 387.113＜0.001例数50 52 36 NBNA评分（分）第7天36.16±1.72 33.28±2.48 32.67±1.33 41.520＜0.001第14天37.56±1.29 36.18±2.30 36.16±1.72 9.119＜0.001第28天37.86±0.76 37.18±0.89 36.56±0.70 28.282＜0.001 HSP 70（ng/mL）12.8±1.93 15.2±2.61 18.1±3.72 39.197＜0.001

2.2 各组新生儿VEGF、HSP70表达水平及NBNA评分比较 3组新生儿ELISA检测结果显示，比较血清中VEGF、HSP 70表达水平，差异均有统计学意义（P＜0.05），其中窒息组血清中VEGF水平高于对照组，重度窒息组高于轻度窒息组（P＜0.05）；窒息组血清中HSP 70水平高于对照组，重度窒息组高于轻度窒息组（P＜0.05）。不同时间段3组新生儿NBNA评分比较，对照组评分均高于轻度窒息组及重度窒息组，重度窒息组评分最低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 血清中VEGF、HSP 70表达水平与第7、14、28天NBNA评分的相关性分析 血清中VEGF、HSP 70表达水平与第7、14、28天NBNA评分均呈负相关，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 各组血清中VEGF、HSP 70表达水平与第7、14、28天NBNA评分的相关性Tab.3 The correlation between the expression level of VEGF HSP70 in serum and the NBNA score on the 14th day in each group

2.4 血清中VEGF、HSP70对新生儿窒息的灵敏度及特异度 3组脐血中VEGF、HSP 70预测新生儿窒息的 AUC值分别为 0.873（95%CI:0.771～0.892，P＜0.001）和 0.815（95%CI:0.729～0.871，P＜0.001）。血清中VEGF界值为106 pg/mL时，灵敏度84.30%，特异度71.30%。血清中HSP 70界值为12.90 ng/mL时灵敏度82.90%，特异度69.00%。

3 讨论

VEGF又被称作血管通透因子，是最近研究［6-7］最多的细胞因子之一，在组织缺氧时可诱导其大量生成，调节血管新生，增加血管的通透性，改善组织的缺血缺氧状态，防止血管再狭窄和抑制内皮细胞凋亡及保护神经细胞的功能。本研究结果显示：窒息患儿脐血VEGF水平较对照组显著增高，其中重度窒息组高于轻度窒息组，与相关文献报道［8-9］相似。这些均提示新生儿窒息中VEGF的升高对临床诊断有重要的意义。缺氧可导致窒息的发生，新生儿窒息后可导致多脏器缺氧缺血，因此，身体机能发生改变以保证脑、心、肺等全身脏器的血流供应及能量充足［10］。研究报道［11-12］，VEGF可参与窒息患儿体内的血液重新分配，在促使新血管形成的同时，发挥剂量依赖性扩张血管作用，以改善组织的缺血缺氧状态。BERNAUDIN等［13］通过将新生小鼠暴露在8%氧气3 h后使成为缺氧缺血脑损伤动物模型，发现脑组织内VEGF显著增加。前期较多研究集中在窒息新生儿血清中VEGF的表达变化，对于VEGF与NBNA评分及窒息严重程度的相关性尚未报道。因此，本课题通过检测脐血VEGF水平研究其与NBNA评分及窒息严重程度的相关性，有助于评估患儿预后评估及神经修复。

HSP 70是热休克蛋白家族中最为丰富且结构最为保守的一类，参与蛋白质的合成及转运等过程，得以稳定细胞内环境。HSP 70在人脑组织内含量很少，位于细胞浆内，HSP 70 mRNA在高温、应激下反应十分敏感；在各种应激情况下，其他蛋白质的合成明显减少，而HSP 70的表达量显著增加，以保护大脑防止来自外界的应激刺激，从而对机体产生保护作用［14-15］。本研究结果发现，轻度窒息组与重度窒息组患儿血清中HSP 70表达明显高于对照组，其中，重度窒息组HSP 70表达水平最高，说明其与窒息及窒息严重程度有明显地相关性。国内外研究表明［16-17］，在脑缺氧的早期HSP 70有着特异性的表达，可保护脑细胞进一步增强脑组织对抗缺氧造成的致死性损伤作用，其不仅有利于神经细胞损伤后的修复，也可作为一种脑缺氧的敏感指标，但HSP 70与NBNA及窒息严重程度相关性目前尚无定论。因此，本实验通过研究HSP 70与NBNA及窒息严重程度相关性，有助于指导临床医生诊断新生儿窒息。

本研究对轻度窒息及重度窒息组患儿及对照组新生儿进行了NBNA评分。该评分可反映患儿大脑皮层受损的情况，早期发现新生儿脑功能异常及预测脑损伤预后，具有重要的临床意义［18］。本研究结果显示：窒息是影响NBNA评分的一个重要因素，而且窒息程度与NBNA评分存在关系，不同日龄新生儿进行NBNA评分，窒息程度越重，评分越低。NBNA评分被广泛用于临床评估新生儿窒息所引起的神经行为异常，对于早期筛查神经行为异常患儿的敏感性强。应用NBNA对窒息新生儿进行定期监测，使脑损伤患儿得以被早发现、早诊断，从而有针对性的进行早期干预，对促进神经系统功能康复起着极其重要的作用［19］。本研究相关性分析显示，新生儿血清中VEGF、HSP 70表达水平与NBNA评分呈负相关，VEGF、HSP 70表达水平越高，NBNA评分越低。

综上所述，检测脐血中VEGF、HSP 70表达水平可作为临床辅助新生儿窒息诊断的客观生化指标之一，NBNA评分可早期在一定程度上反应新生儿窒息的严重性，但其具体的临床价值及其对窒息患儿远期预后的评估仍待进一步证实。

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