新疆某养鸡场禽白血病流行病学调查及净化效果监测

李泽宇，齐亚银

（1.石河子大学，石河子 832003；2.新疆农业职业技术学院，昌吉 831100）

0 引言

禽白血病是一种肿瘤性疾病，由禽白血病病毒和禽肉瘤病病毒引起。目前，在世界大多数养鸡业发达国家已基本控制，但在我国本病的感染和流行仍十分普遍，尤其是地方品系的鸡群[1-2]。鸡群感染此病会导致严重的损失[3]，一是产生肿瘤，导致鸡群发病；二是出现系列并发症，严重影响经济效益；三是还可以导致鸡群免疫抑制，造成继发感染等。

近年来，新疆养鸡场禽白血病发病较多，给养鸡业造成了较大的经济损失。为了解新疆某规模化肉种鸡场禽白血病的感染情况，分两批从4栋鸡舍采集血清800份，每批400份，进行ALV-J 亚群抗体检测，并对鸡场采取了净化措施。现将监测及净化情况报告如下。

1 材料与方法

美国爱德士（IDEXX）公司生产的白血病ELISA抗体检测试剂盒、自动酶标仪（美国BioTek仪器有限公司）、微量移液器（eppendorf公司）、恒温培养箱（北京市光明医疗仪器厂）、振荡器、高压灭菌锅、离心机等实验所需仪器设备。

2 实验样品

2.1 血清样品的准备

采集新疆昌吉市某规模化肉种鸡场血清数共800份，分两批采集，每批400份。第一批采集14～15周龄的鸡群，其中，14周龄采集A、B圈血清各100份、15周龄采集C、D圈血清各100份。第二批采集21～22周龄的鸡群，其中，21周龄采集A、B圈血清各100份、22周龄采集C、D圈血清各100份。

2.2 样品采集时间、方法及样品储存

血清共分8次均等采集，分别为2016年7-8月、2016年9-10月；主要采集方法为翅静脉采血法，血液采集后用离心机提取血清即样品，置于-20℃冰箱储存备用。

3 试验方法与判定

3.1 血清稀释

样品：检测前用样品稀释液将被检样品进行500倍稀释。

对照：注意不要稀释对照。不同的样品要注意换吸头。在将样品加入检测板前要将样品充分混匀。

3.2 试验方法步骤

使用前，将所有试剂恢复到室温，并将其混匀后再进行使用。

（1）标记：将抗原包被板取出并做好标记。

（2）加样：在板的相应孔中，分别加入阴性对照、阳性对照和被检样品（已稀释）各100 μL，加盖后，在室温下孵育30 min。

（3）洗板：将各孔的液体甩去，每个孔中加入350 μL的纯水或超纯水。第1次加入纯水后浸泡2 min，然后将各孔的液体甩掉，以上步骤再重复4次（无需浸泡）。用吸水纸轻拍使之吸干。注意在每次洗涤之间和加下一种液体前不要让板干燥或放置时间过久。

（4）加酶标抗体：每孔加入100 μL酶标抗体，室温孵育30 min。

（5）洗板：重复（3）步骤。

（6）加底物液：每孔中加入100 μL的TMB底物，室温下孵育15 min。

（7）加终止液：每孔中加入100 μL的终止液终止反应。

（8）读数：测定并记录各孔在650 nm波长的吸光值（A650）。

3.3 结果判定

（1）试验结果需同时符合下列条件：

阳性对照平均OD值与阴性对照平均OD值之差大于0.100。

阴性对照平均OD值小于或等于0.150。

（2）判定：

阳性对照和样品的OD值应经阴性对照OD值校正。阳性对照：OD阳平均值－OD阴平均值，样品：OD样平均值－OD阴平均值；S/P=（OD样平均值－OD阴平均值）/（OD阳平均值－OD阴平均值）。

S/P比值小于或等于0.60，判为阴性。S/P比值大于0.60（抗体滴度大于844），判为阳性，表明曾感染ALV-J。

4 净化措施

该肉种鸡场是父母代种鸡场，饲养管理实行严格的全进全出饲养方式。针对检测发现的问题，采取了严格的淘汰措施，加强鸡舍环境卫生管理与消毒，加强鸡舍通风，控制人员出入等措施。

4.1 淘汰措施

对检测中发现的ALV-J亚群阳性鸡只全部淘汰，彻底消除传染来源。同时，在日常饲养管理过程中，加强对鸡群的观察，对有临床症状的病鸡及已死亡鸡只及时淘汰，并进行无害化处理。

4.2 加强饲养管理

为保证鸡群的营养状况，采用全价饲料喂养，确保鸡只营养均衡。

4.3 加强环境控制

严格执行养鸡场的卫生管理制度，对出入鸡场人员采用紫外线全身消毒、新鲜石灰水消毒等，对进出车辆采取石灰水消毒；每天对鸡舍环境及场内设施设备进行消毒，保持鸡舍内空气的流通，及时清除粪便。

5 结果与分析

5.1 第一次J亚群鸡白血病血清抗体水平分析

从表格可以看出（表1）：第1次对某肉种鸡场A（14周龄）、B（14周龄）、C（15周龄）、D（15周龄）4栋鸡舍不同日龄鸡群400份血清的检测，结果阳性总数为94只，阳性率为23.50%，平均OD值为0.273，其中A、B、C、D 4个圈舍阳性率分别为26.00%、21.00%、28.00%、19.00%。

通过统计可知，A、B、C、D 4栋圈舍检测样本的平均OD值分别0.287、0.315、0.275、0.216，总体OD值为0.273。

表1 昌吉市某规模化肉种鸡场ALV-J血清抗体水平及阳性率汇总表

5.2 第二次J亚群鸡白血病血清抗体水平分析

从表格可以看出（表2）：第2次对某肉种鸡场A（21周龄）、B（21周龄）、C（22周龄）、D（22周龄）4栋鸡舍不同日龄鸡群400份血清的检测，结果阳性总数为31只，总阳性率为7.75%，平均OD值为0.109，其中A、B、C、D 4个圈舍阳性率分别为9.00%、10.00%、7.00%、5.00%。

通过统计可知，A、B、C、D各圈舍的OD值分别0.117、0.129、0.098、0.090，总体OD值为0.109。

6 分析与讨论

从结果分析可知，对昌吉市某规模化肉种鸡场4栋鸡舍不同日龄的鸡群分两批进行检查，每次各检测400份血清。第1次检测时间为14～15周龄，分别检测了A、B、C、D4栋鸡舍各100只鸡，结果阳性总数为94只，总阳性率为23.50%，平均OD值为0.273，其中A、B、C、D4栋鸡舍阳性率分别为26.00%、21.00%、28.00%、19.00%。

表2 昌吉市某规模化肉种鸡场ALV-J血清抗体水平及阳性率汇总表

针对此种情况，鸡场采取了严格的淘汰措施，对第1批检测出为阳性的种鸡进行淘汰；严格观察鸡群，及时淘汰病鸡、死鸡；加强鸡场消毒、通风，7周后再次进行检测，阳性率明显下降，4栋鸡舍不同日龄（21～22周）鸡群400份血清的检测，结果阳性总数为31，阳性率为7.75%，下降了15.45个百分点，平均OD值为0.109。其中A、B、C、D4栋鸡舍阳性率分别为9.00%、10.00%、7.00%、5.00%。由23.50%下降到7.75%。

参考文献

[1] 崔治中. 我国鸡群 J 亚群白血病流行的过去、现在和将来及其防控：对我国动物疫病防控的启示[J].现代畜牧兽医，2015(1)：30-32.

[2] 崔治中，孙淑红，赵鹏，等.对种鸡场禽白血病净化方案的建议[J].中国家禽，2014(1)：3-6.

[3] 马秀丽.鸡病毒性免疫抑制病的发展趋势与防制措施[J].山东畜牧兽医，2000（2)：36-38.