薄层色谱法检测玉米中黄曲霉毒素Bl

冯莉

摘要：黄曲霉毒素（简称AFT）是由黄曲霉和寄生曲霉所产生的次生代谢物，具有很强的毒性和致癌性，在自然条件下，黄曲霉毒素耐热性强，当温度达到280℃时才发生裂解而破坏，因此常规烹调条件下很难将其清除。本文讨论应用薄层色谱法对毒性最强的黄曲霉毒素Bl进行的检测，文中讨论了薄层板的制法、点样、展开的方法以及不同现象所对应的黄曲霉毒素Bl的污染情况。

关键词：玉米；真菌毒素；黄曲霉毒素Bl；薄层色谱

中图分类号：S513

文献标识码：B

文章编号：2095-9737（2018）08-0020-01

黄曲霉毒素不是单一的一种毒素，是一类结构相似的物质，包括十七种异构体。在紫外线的照射下可发出荧光，根据荧光颜色的不同，可以把黄曲霉毒素分为B族和G族。黄曲霉毒素对玉米及其制品的污染非常广泛，对人体的危害分级属于极毒类，对人主要引起急性中毒性肝炎和中毒性脑病。黄曲霉毒素的慢性中毒发生在高温高湿地区黄曲霉毒素污染严重的地区，表现类似雷耶氏症。动物试验表明黄曲霉毒素具有强致癌性。其被定为I类可能致癌物，其中黄曲霉毒素Bl的毒性更是居于首位。

1 实验原理

一定量玉米样品粉碎至一定细度，用适当的溶剂将其中的黄曲霉毒素Bl经过一系列的提取以及浓缩操作之后在薄层板上进行薄层分离，然后在波长为365 nm的紫外光照射下能够发出蓝紫色的荧光，与标准点比对，根据其产生荧光反应的最低检出量来对样品中的黄曲霉毒素Bl进行定量，其最低检出限量为0.0004 μg。

2 仪器和试剂

仪器：锤式旋风磨；样品筛；调速振荡器；电子天平（0.1 g）；玻璃板；薄层板涂布器；展开槽；紫外光灯；微量注射器。试剂：三氯甲烷；石油醚；甲醇；苯；乙腈；无水乙醚；丙酮；硅胶G；三氟乙酸；无水硫酸钠；氯化钠；黄曲霉毒素Bl标准品；次氯酸钠溶液（25 g/L）。以上试剂未注明纯度的均为分析纯。

3 薄层实验

3.1 样品处理

由于玉米籽粒较大，污染严重的样品一粒就会左右检测结果，因此需要大量取样，将分取的1 kg左右玉米样品全部粉碎之后混匀，称取充分混匀的样品20 g于具塞磨口三角瓶中，再加入石油醚 甲醇混合液（30 mL石油醚+100 mL55%甲醇水溶液），之后置于调速振荡器上振荡30 min，将静置后的溶液滤入分液漏斗，静置直至分层，从下方将甲醇溶液放入另一具塞磨口锥形三角瓶中，移取20 mL滤液至另一分液漏斗加20 mL三氯甲烷，振摇后静置分层。放出三氯甲烷层，经无水硫酸钠后用慢速滤纸滤入50 mL蒸发皿中，再用少量三氯甲烷重复振摇提取并清洗过滤设备，并入蒸发皿中，将其置于通风橱，在65℃的水浴条件下挥发后取下，冷却并加入1 mL苯乙腈混合液（98 mL苯+2 mL乙腈），混合均匀充分溶解后，用胶头滴管吸取清液于2 mL具塞试管中备用。

3.2 薄层板制备

用天平称取硅胶G约3g，加入8g水，研磨成糊状后转移至薄层板涂布器中，涂成厚度约为0. 25 mm，长20 cm宽为5 cm的薄层板共三块。置于空气中干燥15 min，置于烘箱中，在100℃条件下活化2h左右，置于干燥器中备用。3.3点样、展开與观察

点样：以薄层板一端距边缘3 cm处作为基线，样液要点在基线上，每块薄层板宽5 cm，点样时每点之间及边缘的距离均为l cm，可点四个样点，用微量注射器滴加样液，控制每点的大小均匀一致，其直径约为3 mm。从左到右依次为①10 μL黄曲霉毒素Bl标准使用液（0.04 μg/ mL）；②20 μL制备好的样液；③20 μL样液与10 μL黄曲霉毒素Bl标准使用液（0.04 μg/mL）；④20 μL样液与10 μL黄曲霉毒素Bl标准使用液（0.2 μg/mL）。

展开与观察：加入10 mL无水乙醚于展开槽内进行预展开12 cm吹干之后加10 mL丙酮三氯甲烷混合溶液（8mL丙酮+92 mL三氯甲烷）于另一展开槽展开12 cm。第四点的高浓度黄曲霉毒素Bl标准使用液荧光点起到定位作用；如第二点未出现荧光反应，表明样品中黄曲霉毒素Bl含量在5μg/kg以下，此时第三点用做检查最低检出量是否正常产生荧光反应，如第二点出现阳性反应，第三点则起到定性作用，同时需要对样品做确证实验。加滴3滴三氟乙酸生成衍生物，与黄曲霉毒素Bl标准使用液产生的衍生物对比，判断其荧光反应是否是由于样品中存在黄曲霉毒素Bl而产生的。如果样液荧光点的强度与第一点一致，则确证实验之后即可认为样品中黄曲霉毒素Bl含量为5μg/kg，如果样液荧光点的强度大于第一点，则根据其强度稀释样液做展开实验，直至样液荧光点的强度与第一点一致，按照稀释比例计算样液黄曲霉毒素Bl含量。

4 结论

薄层色谱法测定玉米样品中黄曲霉毒素Bl方法简便易操作，对实验条件和仪器的要求不高，然而该方法只能做定性实验以及粗略的定量，如需准确定量则不能采用此种方法。