HPLC法测定维吾尔药养心达瓦伊米西克蜜膏中没食子酸的含量

司马义江·阿布都热西提 黄耀广

(新疆喀什地区食品药品检验所，新疆 喀什 844000)

养心达瓦依米西克蜜膏俗称维吾尔医药中的速效救心丸， 流传至今已有 2000 多年的历史；具有活血化瘀、通络止痛、镇静安神、补脑强心，又能清除异常致病体液，达到标本兼治的功效，临床广泛用于心胸作痛、 心悸、 胃虚、 视弱及神经衰弱。处方含麝香、 檀香、 珍珠、 沉香、 西红花、小檗果、余甘子、紫檀香、 金箔、 银箔、 琥珀、 香青兰等 26药材。以蜜膏服用，方便、快捷、疗效充分。养心达瓦依米西克蜜膏治疗冠心病稳定性心绞痛[1]，2003 年经国家食品药品监督管理局批准为国药准字号产品(国药准Z65020175，新疆维吾尔药业有限责任公司)。本文在原标准基础上[2]建立没食子酸含量测定标准，报道如下。

1 仪器和试药

1.1 仪器 Waters-2695型高效液相色谱仪(四元梯度泵、自动进样器、DAD检测器)，超声波溶解仪器(天津超声波仪器有限公司)，XS-205十万分之一电子分析天平(Mettler 瑞士)，ME403E电子天平(四川时运成套仪器有限公司)，超纯水机(北京格迈科技有限公司)。

1.2 试剂 没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110831-201204)，甲醇(色谱纯美国产)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯，养心达瓦伊米西克蜜膏(新疆维吾尔药业有限公司批号为0161038，0160622，0161103)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Pheomenex Luna C18色谱柱(250×4.6mm×5mm)，柱温35℃，流动相为甲醇-0.2%磷酸(5:95)为流动相，检测波长为273nm，流速1.0mL/min[3-4]。分别取样品溶液和对照品溶液各10μL按上述色谱条件分别进样测定。

2.2 对照品溶液的制备 精密称定没食子酸对照品11.48mg ， 置 50mL容量瓶中， 加 50 %甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为没食子酸对照品储备液，见图1。

2.3 供试品溶液的制备 精密称定供试品1.5g，置具锥形瓶中，密加入50%甲醇溶液50 mL，称定重量，超声处理30min，冷却，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得，见图2。

2.4 线性关系的考察 精密量取上述没食子酸对照品储备液0mL，2.0mL， 3.0mL， 4.0mL， 6.0mL， 8.0mL，10.0mL置10mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，注入液相色谱仪，测定。以进样浓度为横坐标、峰面积值为纵坐标绘制标准曲线，得标准曲线方程。没食子酸：y=3×10-7X+0.0003 R2=0.9998 。

没食子酸在 0.04592～0.22960 mgL-1范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密量取对照品溶液(没食子酸0.13776 mgL-1)，重复进样5次，每次进样10μL，求得没食子酸的RSD 为1.0% ，见表1。

表1 精密度试验

2.6 重复性试验 取同一批号的样品(批号：0161038)精密称取5份，按样品含量测定的方法测定没食子酸的含量，计算RSD，见表2。

表2 重复性试验

2.7 稳定性试验 取同一批号(批号0161038)分别在不同时间(0h，2h，12h，24h，36h，48h)用含量测定方法测定，计算没食子酸的峰面积 ，见表3。

表3 稳定性试验

2.8 加样回收率试验 定回收率。精密称取已知没食子酸含量的供试品(批号 0161038，0160622，0161103)每种1.5g，按供试品溶液的制备方法操作，每一批号的制备2份，每1份样品中精密加入没食子酸对照品储备液(0.2296mg/mL)1mL，并进样10μL测定含量，见表4。

表4 没食子酸加样回收率测定

*与对照组相比P>0.05；△与治疗前相比P<0.05。

3 样品的含量测定

取3批不同批号的样品，按供试品溶液的制备的方法制备供试品溶液，并按色谱条件进行测定，3批样品含量结果见表5。

表5 没食子酸含量测定

4 讨论

4.1 溶剂及提取方法的选择 本试验在制备供试品时曾比较不同提取溶剂 (稀乙醇，70% 乙醇，乙醇，50%甲醇，甲醇) 和不同提取时间 (15，20，30，45，60 min) 对没食子酸含量的影响，结果以50%甲醇为溶剂，超声提取 30 min时所得没食子酸含量高。

4.2 流动相的选择 甲醇-0.2%磷酸水溶液(5：95)为流动相，样品色谱中没食子酸的峰形好，出峰时间比较快，与杂质峰的分离度均大于1.5。

4.3 检测波长的选择 取没食子酸对照品溶液进行190～700nm全波长扫描，在紫外波长273 nm，具有最大吸收峰。

4.4 小结 养心达瓦伊米西克蜜膏中含没食子酸、槲皮素、芦丁。本文采用HPLC法测定养心达瓦伊米西克蜜膏中没食子酸的含量，结果表明，该方法灵敏度高，重现性好，样品处理简单，为该制剂质量评价提供了简捷有效的检测方法。

[1]热比古·托乎提. 维药养心达瓦依米西克蜜膏治疗稳定性心绞痛的疗效体会[J]. 中国社区医师, 2011，23:203.

[2]中华人民共和国卫生部药典委员会编.卫生部药品标准维吾尔药分册[S]．乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1998：177.

[3]国家药典委员会.中国药典四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：59.

[4]热孜万古丽·阿不都热依木，尼加提·阿不来提.HPLC法测定维吾尔药依本斯纳蜜膏中没食子酸的含量[J].中国民族医药杂志， 2014，20(8):22-24.