不同采收时间广金钱草药材产量和质量研究△

2018-05-03陈端妮唐晓敏张春荣程轩轩杨全

中国现代中药 2018年4期

陈端妮，唐晓敏*，张春荣，程轩轩，杨全*

(1.广东药科大学中药学院，广州 510006；2.国家中医药管理局岭南药材生产与开发重点研究室，广州 510006；3.中药材国家现代农业产业技术体系广州综合试验站(CARS-21-16)，广州 510006；4.广东省南药规范化种植与综合开发工程技术研究中心，广州 510006)

豆科植物广金钱草Desmodiumstyracifolium(Osbeck)Merr.的干燥地上部位为中药材广金钱草，别名为大铜钱、铜钱沙和金钱草等，广泛分布于广东、广西、海南等地。具有利湿退黄、利尿通淋的功效，主要用于治疗黄疸尿赤、热淋、石淋、小便涩痛、水肿尿少等症[1]。随着广金钱草的广泛应用，年消耗量越来越大，市场流通的广金钱草以栽培为主，关于栽培广金钱草的采收时间的研究已有报道[2]，但局限于药材成分含量的研究，忽略了药材产量。因此，本文结合了药材产量和多成分(多糖、总黄酮、夏佛塔苷)含量的变化规律，确立适合广金钱草的最佳采收时间，为生产中广金钱草的采收及规范化生产关键技术的制定提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：UV1800紫外分光光度计(上海天美科学仪器)；超声提取处理器(昆山市超声仪器有限公司)；岛津LC-20A高效液相色谱仪；FA2204B电子分析天平(上海精科美科学仪器有限公司)；HWS26型电热恒温水浴锅。

试剂：夏佛塔苷对照品(批号：PS13071901；99.31%；购自成都普思生物科技有限公司)；芦丁对照品(上海晶纯生化科技股份有限公司)；甲醇(色谱纯，美国欧普森公司)；乙醇、葡萄糖、浓硫酸、苯酚、亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠均为分析纯；超纯水。

1.2 试验材料

试验布置于广东省梅州市平远县南领药业广金钱草种植基地。于2015年1月份育苗，2016年4月中旬选取长势一致的种苗进行大田移栽，开展常规管理。采用“S”形随机取样法，于7、8、9、10月每隔15 d采集样品1次，每次采集15株。

1.3 测定项目

1.3.1 生物量测定于地面处割取植株地上部位，用游标卡尺测定直径、卷尺测定长度，105 ℃杀青0.5 h，55 ℃烘至恒重测定生物量。

1.3.2 总黄酮含量测定参考程轩轩等[3]的响应面法提取测定总黄酮含量，芦丁作为对照品，在510 nm处测定吸光度值，以溶液浓度X(μg·mL-1)为横坐标，吸光度为纵坐标，得线性回归方程Y=12.165X-0.017 1(r=0.999 0)，线性范围9.964～69.748 μg·mL-1。

1.3.3 总多糖含量测定参考程轩轩等[4]的响应面法提取测定多糖含量，葡萄糖作为对照品，在490 nm处测吸光度值，以溶液浓度X(μg·mL-1)为横坐标，吸光度Y为坐标，得线性回归方程Y=9.528 3X+0.004 8(r=1.000 0)，线性范围2.000～11 μg·mL-1。

1.3.4 夏佛塔苷含量测定参照2015版《中华人民共和国药典》方法检测广金钱草中夏佛塔苷含量。以夏佛塔苷浓度为横坐标，对应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=2 000 000X-22 540(r=0.999 9)，线性范围75.0～1050 μg·mL-1。见图1。

1.3.4 数据分析数据处理用Excel办公软件，数据分析使用SPSS19.0统计软件。

2 结果与分析

2.1 不同采收时间广金钱草生长变化规律

图1 夏佛塔苷对照品(A)、广金钱草样品(B)HPLC图

不同采收时间广金钱草各生长指标变化规律见表1，由表1可以看出，随着采收时间的推迟，株高和地径均呈逐渐升高的变化趋势，10月份增加不显著。干重呈现逐渐上升而后降低的趋势，10月初达到最高。说明株高、地径、生物量受采收期影响显著，不同采收时间的药材生长及生物量积累存在较大差异。

表1 不同采收时间对广金钱草生长的影响

注：表中大写字母表示P值在0.01水平差异显著，小写字母表示P值在0.05水平差异显著。

2.2 不同采收时间广金钱草化学成分积累变化规律

不同采收时间广金钱草化学成分含量差异见表2。由表2可知，随着采收时间的推迟，多糖含量呈逐渐上升的变化趋势，9月中旬极显著升高；总黄酮含量呈先增加后降低的变化趋势，在9月中旬极显著升高，而后逐渐降低；夏佛塔苷含量7月初到10月中旬逐渐降低，7月初含量最高。由此可见，广金钱草化学成分受采收时间影响显著，不同采收时间药材的质量存在较大差异。

表2 不同采收时间对广金钱草化学成分含量的影响

注：表中大写字母表示P值在0.01水平差异显著，小写字母表示P值在0.05水平差异显著。

2.3 不同采收时间广金钱草单株化学成分积累变化规律

不同采收时间广金钱草单株化学成分含量差异见表3。由表3可以看出，随着采收时间的推迟，单株多糖、总黄酮、夏佛塔苷含量均呈先上升后降低的变化趋势。其中，单株多糖含量9月中旬～10月中旬极显著高于其他月份，单株总黄酮和夏佛塔苷含量10月初极显著高于其他月份。由此可见，广金钱草单株化学成分受采收时间影响显著或极显著，不同采收时间存在较大差异。

表3 不同采收时间对广金钱草单株化学成分含量的影响 mg·株-1

注：表中大写字母表示P值在0.01水平差异显著，小写字母表示P值在0.05水平差异显著。

3 结论与讨论

3.1 采收时间与广金钱草药材产量

广金钱草株高、地径均在10月份达到最高值，10月中旬(15日)的株高是7月初(1日)的9.06倍，地径增加了325%，但干重(生物量)在10月中旬出现降低趋势，较10月初降低了18.10%，主要原因是采收过程中发现10月中旬采收时出现叶片容易脱落的现象，最终导致产量降低。因此，从药材产量而言，广金钱草最佳采收时间为10月初。

3.2 采收时间与广金钱草化学成分积累

广金钱草9月初多糖、总黄酮含量极显著或显著高于其他月份，与7月初比较多糖含量增加了371.14%，总黄酮含量增加了170.64%；而夏佛塔苷含量7月初极显著高于其他月份，是10月中旬的6.14倍。回算至单株产量结果出现了变化，表现为10月初的多糖、总黄酮、夏佛塔苷含量均显著或极显著高于其他月份，分别是7月初的148.24、96.66、20.36倍。因此，从化学成分积累而言，广金钱草最佳采收时间为10月初。