酶抑制法检测蔬菜农药残留的效果探究

张宝华 魏巍

摘 要 随着我国农业技术的不断发展，蔬菜的生长期得到了缩短。但由于我国环境污染的加剧，蔬菜的病虫害越来越重，导致了农药的广泛使用，蔬菜需要施放农药后才能够生长和成熟。蔬菜的农药残留问题以及食品安全问题已成为社会和群众普遍关注的问题，加强对蔬菜农药残留的检测，保证蔬菜食用的安全性是急需解决的问题之一。基于此，探讨与分析酶抑制法在蔬菜农药残留检测中的效果。

关键词 酶抑制法；蔬菜；农药残留；检测技术

中图分类号：S481+.8 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.09.057

目前，由于市场上的生产者没有严格遵守农药的安全使用准则，导致了农药的超量使用，甚至使用违禁的农药，增加了中毒事件发生率[1-2]。為了确保我国人民群众的生命安全，必须严格控制农药的使用，加强对蔬菜农药残留的检测。我国对于蔬菜农药残留主要通过酶抑制法进行检测，酶抑制法具有时间短、效率高的特点，对于检测人员技术要求水平较低，在我国蔬菜生产基地、农产品质量安全检测机构中运用较为广泛，能够保证蔬菜产品的安全性。

1 蔬菜农药残留

农产品生产过程中施用农药后都会残留农药，农药可残留于蔬菜产品中，也可以残留于水或土中，此种现象则被成为农药残留[3]。农药污染较为严重的有小白菜、油菜、韭菜等叶类蔬菜。相关文献报道，目前世界上农药的品种已经达到上千种，常见的有杀虫剂、除草剂、生长调节剂等，农药残留严重危害人体的身体健康，严重者可能导致人体大脑、血液等受到损伤。

2 蔬菜农药残留检测的必要性

近年来，随着病虫害发生频率的增加，农药的品种和毒性也在随之增强，农药的使用有效的防治了病虫害，为农业带来了巨大的丰收，但同时也严重破坏了生态系统的平衡，加重了生态坏境的恶化程度。残留的农药会通过蔬菜等食品进入人体，食用含有农药残留的蔬菜会导致人体急性中毒，长期食用农药残留超标的蔬菜，可能引起慢性中毒，严重者甚至诱发癌症[4]。我国十分重视农药的检测，制定了一系列的法律法规来控制农产品中的农药残留值，如《农产品质量安全法》《农药合理使用准则》等，降低农药对蔬菜的污染，切实保障大众人群的健康和安全。

3 蔬菜农药残留检测技术

蔬菜农药残留的检测方法大致可以分为快速检测技术、色谱法、光谱法、酶抑制法等。1）快速检测技术主要是以氧化还原反应为检测依据，产物与检测液发生作用后会变色，但该方法灵敏度较低，局限性较强，并且受到还原性物质的影响，因此应用价值较低。2）色谱法能够对蔬菜中农药的残留进行定量分析，灵敏度较高，但该方法仪器投资大、检测时间长，同时对技术的要求较高，不利于在基层中推广使用。3）光谱法对样品处理的要求较低、环境污染小、分析速度快，但光谱法只能检测一种有机磷农药，因此灵敏度较为缺乏，不能作为主要检测方法。酶抑制法具有快速、灵敏、成本低、操作便利等特点，成为蔬菜农药残留检查的标准方法之一。

4 酶抑制法检测蔬菜农药残留

4.1 检测原理

乙酰胆碱是生物神经传导中重要的一种酶，能够保证神经冲动的正常传导，有机磷和氨基甲酸酯类农药能够抑制昆虫的中枢和周围神经系统中的乙酰胆碱活动，大量积累乙酰胆碱，对正常神经传导造成影响，从而导致昆虫中毒而死[5]。酶抑制法则是通过昆虫中毒原理进行农药残留的检测，将特异性抑制胆碱酯酶与样品提取液进行反应，若特异性抑制胆碱酯酶受到抑制，则说明样品中含有农药残留。

4.2 检测范围

1）蔬菜。绿叶菜、白菜、瓜菜、果菜、豆菜、根茎类、茄果类、葱蒜类等，其中，小白菜、空心菜等极易残留农药，因此需要着重进行监测。

2）农药。有机磷类农药，如甲胺磷、对硫磷、马拉硫磷、甲基内吸磷、甲基对硫磷、敌百虫、敌敌畏等；氨基甲酸酯类农药，如涕灭威、呋喃丹、叶蝉散、异索威、西维因等。

4.3 检测条件

室温保持在25～30 ℃，室内湿度不能高于85%[6]。

4.4 检测方法

仪器主要采用农药残毒快速检测仪、电子天平、蒸馏水机、玻璃仪器、电热恒温培养箱、微型样品混合器、移液枪等，试剂需要准备乙醇胆碱酯酶、显色剂、缓冲剂等。1）配制缓冲液、专用酶、底物、显色剂，并置于合适的条件下保存。2）采集蔬菜样品且随后进行混合。采用电子天平称取样品4 g，置于玻璃仪器中，加入20 mL缓冲液震荡后倒出提取液，放置5 min左右，采用移液枪移取酶于玻璃仪器后置于电热恒温培养箱内放置30 min。3）使用分光光度计进行吸光度测定。蔬菜农药残留的范围要控制在-10%～110%，超过此范围则表明操作失误，需要重新检测。

5 注意事项

5.1 选择安全的蔬菜

采用酶抑制法进行检测时，需要注意蔬菜的安全状况，采用安全的蔬菜进行检测。其中，抑郁率≥70%，则说明蔬菜不安全；当抑制率为50%～70%时，说明蔬菜存在一定的安全隐患；当抑制率为40%～50%时，说明蔬菜较为安全；当抑制率≤40%时，说明蔬菜安全[7]。对于抑制率≥50%以上的蔬菜，需要进一步采用色谱法定性定量进行检测与分析，确定农药残留的真实超标情况。

5.2 选择合适的酶源

酶抑制法检测技术中，常用的酶有植物酶、家畜肝脏酶、人体血浆酶、蝇头部脑酯酶等，不同酶的敏感性各不相同，对于蔬菜农药检测来说，采用蝇头部乙酰胆碱的效果最好，将分离纯化后的醇液作为乙酰胆碱酯酶源进行检测，可靠性和准确性较高。

5.3 选择合适的抑制剂

蔬菜农药残留检测中，酶活性和农药的浓度互相关联，酶活性会对农药残留检测结果的准确性和灵敏度造成一定的影响，部分有机磷农药抑制乙酰胆碱酯酶的效果较为微弱，大部分乙酰胆碱酯酶抑制剂浓度为6～

10 mol·L-1，抑制5～50 min，即可抑制酶的活性。

5.4 注意酶的固定化

蔬菜农药残留检测中需要注意酶的固定化，酶的固定化技术中常见的分为吸附法、交联法、电聚合法等。随着我国技术的不断完善和发展，开始形成了以吸附-交联法为主固定化技术，乙酰胆碱酯酶膜进行制备时，pH值会升高，从而达到了固定乙酰胆碱酯酶的目的，降低了酶分子之间的作用，减少了影响酶活动的因素，提高了酶膜的可用性。

5.5 做好酶的活动控制

酶的活性直接影响到蔬菜农药残留的检测结果，保卫时间、温度、pH值等都会对酶活性造成一定的影响，相关文献报道，蝇头部乙酰胆碱酯酶的最佳保温时间为15 min、温度为37 ℃、pH值为7.2～8.0；肝脏酶的最佳保温时间为28 min、温度为30 ℃、pH值为7.6；肌肉酶的最佳保温时间为31 min、温度为31 ℃、pH值为7.6；鱼脑酶的最佳保温时间为35 min、温度为32 ℃、pH值为7.6[8]。检测过程中，具体的保温时间、温度、pH值需要根据不同的酶进行控制。

6 结语

酶抑制法是目前常用的一种控制高残留、高毒农产品流入市场的方法，蔬菜农药残留检测技术能够帮助人们掌握蔬菜生产的质量和安全，并且能够防止不合格蔬菜进入市场，同时，通过对蔬菜进行检测，能够及时发现蔬菜生产中存在的问题，根据这些问题制定相应的解决措施，不断完善和调整生产方案，指导蔬菜生产者科学合理的使用农药，推动我国农产品事业的进步和发展。但在蔬菜农药残留的检测中，酶抑制法只能检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药残留，对其他农药的检測无效，因此需要结合定性与定量的方式进行检测。总体来说，酶抑制检测法应通过在实践和操作中不断完善和发展，力求提高检测数据的准确性，完善蔬菜农药残留的检测技术，为市场农产品的质量安全提供保障。

参考文献：

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[3] 王艳树，马涛，王琴，等.酶抑制法检测蔬菜中农药残留存在的不足及提高检测准确性的途径[J].现代农业科技，2017（1）：104-105.

[4] 张登科，郝程列，钟凯，等.果蔬农药残留快速检测固定化酶片的制作研究[J].安徽农业科学，2017，45（28）：81-84.

[5] 黄欢，黄敬洲.微生物酯酶用于检测有机磷农药残留的研究[J].企业科技与发展，2017（6）：68-70.

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[7] 曾庆华，宋伟华，樊琛，等.酶抑制-比色法检测聊城市果蔬有机磷和氨基甲酸酯农药残留[J].湖北农业科学，2016，55（21）：5634-5637.

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（责任编辑：赵中正）