银翘汤对金黄色葡萄球菌的抗菌试验

兰仕梅 ，杨溢欢 ，杜 港 ，何思佳 ，沙 莎 ,2，孙裕光 ,2

（1.西南大学动物科学学院，重庆402460;2.重庆市兽医科学工程研究中心，重庆402460）

金银花和连翘是临床常用中药，都具有清热解毒、疏散风热的功效，金银花重在疏风散热，连翘解毒消痈优于金银花，素有“疮家圣药”之[1,2]称。二者常用于温热病，金银花入血分，凉血止痢，治疗热毒血痢；连翘入心经，清心开窍，治疗温病热陷心包之高热神昏，尚可散结、利尿，治疗瘰疬、痰核以及热淋尿少[3]等。临床上这两味中药经常配伍相须为用，以增强其清热解毒，发散风热的功效，代表方剂有银翘散、银翘白虎汤方剂等。

金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus，SA)是兽医临床上常见的条件致病菌，也是重要的人畜共患致病菌[4]，为革兰氏阳性菌，常引起动物创伤感染、脓肿、败血症等化脓性疾病，是奶牛乳腺炎最主要的病原之一[5]，同时还能污染食物及饲料引起人畜中毒性呕吐、肠炎等毒素性疾病[6]，是细菌引起的食源性疾病中最突出的病原[7,8]；随着金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药情况越发严峻，临床治疗效果明显下降[9]，给养殖业带来惨重的经济打击。畜禽感染金黄色葡萄球菌属于中兽医所指的温病，从传统中药中筛选出有效药物预防和治疗由金黄色葡萄球菌引起的疾病，具有十分重要的意义，关于金银花、连翘的抗菌作用已有报道[10-12]。但仅两者配伍后的抗菌报道较少，本研究依据前人相关中药抗菌试验的基础上，利用金银花和连翘配伍构成的“银翘汤”对金黄色葡萄球菌进行抗菌作用的研究。现将试验报告如下，为兽医临床用药提供理论指导和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材 金银花、连翘购于重庆市荣昌区石家药房。

1.1.2 菌株来源 金黄色葡萄球菌分离自患病雏鸭，保存于-20℃。

1.1.3 主要仪器 超净工作台、立式压力蒸汽灭菌锅、生化培养箱、牛津杯等。

1.1.4 主要试剂 普通琼脂培养基、普通肉汤培养基等购于杭州滨河微生物试剂有限公司。

1.2 方法

1.2.1 中药的提取与药液制备

称取金银花和连翘各50g等量混合置于1000ml烧杯中，加10倍量蒸馏水，浸泡30min后，煎煮1.5h，四层纱布过滤，再加8倍量蒸馏水煎煮1.5h后过滤。将两次所得滤液合并，80℃水浴浓缩到相当于每1g生药1ml，用同样的方法分别 制 备 浓 度 为 0.5g/ml、0.25g/ml、0.125g/ml 的 药液，115℃减压灭菌20min，4℃保存备用。连翘50g按 前 法 提 取 为 1g/ml、0.5g/ml、0.25g/ml、0.125g/ml的药液。

1.2.2 牛津杯法药敏试验

将金黄色葡萄球菌接种到普通肉汤培养基中，37℃振摇培养12 h，菌液经麦氏比浊使菌液浓度为1×10 8cfu/mL(0.5个麦氏浓度)，用灭菌的棉拭子取菌液均匀涂布在普通琼脂平板上，再将灭菌的牛津杯在酒精灯火焰上稍微烘烤后轻放在平板上，每个牛津杯分别加入230ul的药液，每个浓度的药液都要做相同的操作，37℃培养18-24h。分别观察并测定金银花、连翘及“银翘汤”对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径的大小。

1.2.3 统计学分析

运用生物统计学方法[13]对试验数据进行方差分析和多重比较。

2 结果

2.1 牛津杯法抗菌试验

牛津杯法测定金银花、连翘及“银翘汤”对金黄色葡萄球菌的抗菌效果见表1和图1-12。

图1

图2

图3

图4

图5

图6

图7

图8

图9

图10

图11

图12

2.2 方差分析与多重比较

试验数据进行方差分析和多重比较的结果见表2和表3。

表2 药物抑菌试验结果方差分析表

表3 不同浓度的金银花、连翘和“银翘汤”抑菌试验结果多重比较（T法）

根据表2的运算得出统计结论。PA＜0.01，差异极显著。说明同一药物的不同浓度对抑菌圈直径的影响极显著。PB＜0.01，差异极显著，说明同一浓度的不同药物对抑菌圈直径的影响极显著。PA*B＜0.01，差异极显著，即不同药物不同浓度对抗菌直径的影响极显著。由表3可以得出统计结论：12个浓度的药物中，0.25g/ml的金银花抗菌效果最好，其次是1g/ml连翘，等量配比 “银翘汤”的抗菌效果总体上次于单味药的效果，抗菌效果最佳浓度为0.5g/ml，其次为0.125g/ml浓度。

3 讨论

牛津杯抗菌试验结果表明，连翘、金银花及“银翘汤”对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌效果，统计学分析表明，不同浓度的不同药物对抑菌圈直径的影响极显著；0.25g/ml的金银花抗菌效果最好，其次是1g/ml连翘，等量配比“银翘汤”的抗菌效果总体次于单味药的效果，抗菌效果最佳浓度为0.5g/ml，其次为0.125g/ml浓度。连翘对金黄色葡萄球菌的抗菌效果随浓度的递减而减小；低浓度（0.25g/ml、0.125g/ml）的金银花比高浓度（1g/ml、0.5g/ml）的金银花以及各浓度的连翘都具有更好的抗菌效果，这可能是由于金银花本身对金黄色葡萄球菌的抗菌作用比连翘更强，但在高浓度时因呈流浸膏状，主要抗菌成分无法从牛津杯中向琼脂表面扩散，使得无法观察到抑菌圈，在低浓度时扩散能力强，且速率快，呈现良好的抗菌效果，在之后的试验中应采取其他方法来补充试验，以更精确的测定药物的抗菌效果。

金银花、连翘都具有清热解毒，疏散风热的作用功效，在临床上，二者相须为用，金银花清宣疏散，连翘消散痈肿；疮痈是皮肤及皮下组织的化脓性炎症，病原体多是葡萄球菌，疮痈与心经的热毒关系比较密切，而连翘有消痈散结之功效，长于解心经的热毒。动物感染金黄色葡萄球菌形成了疮痈，属于温热病范畴，疾病初起，属于卫分证，发热，体温升高，继而出现肺胃津伤的气分证，导致肺失宣降，出现咳嗽，呕吐，疼痛等症状，此时应解表发散风热，用药金银花，而将连翘配伍金银花可达到相须为用的目的，增强治疗效果。本试验中“银翘汤”对金黄色葡萄球菌表现了良好的抗菌效果，但体外抗菌总体效果次于单味药物的效果，可能是在体外抗菌试验中两者有相互干扰的成分，削减了各自抗菌能力，“银翘汤”具体的抗菌效果可在今后的体内抗菌试验中展开讨论。

4 结论

本研究表明，金银花、连翘及“银翘汤”对金黄色葡萄球菌的抗菌效果均较好，其中0.25g/ml的金银花抗菌效果最好，其次是1g/ml连翘，等量配比“银翘汤”的抗菌效果总体上次于单味药的效果，最佳抗菌浓度为0.5g/ml。兽医临床上，当畜禽发生金黄色葡萄球菌感染时，可以运用金银花和连翘配伍构成的“银翘汤”进行预防和治疗。

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