HPLC 法测定射干扶正口服液中射干苷的含量*

王红丽，展 锐，郭 敏

甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050

射干扶正口服液是甘肃省名中医廖志峰主任医师的经验方，具有益气解毒，散瘀消癥之功，用于原发性肝癌、肝转移瘤、中晚期肝癌及术后患者的治疗，临床效果显著［1-3］。处方中君药为射干，具有清热解毒、利咽消痰、散血消肿功效［4-7］。射干苷为其主要成分，笔者检测射干苷含量为射干扶正口服液含量控制标准提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试药与试剂 射干扶正口服液(甘肃省中医院中药研究所制备)；射干苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：111632-200501)；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，并经0.45 μm滤膜过滤，所用其他试剂均为分析纯。实验所用药材饮片由甘肃省中医院药学部提供。

1.1.2 仪器 1525型高效液相色谱仪，美国Waters公司；B-220型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；10-1112型超声波清洗仪，宁波新芝生物科技股份有限公司；电子天平，上海精密科学仪器有限公司；HHS21-4B型电热恒温水浴锅，上海医疗器械五厂；台式离心机，上海安亭科学仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈 - 水（28∶72）；流速：1.0 mL/min；进样体积：10 μL；检测波长：265 nm；柱温：30℃。

1.2.2 对照品溶液的制备 取射干苷对照品适量，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL中含射干苷368 μg的对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液的制备 将射干扶正口服液经0.22 μm滤膜过滤即得供试品溶液。

2 结果

2.1 线性关系考察 精密量取已配制对照品溶液（368 μg/mL）各 0.5、1.5、2.0、2.5、3.0、5.0 mL，置10 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按“1.2.1”项色谱条件操作，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。得到回归方程为：Y=44.21X-0.6，r=0.999 8，线性范围为18.40～184.00 μg/mL。表明在此浓度范围内线性关系良好。

2.2 精密度实验 精密吸取射干苷对照品溶液，连续进样 5次，每次 10 μL，以“1.2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图，峰面积的RSD=0.99%，表明仪器进样精密度较好。

2.3 专属性考察 分别量取射干苷对照品溶液、射干阴性对照液及样品溶液适量，按“1.2.1”项色谱条件操作，记录色谱图。结果供试品溶液与对照品溶液均在相同保留时间出现吸收峰，阴性对照无干扰，同时本实验条件下射干苷与其他组分分离完全。见图1。

图1 射干苷含量测定HPLC色谱图

2.4 回收率实验 采用加样回收法，取已知含量（58.35 μg/mL）的同批射干扶正口服液9份，每份约1 mL，精密量取，分别精密加入射干苷对照品溶液（55.20 μg/mL）各 0.5、1、2 mL，每个比例制备3份样品。按“1.2.3”项下相应方法制备供试品溶液。以“2.1.1”项下色谱条件测定，记录色谱图，计算回收率。结果提示，高、中、低浓度的方法平均回收率为99.75%，RSD=1.11%。见表1。

表1 射干扶正口服液中射干苷的回收率测定结果（n=9）

2.5 供试品含量测定 取10批射干扶正口服液，精密量取，按“2.1.1”项方法制备供试品溶液，每批测定3次，计算射干苷的平均含量为58.35mg/g，RSD=0.05%。见表2。

表2 射干扶正口服液中射干苷的含量测定（n=10）

3 讨论

射干扶正口服液由射干、黄芪、虎杖、猪苓、车前子等药组成。前期研究发现［1］，该方可调节外周血中总T淋巴细胞，通过抑制肿瘤生长、调节机体免疫及镇痛等作用达到治疗肿瘤的效果。本实验通过对HPLC色谱条件的考察，得到射干苷色谱条件及标准曲线，通过测定样品中射干苷的含量，可得到射干扶正口服液的质量控制标准。

参考文献

［1］王红丽，张晓明，刘效栓，等.射干扶正口服液对H22肝癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及T细胞功能的影响［J］.兰州大学学报：医学版，2012，38(3):42-44.

［2］王红丽，张晓明，焦正花，等.正交试验优化射干扶正口服液的提取工艺［J］.西部中医药，2012，25(2):23-24.

［3］焦正花，王红丽，张小华，等.射干口服液质量标准研究［J］.中国中医药信息杂志，2011，18(12):62-66.

［4］中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015年版一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2015：285.

［5］邱鹰昆.射干的化学成分研究［J］.中国药学杂志，2006，41(15):1133-1135.

［6］陈云珠.射干药理作用的现代研究进展［J］.中国中医药现代化远程教育，2006，4(10):27-29.

［7］郭志辉.HPLC法测定射干配方颗粒中射干苷的含量［J］.药物分析杂志，2009，29(8):1375-1377.