蚕豆保健品中左旋多巴的测定方法研究

赵爱平 冯德建 许洋 邹燕 张琦 李怀平

摘要：建立蚕豆保健品中左旋多巴含量的高效液相色谱测定方法。样品经0.10mol/L盐酸溶液超声提取20min，XDB C18色谱柱分离，以甲醇-10mmool/L磷酸二氢钾溶液（体积比2：98）等度洗脱，280nm下检测，外标法定量。结果表明：左旋多巴质量浓度在1.656～265.0mg/L范围内与峰面积呈现良好的线性关系，方法的平均加标回收率为98.4%～100.9%，相对标准偏差为0.83%～2.18%，检出限为1.9mg/kg，定量限为6.3mg/kg。能够满足蚕豆保健品中左旋多巴含量的检测和质量控制需要。

关键词：蚕豆保健品；左旋多巴；高效液相色谱仪；蚕豆粉；蚕豆茶

0引言 蚕豆（vicia faba L.），豆科植物中的一种，属于蝶形花亚科，广泛种植于我国四川、云南、湖南等地，产量位居世界第一。蚕豆含有丰富的蛋白质、维生素和矿物质等营养元素，特别是其中的功效成分左旋多巴（L-Dopa），在临床上已被证实是治疗帕金森病的一线药物，在蚕豆的花和叶片中含量较高，具有重要的药用价值，以其为原料制成的保健品具有良好的市场前景。目前，对左旋多巴的测定主要有紫外分光光度法、薄层色谱法、毛细管电泳法、高效液相色谱法等，其中高效液相色谱法具有操作简单、灵敏度高、稳定性好等特点，本文通过对样品前处理和色谱条件的优化，建立了蚕豆保健品中左旋多巴含量的高效液相色谱测定方法，能够满足蚕豆保健品中左旋多巴含量的检测和质量控制，期为延伸蚕豆产业链和促进蚕豆深加工产业的快速发展提供技术支撑。

1材料与方法

1.1仪器与设备 Agilent 1200型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），Sartorius BP 211D型电子天平（德国Sartorius集團），Agilent XDB C18色谱柱（150mmx4.6mm，5μm，美国Agilent公司），KH-500DE型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），Millipore Milli-Q型超纯水器（美国Miflipore公司），XW-80A型漩涡混合器（上海驰唐实业有限公司）。

1.2材料与试剂 材料与试剂：0.45μm微孔滤膜（水相）；甲醇（美国Sigma-Aldrich公司），色谱纯；磷酸二氢钾（天津市科密欧化学试剂有限公司），优级纯；盐酸（成都市科龙化工试剂厂），分析纯；左旋多巴（中国药品生物制品检定所，含量≥98%）。 样品：蚕豆保健品（蚕豆粉）。 左旋多巴标准储备液：准确称取左旋多巴132.5mg，用0.10mol/L盐酸溶液溶解并定容至250mL，配制成质量浓度为530.0 mg/L的左旋多巴标准储备液，于4℃下保存。使用时根据需要稀释成适当浓度的标准工作溶液，现配现用。

1.3样品前处理 准确称取0.2g（精确到0.000 1g）蚕豆保健品样品于25mL比色管中，加入20mL 0.10mol/L盐酸溶液，于60Hz超声清洗器中超声提取20min，冷却至室温后用0.10 mol/L盐酸溶液定容至刻度，混匀，过0.45μm水相滤膜，供高效液相色谱仪测定。

1.4液相色谱条件 色{普柱：Agilent XDB C18色谱柱（150mmx4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-10mmol/L磷酸二氢钾溶液（体积比2：98）；流量：0.7mL/min；色谱柱温度：25℃；进样量：10μL，检测波长：280nm。

2结果与讨论

2.1样品前处理条件优化 左旋多巴在水中微溶，在乙醇、三氯甲烷或乙醚中不溶，在稀酸中易溶。本方法考察了不同浓度（0.05，0.10，0.15 mol/L）盐酸溶液作为提取溶剂的提取效率，结果表明左旋多巴在0.10mol/L盐酸溶液中提取最为完全。同时，本方法还对超声提取时间进行了考察，结果表明超声提取时间超过20min后，样品中的左旋多巴含量不再增加，因此选定超声提取时间为20min。

2.2样品色谱条件优化 本方法利用DAD检测器对左旋多巴进行全波长扫描，结果表明其在280nm处有最大吸收，因此确定280nm作为本方法的检测波长。由于左旋多巴在C18色谱柱上保留较弱，本方法考察了不同体积比的甲醇与10mmol/L磷酸二氢钾溶液作为流动相时样品的分离情况，结果见表1。由表可知，有机相甲醇的比例越高左旋多巴的出峰时间就越短，且与样品中其他基质成分的分离效果也越差，当降低甲醇的比例至2时，左旋多巴的出峰时间为5.2min左右，且色谱峰峰形尖锐、对称性好，能够与样品中其他基质成分实现很好地基线分离。因此，本方法确定甲醇与10 mmol/L磷酸二氢钾溶液的体积比为2：98。同时，本方法还分别考察了不同色谱柱温度和流量对样品分离的影响，如表1所示。可以看出，色谱柱温度的升高和流量的增大均会导致左旋多巴出峰时间前移，且与样品中其他基质成分的分离度下降，但均对色谱峰峰形影响不大。因此，本方法确定色谱柱温度为25℃，流量为0.7mL/min。图1是优化后空白溶液（0.10 mol/L盐酸溶液）、标准工作溶液、样品溶液和样品加标溶液的色谱图。

2.3线性范围、相关系数、检出限与定量限 用0.10 mol/L的盐酸溶液逐级稀释左旋多巴标准储备液，配制成质量浓度分别为1.656，16.563，33.125，66.250，132.500，265.000 mg/L的系列标准工作溶液，按照上述色谱条件进行测定，以峰面积y与对应的质量浓度x（mg/～L）绘制标准曲线如图2所示。结果表明，左旋多巴质量浓度在1.656～265.0 mg/L范围内与峰面积呈现良好的线性关系，线性方程为y=23.098 1x+10.7594，相关系数r为0.9999。以3倍信噪比（3S/N）确定本方法中左旋多巴的检出限为1.9mg/kg，以10倍信噪比（10 S/N）确定本方法中左旋多巴的定量限为6.3 mg/kg，能够满足蚕豆保健品中左旋多巴含量检测和质量控制需要。

2.4方法的准确度与精密度 准确称取蚕豆保健品样品24份，等分成4组，其中3组分别添加1.2，2.5，5.0mL的左旋多巴标准工作溶液，加标量分别为636.0，1 325.0，2650.0μg，按照本方法进行测定，计算方法的回收率和精密度。结果表明，3种不同添加浓度下测得蚕豆保健品中左旋多巴的平均回收率在98.4%-100.9%之间，相对标准偏差为0.83%-2.18%，说明本方法具有良好的准确度与精密度。

2.5实际样品的测定 分别准确称取购于市场的2种蚕豆保健品（蚕豆粉、蚕豆茶）样品各12份，等分成2组，其中1组用于测定样品中左旋多巴的含量，另外1组用于样品加标实验，分别按照本方法进行测定，结果如表2所示。可以看出，蚕豆粉的检测结果为7.52mg/g，样品加标回收率为97.7%～100.0%：蚕豆茶的检测结果为39.51 mg/g，样品加标回收率为98.1%～101.1%，表明本方法适合蚕豆保健品中左旋多巴含量的测定。

3结束语 本文率先优化了蚕豆保健品的前处理条件和色谱条件，建立了蚕豆保健品中左旋多巴含量的高效液相色谱测定方法，可为相关领域提供参考。方法的平均加标回收率为98.4%～100.9%，相对标准偏差为0.83%～2.18%，检出限为1.9mg/kg，定量限为6.3mg/kg，能够很好地满足蚕豆保健品中左旋多巴含量的检测和质量控制。