精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液50R在模拟临床使用过程中的稳定性研究

梅丽　栗凤娟　牛瑞娟　卓盼　王军军

[摘要] 目的 选取该公司生产的与原研厂家的精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R），按照萬邦笔使用说明书对笔芯内精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）进行完全模拟临床注射操作，至注射行程终点，对其初始、中间、取样后笔芯中剩余药液的含量与可溶性重组赖脯胰岛素进行检测，评价其在临床使用中是否稳定和符合相关规定。方法 采用Inertsil ODS-SP色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.2 mol/L 硫酸盐缓冲液-乙腈（74∶26）；检测波长为214 nm；流速为0.8 mL/min；柱温为40℃。模拟临床注射操作，在指定时间点取样检测。结果 全部样品各时间点取样与剩余药液的含量均在产品标示量的90.0% ～105.0%范围内，可溶性重组赖脯胰岛素在45.0%～55.0%范围内，RSD（n=6）均在2.0% 以内，符合相关规定。结论 患者在临床使用中严格依据笔式注射器及笔芯使用说明书进行操作，精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）笔芯内重组赖脯胰岛素含量与可溶性重组赖脯胰岛素均未发生显著变化，稳定性良好。

[关键词] 精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）；万邦笔；含量；可溶性赖脯胰岛素；临床使用；高效液相色谱仪

[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-4062（2017）12（b）-0024-03

[Abstract] Objective To evaluate whether it is steady and conforms to the related regulations in clinical use by selecting the mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection（50R） produced by our company and conducting the totally simulation clinical injection operation to the final point of injection course， and testing the content of residual liquid in cartridge and soluble recombinant lyline insulin. Methods Inertsil ODS-SP chromatographic column （250 mm×4.6 mm，5 μm）； mobile phase 0.2 mol/L；sulfate buffers-acetonitrile（74：26）； detection wavelength 214 nm； flow rate 0.8 mL/min； column temperate 40℃， and the clinical injection operation was stimulated and the samples were selected for test at the specific time point. Results The samples at various time points and content of residual liquid of all samples were in the 90.0%～105.0%， and the soluble recombinant lyline insulin was 45.0%～55.0%， and RSD（n=6） was in 2.0%， conforming to the related regulations. Conclusion The patients should conduct the operation strictly according to the pen injector and instructions， and there are no obvious changes of mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection （50R）， content of residual liquid in cartridge and soluble recombinant lyline insulin， and the stability is good.

[Key words] Mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection （50R）； Wanbang pen； Content； Soluble recombinant lyline insulin； Clinical use； High performance liquid chromatography

2型糖尿病（T2DM）是常见的一种内分泌代谢疾病，该病具有遗传易感性，尤其在环境因素的触发下易发病[1]。近年来，随着人们生活水平的不断提高以及饮食结构的不断变化，其发病率呈上升趋势[2-3]。精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）含有50%的可溶性重组赖脯胰岛素和50%的精蛋白锌重组赖脯胰岛素，与可溶性赖脯胰岛素相比，皮下吸收速度更加迅速，满足餐后胰岛素的需要。并且鱼精蛋白结合后释放缓慢，作用时间比较长，可以替代基础分泌[4]。林旋等人[5]的研究还发现精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）可明显改善2型糖尿病患者血糖代谢，增强其免疫功能，减轻炎症反应，从而降低其心血管事件的发生。张宏颖等[6]的研究结果表明精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）可以更好的控制餐后血糖，尤其是早晚餐后血糖，并且无严重的低血糖事件发生，具有较好的安全性。而且注射时间非常灵活，进餐即打针，给患者带来了极大的方便。目前大量研究表明精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）（商品名：优泌乐50）在临床治疗2型糖尿病安全、方便、有效，值得临床推广应用[7]。所以研究精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液在临床使用过程中的稳定性研究具有非常重要的意义。

1 仪器与试药

仪器：岛津20A高效液相色谱仪。对照品：賴脯胰岛素对照品（批号：140729-200501）。参比制剂：精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）（商品名：优泌乐50，批号：C509110A）。样品：精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）（批号：B201608501、B201608502、B201608503）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.2 mol/L硫酸盐缓冲液-乙腈（74：26）；柱温：40℃；流速：0.8 mL/min；检测波长：214 nm；进样量：20 μL。

2.2 系统适用性

取赖脯胰岛素对照品适量，加0.01 mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1 mL中含1 mg的溶液，放置，使A21脱氨赖脯胰岛素含量为0.8%～11.0%。在上述色谱条件下，重组赖脯胰岛素主峰与A21脱氨赖脯胰岛素峰之间的分离度不小于3.0，重组赖脯胰岛素主峰的拖尾因子不大于1.5。该色谱条件用于含量测定，按外标法以赖脯胰岛素峰与A21脱氨赖脯胰岛素峰面积之和计算。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取赖脯胰岛素对照品适量，用0.01 mol/L盐酸溶液溶解并制成每1 mL中含20单位的溶液，作为对照品溶液。

2.4 检测方法及结果

每批样品分别取12 支，分为6组（2支/组）进行试验。按照笔式注射器及笔芯使用说明书缓慢颠倒或滚动笔芯至规定次数，将笔芯和注射器针头正确安装于胰岛素笔式注射器上，排出笔芯中的气泡后，正确设置注射剂量为30 IU[d1～d9，模拟临床中患者用法与用量，按照体重75 kg，0.4 IU/（kg·d）的给药剂量计算]，并注射出药液，取下注射器针头，将上述装有笔芯的笔式注射器于室温下避光静置。每24 h重复上述操作，分别在d1、d3、d6、d9收集注射出的药液至容器中，并迅速用微量移液枪快速精密吸取两份200 μL药液备用。按照上述方法注射至行程终点前15 IU处（预实验测定），放置24 h，将笔式注射器及笔芯缓慢颠倒或滚动笔芯规定次数，推注药液至行程终点，用微量移液枪从容器中快速精密吸取200 μL药液，用于剩余药液混匀后的检测[1]。

取200 μL药液，加入0. 99 mol/L盐酸溶液6 μL，振摇使其完全澄清，用0. 01 mol/L盐酸溶液溶解并制成每1 mL中含20单位的溶液，作为含量供试品溶液。取200 μL 药液与0.1 mol/L 200 μL Tris-盐酸缓冲液[pH （8.2，25±1）℃]，混合，振摇，（25±1）℃放置1 h，用0.2 μm微孔滤膜滤过，取滤液，每1 mL加入0. 99 mol/L盐酸溶液15 μL，作为可溶性赖脯胰岛素供试品溶液，见表1。

3 总结与讨论

该研究选取该公司生产的三批精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）和礼来公司的优泌乐50，按照使用说明书，完全模拟临床注射操作，按照体重75 kg，0.4 IU/（kg·d）的给药剂量计算，选择注射剂量为30 IU，并且选取了患者单次注射剂量100 μL （ 即10 IU） 作为小样本量待测样品溶液的体积。同时，为排除胰岛素注射笔的注射精度对实验结果的影响，采用先注射出较大体积的药液，再用微量移液枪吸取的方式，尽量排除可能引入的系统误差，孙雪等[8]的研究发现小样本量法及大样本量法检测同批次预混注射液，得到的结果无显著区别，并符合方法学的验证，因此该次研究可以真实反映每只笔芯的实际含量。

该研究中的注射行程终点是依据万邦笔的使用说明书“注射笔停止”的描述进行确定。在预试验中考察了三批笔芯样品的实际装量，并检测了注射至行程终点时残余在笔芯中的药液体积，依据上述数据最终确定注射至行程终点的取样时间点，并最终选取了注射至行程终点前15 IU 处作为剩余药液的混匀体积，以考察玻璃珠在笔芯内的运动空间减小后，样品中的重组赖脯胰岛素含量和可溶性重组赖脯胰岛素是否稳定和符合规定。结果表明，精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）在使用过程中和使用终末期含量和可溶性赖脯胰岛素没有显著差异，并且含量和可溶性赖脯胰岛素均符合质量标准要求（90.0%～105.0%与40.0%～ 55.0%），因此，精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）在使用中和使用终末期可保证成分充分混匀。

由于该实验的温度仅是模拟临床使用药常见的使用和保存温度，不能代表其他特殊温度条件。患者在使用过程中严格按照使用说明书操作时可以完全保证药品的质量。

在可溶性赖脯胰岛素的检测过程中，通过向药液中加入tris缓冲液使部分与鱼精蛋白物理吸附的可溶性重组赖脯胰岛素达到解吸附的效果。混悬液中的晶体大小约为1～20 μm，0.2 μm 滤膜可将其完全滤过，从而使可溶性重组赖脯胰岛素的检测结果准确可靠。

随着精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）在临床中的广泛应用，已经有不少学者研究其在临床应用中的疗效，但是对笔芯质量控制及检测使用中的笔芯质量还没有见报道[9-12]。该实验模拟临床使用精蛋白锌重组赖脯胰岛素混合注射液（50R）的操作及室温保存条件，运用高效液相色谱法测定胰岛素含量，考察其在使用过程中的变化，为临床开启预混胰岛素注射液后正确使用和保存提供依据。

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（收稿日期：2017-09-20）