一种0.5%聚维酮碘消毒剂的消毒效果及刺激性研究

武昌俊，李 舜，蔡 标，戴陈伟，王 超，马 征，周秀红，童 琳

(安徽省医学科学研究院，安徽合肥 230001)

目前，家畜病源菌主要为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及白色念珠菌等。大肠杆菌为革兰氏阴性菌，能导致家畜急性胃肠炎和腹泻症状的发生[1]，如能引起仔猪大肠杆菌性腹泻，导致黄痢、白痢、断奶仔猪腹泻及仔猪水肿等疾病[2]，还能引起鸡大肠杆菌病，导致鸡心包炎、肝周炎、败血症等多种疾病[3]。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，是引起家猪食物中毒的常见致病菌[4]。白色念珠菌属于真菌类，通过感染人和动物，在体内增殖并形成侵袭性真菌感染，导致人和动物严重感染甚至死亡[5]。目前，消毒剂已被广泛应用于养殖区的棚舍、饲养工具和饲料贮存等常规消毒灭菌工作中[6]。消毒剂是指能够杀灭或抑制传播媒介中的病原微生物的制剂，能够切断传染病的传播途径，达到控制传染病的目的[7]。目前，市场上动物饲养消毒剂有很多种。笔者研究了一种0.5%聚维酮碘消毒剂的消毒效果和刺激性。

1 材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验菌株。大肠杆菌(ATCC8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、白色念珠菌(ATCC10231)，均购自安徽艾浮地艾空气净化检测站，来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心。

1.1.2实验动物。多次皮肤刺激试验选用健康豚鼠5只，体质量250～300 g，购自南京安立默科技有限公司，合格证号为0016470。皮肤变态反应试验选用健康豚鼠48只，雌雄各半，体质量250～300 g，购自南京安立默科技有限公司，合格证号为0016492。

1.1.3培养基。营养琼脂培养基(用于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的培养)、沙氏琼脂培养基(用于白色念珠菌的培养)，均购自北京陆桥技术股份有限公司。

1.1.4试剂。试验用消毒剂为一种含0.5%(W/V)聚维酮碘的深褐色澄清液体，pH 2.8。细菌杀灭试验所用中和剂为含1%(W/V)硫代硫酸钠+1%(W/V)卵磷脂+1%(W/V)吐温-80的0.03 mol/L PBS溶液。有机干扰物为30 g/L牛血清白蛋白。

1.2供试菌株的活化接种供试菌株大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌至相应琼脂试管斜面培养基上，37 ℃下培养24 h。每个菌种各取2支斜面供试验用，其余菌种冷藏备用。

1.3菌悬液的制备挑取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌斜面菌落，分别接种至相应的琼脂平板，37 ℃培养24 h至对数生长期，无菌生理盐水洗脱菌落，分别制成菌液浓度为107～108CFU/mL的菌悬液，备用。

1.4中和剂鉴定试验试验选择金黄色葡萄球菌(细菌)和白色念珠菌(真菌)进行中和剂鉴定试验[8]。试验分为6组，分别为：①(消毒剂+菌悬液)、②[(消毒剂+菌悬液)+中和剂]、③(中和剂+菌悬液)、④[(消毒剂+中和剂)+菌悬液]、⑤(稀释液+菌悬液)、⑥(稀释液+培养基+中和剂)。具体试验步骤按照《消毒技术规范》卫生部2002版中悬液定量杀菌试验程序进行。⑥组平板菌落数应为0；①组平板菌落数应为0，或仅有极少；②组平板菌落数应比①组多，但应比③、④、⑤组少；③、④、⑤组菌落数误差率应不高于15%。试验重复3次，均符合要求时，判定所选中和剂及其浓度为受试样品杀菌试验适宜的中和剂。

1.5悬液定量杀菌试验在无菌试管内分别加入0.5 mL菌悬液和0.5 mL有机干扰物溶液，再加入受试消毒剂杀菌工作浓度1.25倍的消毒剂(阳性对照为胰蛋白胨生理盐水溶液)，快速混匀。分别作用至设定时间，取混合液0.5 mL加入装有4.5 mL中和剂溶液的试管内，混匀作用10 min，中和杀菌反应。选取稀释液+中和剂+培养基作为阴性对照，37 ℃培养48 h，试验于19～21 ℃水浴条件下进行，重复3次。观察试验结果，稀释涂平板并计算各组的菌浓度(CFU/mL)，换算成对数值，杀灭对数值按以下公式计算[8]：平均杀灭对数值=阳性对照组平均菌浓度对数值-试验组平均菌浓度对数值。

1.6多次皮肤刺激试验取皮肤正常、完好的健康白色豚鼠5只，试验前24 h背脊部两侧各约3 cm×3 cm备皮。将受试消毒剂原液均匀涂在一侧脱毛皮区，用用无刺激性塑料膜覆盖表面，用无刺激性胶布和绷带加以固定，另一侧脱毛皮区无处理，作为阴性对照。4 h后温水洗净残留消毒剂。每天试验处理1次，连续试验14 d。在每次试验后24 h观察皮肤刺激反应并进行评分。

1.7皮肤变态反应试验取皮肤正常完好的健康白色豚鼠48只，雌雄各半，随机分成3组，分别为试验组、阳性对照组和阴性对照组，每组各16只，雌雄各半。试验前24 h背脊部左侧约3 cm×3 cm备皮。24 h后进行诱导试验。①试验组。取0.5 mL受试消毒剂原液均匀涂在左侧脱毛皮区，用无刺激性塑料膜覆盖表面，用无刺激性胶布和绷带加以固定，持续6 h。②阳性对照组。取0.5 mL 1%2，4-二硝基氯苯溶液均匀涂在脱毛皮区，用无刺激性塑料膜覆盖表面，用无刺激性胶布和绷带加以固定，持续6 h。③阴性对照组。暂不做诱导试验，正常饲养。6 h后，将试验组和阳性对照组脱毛皮区清水洗净，回笼正常饲养。第7和14天采用同样方式给药1次，在末次给药后14 d进行激发试验，试验前24 h将豚鼠背脊部右侧约3 cm×3 cm备皮。试验组将受试消毒剂原液均匀涂在右侧脱毛皮区，用无刺激性塑料膜覆盖表面，用无刺激性胶布和绷带加以固定，持续6 h；阳性对照组，取0.5 mL 0.1%2，4-二硝基氯苯溶液均匀涂在脱毛皮区，用无刺激性塑料膜覆盖表面，用无刺激性胶布和绷带加以固定，持续6 h；阴性对照组，给药方式、范围与试验组相同，给药后6 h清水将给药处皮肤洗净。24和48 h后观察皮肤反应，按皮肤反应和致敏强度分级标准进行评定。将出现皮肤反应(出现红斑和水肿)的动物数除以该组动物数，得到致敏率(%)，按照相关标准评定致敏强度。

2 结果与分析

2.1中和剂鉴定试验结果该试验的中和剂鉴定选用含1%(W/V)硫代硫酸钠+1%(W/V)卵磷脂+1%(W/V)吐温-80的0.03 mol/L PBS溶液的中和剂。以金黄色葡萄球菌作为试验菌株，①和⑥组没有菌落生长；②组有少量菌落生长；③、④、⑤组均有大量菌落生长，平均生长菌落数均在2.0×107CFU/mL。以白色念珠菌作为试验菌株，①和⑥组没有菌落生长；②组有少量菌落生长；③、④、⑤组均有大量菌落生长，平均生长菌落数为1.5×107～1.7×107CFU/mL。中和剂鉴定试验结果表明，该试验所选用的中和剂对该消毒剂杀灭细菌和真菌起中和作用，且中和剂及中和产物对试验菌株及培养基无影响。

2.2悬液定量杀灭试验结果由表1可知，该消毒剂对悬液内的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别作用1、2和3 min，平均杀灭对数值均大于5；对白色念珠菌分别作用1、2、3 min，平均杀灭对数值均大于4，表明该0.5%聚维酮碘消毒剂对革兰氏阳性菌和阴性菌的杀灭效果快速高效，其中对真菌的杀灭效果较好，该0.5%聚维酮碘消毒剂对细菌繁殖体和真菌具有良好的杀灭效果。

表1 0.5%聚维酮碘消毒剂的杀菌试验结果

注：阴性对照无菌落生长

Note：There was no colony growth in negative control

2.3多次皮肤刺激试验结果多次皮肤刺激试验结果表明，该0.5%聚维酮碘消毒剂原液对豚鼠完整皮肤连续涂抹14 d后，未见皮肤红斑、水肿等异常反应，其皮肤刺激性指数为0，对豚鼠皮肤无刺激性。

2.4皮肤变态反应试验结果皮肤变态反应试验结果表明，该0.5%聚维酮碘消毒剂原液连续对豚鼠皮肤进行诱导试验和激发试验各6 h后，试验组动物皮肤致敏率为0，致敏强度为未见皮肤变态反应。

3 讨论与结论

聚维酮碘又名碘伏，是有效碘与一类表面活性剂聚乙烯吡略烷酮相结合而形成的一种络合物[9]。聚维酮碘具有毒性低、杀菌作用持久、价格相对低廉、对皮肤黏膜无刺激、毒副作用小等特点，是一种高效、广谱的新型消毒剂，对细菌和芽孢等具有较强的杀灭作用[10-11]。罗延智等[12]研究表明使用聚维酮碘对志愿者前臂内侧中段皮肤表面擦拭消毒后，对皮肤表面自然菌的杀灭效果符合我国消毒规范要求。

聚维酮碘的杀菌作用机制是碘元素能够直接快速地卤化菌体蛋白，有效沉淀菌体蛋白，此外聚维酮碘还具有一定的穿透和氧化微生物细胞壁的功能，碘能在游离状态下替代微生物细胞中的自身内容物，从而能够有效杀灭微生物[13]。

该研究结果表明，该0.5%聚维酮碘消毒剂对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别作用1、2和3 min，平均杀灭对数值均大于5，对细菌的杀灭效果快速高效；对白色念珠菌分别作用1、2和3 min，平均杀灭对数值均大于4，对真菌的杀灭效果较好。皮肤的刺激性指数为0，对豚鼠完整皮肤刺激强度为无刺激性。皮肤变态反应试验结果表明，试验组动物皮肤致敏率为0，致敏强度为未见皮肤变态反应。该0.5%聚维酮碘消毒剂对细菌繁殖体和真菌具有良好的杀灭性能，对人和动物安全无刺激。

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