食品中五种人工合成着色剂的高效液相色谱法分析简析

高明阳

北京市工商行政管理局西城分局

1. 前言

食品中常见的五种人工合成着色剂柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝的应用可增加食物外观色泽，激发食欲。但若过量添加食用色素，会对人体产生危害。[1,2]本文的实验采用GB5009.35-2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》[3]，选取果汁饮料类、配置酒类、硬质糖果、巧克力豆等四种不同基质，对食品中的五种人工合成着色剂柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝进行了测定。

2. 实验条件

2.1 主要试剂及标准品

2.1.1 试剂

甲醇（色谱纯）、正己烷、盐酸、冰醋酸、甲酸（88%）、乙酸铵、柠檬酸、无水硫酸钠、正丁醇、三正辛胺（90%）、无水乙醇、氨水、聚酰胺粉（尼龙6）。除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

2.2 试剂溶液及标准溶液配制

2.2.1 试剂溶液

2.2.1.1 乙酸铵（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45µm微孔滤膜过滤。

2.2.2.2 氨水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。

2.2.2.3 甲醇-甲酸溶液（6+4，体积比）:量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。

2.2.2.4 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL，溶解混匀。

2.2.2.5 无水乙醇-氨水-水溶液（7+2+1，体积比）:量取无水乙醇70mL、氨水溶液（2.2.2）20mL、水10mL，混匀。

2.2.2.6 三正辛胺-正丁醇溶液（5%）：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混匀。

2.2.2.7 饱和硫酸钠溶液。

2.2.2.8 pH 6的水：水加柠檬酸溶液调pH至6。

2.2.2.9 pH 4的水：水加柠檬酸溶液调pH至4。

2.2.2 标准溶液的配置

2.2.2.1 取10mL容量瓶一个，准确移入浓度为1.0mg/mL的柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝标准溶液各1.0mL，以及5.0mL水，摇均，即配制成100.0µg/mL的混标工作液。

2.2.2.2 在7个液相小瓶中分别准确移入1000.0、990.0、980.0、950.0、920.0、900.0、800.0µL的水，再分别准确移取上述100.0µg/mL的混标工作液0.0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0、200.0µL至其中，盖盖摇匀，配制成最终浓度为0.0、0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0、20.0的七种混标使用液；

2.2.2.3 另取1个液相小瓶准确移入900.0µL的水，再准确移取上述5.0µg/mL的混标溶液100.0µL至其中，盖盖摇匀，配制成最终浓度为0.5µg/mL的混标使用液。

2.2.2 标准品

2.2.2.1 食用合成色素柠檬黄溶液标准物质（浓度1.0mg/mL）；

2.2.2.2 食用合成色素苋菜红溶液标准物质（浓度1.0mg/mL）；

2.2.2.3 食用合成色素胭脂红溶液标准物质（浓度1.0mg/mL）；

2.2.2.4 食用合成色素日落黄溶液标准物质（浓度1.0mg/mL）；

2.2.2.5 食用合成色素亮蓝溶液标准物质（浓度1.0mg/mL）。

2.3 主要仪器

高效液相色谱仪（Agilent Technologies 1260 Infinity），恒温水浴锅，G3垂融漏斗，天平。

2.4 检测条件

2.4.1 液相色谱仪器参数

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18 ，5µm，4.6×250mm。进样量：10µL ；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；

流动相梯度：C泵：甲醇 D泵：0.02mol/L乙酸铵溶液

2.4.2 液相色谱测定

将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

2.5样品处理

2.5.1 试样制备

2.5.1.1 果汁饮料及果汁、果味碳酸饮料等（苹果汁）：称取5g（精确至0.0001g），放入100mL烧杯中，含二氧化碳试样加热或超声除二氧化碳， 为试样溶液。

2.5.1.2 配制酒类（白葡萄酒）：称取5g（精确至0.0001g），放入100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇，为试样溶液。

2.5.1.3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等（硬质糖果）：称取5g（精确至0.0001g）粉碎样品，放入100mL烧杯中，加水30mL，温热溶解， 为试样溶液。

2.5.1.4 巧克力豆及着色糖衣制品（巧克力豆）：称取5g（精确至0.0001g），放入100mL烧杯中，用水反复洗涤色素，到试样无色素为止，合并色素漂洗液，为试样溶液。

2.5.2 前处理

聚酰胺吸附法：试样溶液加柠檬酸溶液调pH值到6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃pH为4的水洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5.0mL。经0.45µm滤膜过滤，取10uL进高效液相色谱仪分析。

3. 加标回收及精密度实验

采用苹果汁、白葡萄酒、硬质糖果、巧克力豆作为加标基质，在0.5、5、20ppm三个点进行三水平加标，每个点做6个平行，每个点的6个平行数据计算RSD值，选用其中3个平行数据用于计算加标回收率。

由上可知，样品中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝的平均回收率为100.9%、99.8%、100.5%、100.8%、100.0%，RSD≤15%，均符合GB/T 27074-2008的要求。

4、检出限、定量限

按照《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》（GB 5009.35-2016）“…… 8 其他”的规定，柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄的方法检出限为0.5mg/kg，检测波长254nm时亮蓝的检出限为1.0mg/kg。

选用苹果汁、白葡萄酒、硬质糖果和巧克力豆4种样品基质按检出限浓度进行加标，经相同方法前处理后上机检测。平行测定6次加标样品。按以下公式计算可得检出限的质量浓度：

MDL：方法检出限（mg/kg）

LOQ：方法定量限（mg/kg）

SL：基质噪音峰面积的标准偏差（平行6次）。

b：方法校准曲线的斜率，参见不同组分标准曲线。

V：稀释倍数（0.005L）。

m：称样量（5g）。 1000：由g/kg转换为mg/kg的换算因子。

测得柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄检出限均小于0.5mg/kg，检测波长254nm时亮蓝的检出限小于1.0mg/kg，符合标准要求。

5. 结论

在五种人工合成着色剂柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝的检测上，采用高效液相色谱法，通过外标法定量，加标回收及精密度实验都取得了较好的效果，方法可靠、准确、灵敏度高。

[1]谷岩,曲明.高效液相色谱法测定饮料中的食用色素[J],化学分析计量,2004,13(1),42～43.

[2]陈再洁,杨慧.HPLC同时测定饮料中的6种食用色素[M], 2011年第四届国际食品安全高峰论坛论文集,60～61.

[3]GB5009.35-2016,《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》[S].