雅安藏茶水提物的降脂活性研究

唐皓迪　颜同文　罗晓琳　吴俊洋　杨天兵　曾茂　郝军莉　王丹

摘要：为探究雅安藏茶水提物的降脂活性，利用高脂饮食诱导，成功构建高脂小鼠模型，按照0.2-0.4mL/（10g·bw）的剂量经口灌胃藏茶的水提取物，3个月后分别检测各治疗组小鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C以及Glu指标，分析肝脏的病理形态与对照组进行比较。结果显示，和高脂空白组相比，治疗组小鼠血清中的TC、LDL-C、Glu含量显著降低（P<0.05）；其中高劑量治疗组LDL-C降低极显著（P<0.01），HDL-C含量显著上升（P<0.05）；而治疗组小鼠血清中TG含量的降低和低剂量治疗组HDL-C含量的增高均无显著性（P>0.05）。另外，和高脂空白组相比，预防组小鼠血清中的TC、LDL-C、Glu含量显著降低（P<0.05），其中TC、LDL-C降低极显著（P<0.01），HDL-C含量也显著上升（P<0.05），而TG含量降低不显著（P>0.05），这与治疗组结果相似。由此可见，藏茶水提物不仅可降低高脂血症小鼠的血脂、血糖水平，而且对高脂饮食具有一定的调节作用。

关键词：雅安藏茶：小鼠高脂模型：降脂

文献标志码：A

文章编号：1674-5124（2018）02-0062-05

0引言

随着人们生活水平的提高，高脂高糖饮食造成的向心性肥胖、非酒精性脂肪肝、异常葡萄糖代谢、高血压、脂代谢紊乱等代谢综合征（metabolicsyndrome，MS）的发病率逐年升高，且在年轻人中最为明显。由此引起的心脑血管疾病已成为危害人类健康的主要杀手，脂代谢与健康的关系越来越受到人们的重视。因此，开发具有降脂功能的饮食，对于预防和改善高脂血症具有重要意义。黑茶是中国六大茶类之一，因其特有的风味、耐冲泡以及保健功能越来越受到人们的关注。黑茶中目前最被人熟知且研究最为广泛的是普洱茶。如肖凯等探讨了普洱茶水提取物对大鼠非酒精性脂肪肝病的干预作用，其结果表明，普洱茶水提取物具有明显降低血脂，改善肝脏脂肪变性的作用。而和普洱茶相比，同样具有上千年的饮用历史和深厚文化底蕴的雅安藏茶，人们知之甚少。

雅安藏茶，是指产于雅安专供藏区的一种茶。藏茶属于最典型的黑茶，具有解腻、助消化等功效。目前，针对雅安藏茶的研究主要集中在风味成分分析、制作工艺改良等方面。如证明，雅安藏茶中富含丰富的茶多酚、儿茶素以及茶黄素、茶红素、茶褐素等有效成分，并且随着储藏时间的延长，茶叶中的茶褐素含量逐年增加。而针对雅安藏茶的降脂效果及其作用机制的研究相对较少。因此，本文在构建高脂模型的基础上，探究藏茶的降脂活性，为深入揭示其作用机制和开发具有保健功能的藏茶饮料提供理论和实验依据。

1材料与仪器

1.1实验动物

54只6～8周龄，雄性，（20±2）g，SPF级昆明小鼠，购自四川达硕生物科技有限公司，公司科技部实验动物生产许可证编号：SCXK（川）2008-24。

1.2茶叶水提物制备

称取雅安藏茶5g，打成粉后加入煮沸的蒸馏水50mL，水温为90-100℃，静置30s，过滤茶渣收集茶水；向茶渣中再次加入煮沸蒸馏水50mL，静置40s，重复3次后，将3次收集的茶水混合、备用。

1.3药品与试剂

动物高脂饲料配方为胆固醇1%，胆盐0.2%，猪油10%，蛋黄粉10%，尿嘧啶0.1%，基础饲料78.7%。TC、TG、LDL-C、HDL-C、Glu检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.4实验仪器

SB-JS-2型洁净工作台，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；Xmark型酶标仪，Bio-RAD公司：CKX41型倒置显微镜，日本OLYMPUS公司：SC-3610型低速离心机，科大创新股份有限公司：JJ-2组织捣碎匀浆机，常州国华电器有限公司；LeicacM1860冷冻切片机，德国莱卡：石蜡切片机浙江金华市科迪仪器设备有限公司，K XW-80A微型漩涡混合仪，上海沪西仪器分析厂；电子天平，上海精科称量仪器厂；以及96孔血清凝血板，计数器，微量加样器，灌胃针，手术剪等。

2实验方法

2.1实验动物分组及处理

首先将54只雄性昆明小鼠随机分为对照组、预防组、高脂模型组，其中对照组12只，喂食普通饲料；预防组10只，喂食高脂饲料，同时灌胃藏茶水提物；高脂模型组32只，喂食高脂饲料，构建饮食诱导高脂模型，时间为60d。分别从对照组和高脂模型组中随机选出2只小鼠进行血脂及肝脏病历切片检测以判断高脂模型是否构建成功。建模成功后，将剩余30只高脂模型小鼠再按照每组10只分为高脂空白组、低剂量治疗组、高剂量治疗组3个组，此时实验动物共有5组，如表1所示。各组分别采用经口灌胃给药法，灌胃生理盐水、藏茶水提物，1次/d，共90d。

2.2小鼠日常行为

注意观察并记录小鼠在实验期间的进食、饮水，行为等变化。实验期间室内通风良好，自然昼夜照明，氨浓度<20mg/L。相对湿度为40%-70%，室温保持在18～22℃。各组小鼠均自由进食、饮水。

2.3小鼠体重监测

实验初始，每只小鼠进行标记、称重；实验过程中，每隔7d称取、记录每只小鼠的体重。

2.4血脂、血糖检测

末次给食后，小鼠禁食、不禁水，12h后眼球取血，颈椎脱臼处死小鼠。全血室温静置3h，待血细胞析出后以3000r/min离心15min，小心吸取血清样品，待检测。根据检测试剂盒中的说明书，利用酶标仪分析血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C及Glu等指标。

2.5肝组织形态学观察

小鼠处死后立刻取出其肝脏最大叶距边缘5mm处的肝组织，用10%中性甲醛溶液固定、脱水、二甲苯透明，石蜡包埋，切成6μm厚度，HE染色后，在光学显微镜下观察，记录。

2.6数据分析

使用SPSS21.0统计软件分析实验，两组比较采用独立样本t检验，显著性界定为0.05。计量资料数据以x±s表示。

3结果与分析

3.1建模期雅安藏茶水提物对小鼠体重影响

建模期间各组小鼠体重都随饲养时间的延长而增加。和对照组相比，高脂组小鼠体重增长陕速，脂肪层明显增厚，清晰可辨（如图1所示），说明高脂饮食确可诱导小鼠体重增加：而灌胃了藏茶水提物的预防组虽使用高脂饮食诱导，小鼠体重增加仍很缓慢，如图2所示。提示雅安藏茶可能具有降脂、减重作用。

3.2高脂模型组血脂水平分析

高脂饲料诱导60d后，从对照组和高脂组各随机选出2只小鼠，眼眶取血、分离血清，检测小鼠血清中的TG、TC、HDL-C指标，各组平均值，结果显示对照组血清中的TG、TC、HDL-C含量分别为1.25，2.48，1.76mmol/L；高脂模型组分别为1.72，4.70，1.63mmol/L。高脂组TG和TC含量较对照组分别增高了37.6%和89.52%，而和对照组相比，高脂模型组的HDL-C降低了7.38%，如图3所示。

3.3高脂模型组小鼠肝脏病理形态的观察

如图4所示，对照组小鼠肝组织肝小叶结构正常，肝细胞规则排列，肝细胞大小正常，胞核位于细胞中央。高脂组小鼠肝细胞则以弥漫性小泡性脂变为主，有脂肪空泡（见图中红圈内的黑色箭头所指），结合体重增长曲线和血脂三项分析的结果，判定高脂小鼠建模成功。

3.4雅安藏茶水提物的降脂、降糖活性研究

各组小鼠灌胃处理90d后，眼眶取血并检测各组血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C和Glu的含量，结果如表2所示。与高脂空白组相比，治疗组小鼠血清中的TC、LDL-C和Glu含量显著降低（P<0.05），其中高剂量治疗组LDL-C降低极显著（P<0.01），同时HDL-C含量显著上升（P<0.05），而低剂量治疗组HDL-C含量增加不显著（P>0.05）；高、低剂量治疗组TG含量降低与高脂空白组相比均不显著（P>0.05）。和高脂空白组相比，预防组血清中的TC、LDL-C和Glu含量显著降低（P<0.05），其中TC、LDL-C降低极显著（P<0.01），HDL-C含量也显著上升（P<0.05），而TG含量降低差异不显著（P>0.05），与治疗组结果相似。

4结束语

调整饮食和改善生活方式是各种高脂血症治疗的基础，尤其对原发性高脂血症患者，应首选饮食治疗。因此，开发具有降脂功能的饮食，对于预防和改善高脂血症有一定的应用价值。本文利用高脂饮食诱导，成功构建了小鼠高脂模型，并以此为研究基础，探究雅安藏茶水提物对高脂饮食小鼠血脂、血糖的影响。结果显示，高脂模型小鼠灌胃雅安藏茶水提物后，其血清中TC、TG、LDL-C、Glu等各项指标都较高脂空白组低，其中高剂量治疗组血清中的TC和Glu含量的降低具有显著性（P<0.05），LDL-C含量降低极显著（P<0.01），而HDL-C含量显著上升（P<0.05），高剂量治疗组结果优于低剂量治疗组，这说明藏茶水提取物具有降脂、降糖活性。

而预防组小鼠和高脂空白组小鼠虽同时喂食高脂饲料，但预防组小鼠从开始就灌胃雅安藏茶水提物，在雅安藏茶水提物的干预下，预防组小鼠的体重、血清中TC、TG、LDL-C、Glu等各项指标均较高脂空白组低，其中TC、LDL-c、Glu的降低具有显著性，HDL-C含量和高脂空白组相比也显著增加。HDL-C又称高密度脂蛋白一胆固醇，其作用为转运磷脂和胆固醇，其含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关，目前HDL-C含量减少已被确定是冠心病发生的危险因素之一。因此，长期饮用雅安藏茶不仅有利于改善血脂水平，而且对于脂代谢异常而引起的心脑血管疾病具有一定的预防作用。

为进一步探究雅安藏茶降脂、降糖的作用机制，课题组下一步将检测各组小鼠肝脏中与糖、脂代谢密切相关的基因，如ACC、MCD、MCAD、CPT-1、FAS等mRNA的表达水平。如Shimamura等的研究表明普洱茶提取物能显著减少小鼠血清中TG水平，同时降低小鼠肝脏中SREBP-lc和FASmRNA的表达水平。其结果表明，普洱茶提取物能够通过下调SREBP-lc及其相关因子水平减少脂肪生成。另外，还有文献报道高脂血症大鼠肠道出现了菌群失调，双歧杆菌、乳酸杆菌和肠球菌数量明显减少，肠杆菌数量则相对增多，肠道菌群失调可加重脂质代谢紊乱，并且双歧杆菌、乳酸杆菌和肠球菌数量的减少可以削弱血中胆固醇被轉化利用的过程，使血脂升高。由此可见，肠道菌群影响着宿主的脂肪代谢和储存以及能量平衡的调控，是高脂血症等相关代谢疾病发生的一个重要中间环节。因此，课题组还将利用收集的各组小鼠粪便，从微生态学角度揭示肠道菌群在高脂饮食诱导的高脂血症发展中的动态变化及其原因，这不仅为以肠道菌群为靶点进行的膳食营养干预提供理论参考：同时为研究雅安藏茶降脂、降糖的作用机制研究提供理论及实验依据。