霉菌毒素分析的重要性

唐彩琰

由于饲用作物或饲料原料会受气候、农业生产方法和当地政府对霉菌毒素立法的影响，因此对即将收割的饲用作物进行霉菌毒素污染水平的分析至关重要。在一份关于塞尔维亚（Serbia）、波斯尼亚（Bosnia）和黑塞哥维那（Herzegovina）的2017年度玉米收割情况的调查中，黄曲霉毒素B1、伏马菌素B1和伏马菌素B2的含量都很高。

中图分类号：S852.4+4 文献标志码：C 文章编号：1001-0769（2018）05-0004-03

饲用作物或饲料原料在全球动物饲料生产中的使用正在提高食品生产用动物的化学污染和微生物污染的风险。饲料会受到微生物、霉菌毒素、动物副产品、有机污染物和有毒金属的污染。动物饲料一旦被污染，就会给人类和动物的健康都带来不利的影响。在这些污染因素中，霉菌毒素正在成为饲料和食品的主要污染物。

霉菌毒素是由多种真菌产生的次生代谢物。能产生霉菌毒素的真菌主要来自曲霉属、镰刀菌属和青霉属的真菌。黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）、赫曲霉毒素A（Ochratoxin，Ochra A）、伏马菌素（Fumonisin，FB）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）、T-2毒素和玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEA）是食品和饲料样本中最常见的霉菌毒素。许多食物和饲用作物样本在收割前、运输中和储存期间可能已被霉菌毒素污染。用于动物饲料的商品和产品包括玉米、小麦、大麦、大米、燕麦、坚果、牛奶、奶酪、豌豆和棉籽等，它们经常被霉菌毒素污染。霉菌毒素会在动物体内产生多种多样的副作用和毒性反应，影响它们的整体健康和生产力。霉菌毒素可导致动物发生霉菌毒素中毒症，由于该病能降低动物的生产力，提高它们的发病率，进而降低它们的生产性能，从而会给畜牧生产带来严重的经济损失。根据各种霉菌毒素的毒性强度和中毒症发生率，目前最受关注的霉菌毒素是黄曲霉毒素1（AFB1）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赫曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏马菌素1（FB1）和伏马菌素（FB2）以及T-2毒素。目前至少有100个国家对食物和饲料商品中的主要霉菌毒素实行管控。这些管控措施大部分与黄曲霉毒素相关，而且不同国家对霉菌毒素的接受水平差异很大。霉菌毒素最大可接受水平上的差异以及其他国家对其余霉菌毒素不进行管控给动物饲料行业提出了巨大的挑战，这些差异正在提高在动物饲料进入食品/饲料链之前对霉菌毒素污染水平进行分析的重要性。

1 霉菌毒素污染水平分析

为了确定饲料原料和其他商品是否受到霉菌毒素的污染，我们必须对这些物质中的霉菌毒素污染状况进行检测。由于霉菌毒素在谷物和其他商品中的分布并不均匀，因此正确的采样方法是获得可靠分析结果的首要條件。目前霉菌毒素的检测方法有很多种，常用的检测方法包括酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）法、薄层色谱（Thin-layer Chromatography，TLC）法、高效液相色谱（High-performance Liquid Chromatography，HPLC）法和气相色谱（Gas Chromatography，GC）法。这些方法大多采用固相柱净化提取物，并用免疫亲和技术去除杂质，以提高霉菌毒素的测定能力。ELISA法是一种在需要进行快速分析时可选择的方法，但需要用液相色谱-质谱串联（LC-MS/MS）法进行确证分析。LC-MS/MS法的检测灵敏性最高，也是分析食品和饲料样本霉菌毒素污染情况的首选方法。

2 多重霉菌毒素检测法

由于有必要对动物饲料的霉菌毒素污染情况进行检测，Patent Co公司正在采用一种基于超高液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）法的快速简便的多重霉菌毒素检测方法，通过将液相色谱分析技术与串联质谱分析技术结合起来，对饲料中受控的所有霉菌毒素（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马菌素B1、伏马菌素B2、T-2毒素、HT-2毒素、赫曲霉毒素A）进行测定和准确定量。

该方法采用“稀释和注射（dilute and shoot）”原理，包括提取物的提取和离心沉淀两个步骤。为了抵消电喷雾电离中的基质效应，提取物在注射到LC-MS/MS前首先与每一类霉菌毒素的[13C]标记内标物混合（13C AB1、13C DON、13C ZON、13C OTA、13C FB1和13C T-2）。该方法已经在玉米、配合饲料、小麦、大麦、大豆粉、麦麸、葵子饼粉和全价混合日粮中得到验证。该方法的性能参数通过内部验证获得。在空白样本的12个重复中，以2种水平（log和10×log）将11种霉菌毒素标准品混合物添加到其中。该方法的实验室内相对标准偏差（RSDr）为2.5%～13.4%，所有分析物的表观回收率为62%～115%。因此，我们可以认为“稀释和注射”法结合[13C]标记内标物可以确定动物饲料和配合饲料中所有欧盟管控的霉菌毒素。