种猪场伪狂犬病净化技术探讨与应用

朱 雁 ，李长彬 ，林 成 ，陈燕眉 ，陈绵旭 ，王 冰 ，张 萍 ，杜明喜，王培永，尤笠羽，陈文静，王红梅

（1.江苏省徐州市铜山区畜牧兽医站，江苏 徐州 221007； 2.徐州市铜山区农业委员会，江苏 徐州 221007；3.江苏省徐州六马种猪科技有限公司，江苏 徐州 221007）

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒引起的猪的急性传染病，可造成妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪出现昏睡、鸣叫、呕吐、腹泻、神经症状以及大量死亡，病猪呼吸困难、生长停滞。伪狂犬病对母猪、仔猪以及猪场生产的危害都相当严重。为推进动物疫病综合防控，促进畜牧业健康发展和畜产品有效供给，根据《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》精神，结合《江苏省规模化猪场猪伪狂犬病净化工作意见》（苏农牧[2015]35号）等文件要求，徐州六马种猪科技有限公司种猪场率先开展了猪伪狂犬病疫苗免疫及净化创建工作，并取得了满意效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 猪伪狂犬病疫苗 猪伪狂犬活疫苗（K-61株），gE基因缺失，勃林格生产，批号：从2014年至今多个批次。

1.1.2 检测试剂及检测 试验按照《伪狂犬病诊断技术》（GB/T1864-2002）中规定的ELISA试验方法进行。猪伪狂犬病gB病毒抗体检测试剂盒（IDEXX），批号：从2014年至今多个批次；猪伪狂犬病gE病毒抗体检测试剂盒（IDEXX），批号：从2014年至今多个批次。

1.1.3 监测设备 上海科华KHB ST-360酶标仪和IKA多(单)通道移液器等。

1.1.3 净化创建猪场的选择 徐州六马种猪科技有限公司种猪场主要饲养长白、大白和杜洛克祖代原种猪，并常年对外提供优质种猪，目前有祖代原种公猪37头，生产母猪608头，后备种猪79头；待售种猪2366头，年可提供优质种猪4200余头。

1.2 方 法

1.2.1 2014年6月开始，通过生产性能分析、临床症状观察及猪伪狂犬病野毒感染抗体（gE抗体）和疫苗免疫抗体（gB抗体）检测，进行种公猪、生产母猪、后备种猪、待售种猪伪狂犬病野毒感染情况的本底调查，了解各阶段猪群健康状态、免疫情况、免疫抗体水平和感染状况，评估伪狂犬病发生和传播风险。按照生产母猪群数量的10%、种公猪、后备猪全群采样、待售种猪10%的比例抽检，每季度抽检一次，连续抽检3次。

1.2.2 针对不同野毒感染状况，采取不同的净化方案。根据猪伪狂犬病毒野毒感染状况,将猪群分为：高风险群（野毒感染率≥10%）、中风险群（野毒感染率在1%～10%）和低风险群（野毒感染率≤1%）。如果连续3次抽检结果全部为gE抗体阴性，则将该猪群作为伪狂犬病野毒感染阴性群，直接进入免疫维持阶段。

1.2.2.1 对高风险群（野毒感染率≥10%），采取以下措施：暂停对外供应种猪；淘汰/隔离阳性种公猪、后备母猪及生产母猪，逐步建立猪伪狂犬病野毒阴性繁殖群和生产群；当野毒感染率降低到10%以下时，按中低风险场实施净化。

1.2.2.2 对低或中等风险群，按照首次检测→隔离/淘汰→免疫→二次检测→隔离/淘汰→再次检测→淘汰等步骤进行净化。

（1）首次检测 对全部种公猪、后备猪作一次伪狂犬病野毒感染检测，生产母猪、待售种猪按10%的比例抽检。

（2）隔离淘汰 对gE抗体阳性猪及时隔离/淘汰，选留gE抗体阴性猪。

（3）科学免疫 猪伪狂犬病免疫净化的前提是疫苗可以有效控制野毒感染，使母猪群可以提供足够多的gE抗体阴性猪补充到生产群进而达到净化的目标。对野毒感染阴性猪，立即免疫gE基因缺失疫苗，间隔3～4周后加强免疫1次，进入免疫控制阶段，构建良好的免疫保护屏障，并根据日常监测计划，确定和适时调整免疫程序。在做好种猪群免疫的基础上，重点做好保育、待售猪群的免疫，确保6～10周龄以上待售猪的免疫效果，同时确保后备猪并群前，逐头确认猪伪狂犬病gE抗体阴性和gB抗体合格。该场从2011年建场投产后即开始按程序免疫猪伪狂犬疫苗，并通过不断优化免疫程序，实施科学免疫。

（4）二次检测 间隔2～3个月再次进行野毒感染普检，再次淘汰/隔离阳性猪。

（5）再次检测 连续2次检测结果均为野毒感染阴性者，以后至少每6个月进行一次抽检，每次每群抽检30头，不足30头者全部检测。若抽检出现野毒感染阳性，则全群检测并淘汰/隔离阳性猪。

（6）结果判定 连续2次抽检结果均为野毒感染阴性且免疫抗体合格率≥70%，则判定该猪群为净化猪群；否则按照净化步骤循环进行。每次样品的采集、检测、阳性猪的处理均在10d内完成。

1.2.3 规范饲养行为 根据净化结果分群饲养，不从非净化群引种，严格执行引种隔离、观察、检测制度。做好疫病净化必要的软硬件设计改造，保障净化期间采样、检测、阳性猪淘汰清群、无害化处理等措施顺利实施。

2 净化结果

该猪场从2014年6月开始进行猪伪狂犬病野毒感染本底调查，种公猪、生产母猪、后备猪、待售种猪连续3个季度3次抽检均为gE抗体阴性且gB抗体合格率70%以上，因此将该猪场作为猪伪狂犬野毒感染阴性场进行免疫维持净化。但2015年6月检测发现该猪场gB抗体低于70%，并出现gE抗体阳转情况，期间通过监测、淘汰、加强免疫等措施，直到2016年2月全场猪群gE抗体全部恢复阴性且gB抗体合格率达到70%以上，并一直维持至今。

2.1 监测结果见表1、表2、表3、表4。

由表1可以看出，2014年6月～2015年3月，种公猪连续逐头监测4个批次，均为gE抗体阴性，gB抗体合格率70%以上；2015年6月检测发现该猪群gB抗体低于70%，同时检出gE抗体阳性猪并淘汰，检测频率也由季度检测增加到月度检测，直到2015年9月以后恢复季度检测，共检出并淘汰gE抗体阳性猪4头；2015年9月～2017年12月，已连续7个批次gE抗体监测阴性且gB抗体合格率70%以上。

由表2可以看出，2014年6月～2015年3月，生产母猪连续监测4个批次，均为gE抗体阴性且gB抗体合格率70%以上；2015年6月检测发现该猪群gB抗体低于70%，同时检出gE抗体阳性猪并淘汰，从2015年6月～2016年2月，实行每2个月进行一次种母猪全检并淘汰gE抗体阳性母猪，共检出并淘汰68头。2016年5月以后恢复定期抽检，到2017年12月，20个月已连续5个批次gE抗体监测阴性且gB抗体合格率70%以上。

对后备猪实行批次全检及选留、入群全检。由表3可以看出，2014年6月～2015年6月，后备猪连续监测5个批次，均为gE抗体阴性且gB抗体合格率70%以上；2015年8月检测发现该猪群gB抗体低于70%，同时检出gE抗体阳性猪并淘汰；从2015年8月～2016年2月，实行每2个月进行一次后备猪全检并淘汰gE抗体阳性猪，共检出并淘汰7头。2016年5月以后恢复定期检测，到2017年12月，20个月已连续5个批次gE抗体监测阴性且gB抗体合格率70%以上。

表1 种公猪伪狂犬病gB抗体、gE抗体检测情况

表2 生产母猪伪狂犬病gB抗体、gE抗体检测情况 单位：头、%

表3 后备猪伪狂犬病gB抗体、gE抗体检测情况 单位：头、%

由表4可以看出，2014年6月～2015年3月，待售种猪连续监测4个批次，均为gE抗体阴性且gB抗体合格率70%以上；2015年6月检测发现该猪群gB抗体低于70%，同时检出gE抗体阳性猪并淘汰，紧接着进行一次全群普检，共检出并淘汰gE抗体阳性猪47头。2015年10月gE抗体全面转阴，到2017年12月已连续监测7个批次，gE抗体均为连续阴性状态且gB抗体合格率70%以上，并保持稳定。

2.2 净化过程中猪伪狂犬病野毒感染阳转情况及应对措施

2.2.1 阳转原因 由于引种、补栏、混群、出栏、气候突变等应激因素或免疫抗体水平降低（gB抗体合格率低于70%），导致机体抗病力下降，受到猪伪狂犬病野毒侵袭而出现gE抗体阴性猪群阳转情况。

2.2.2 临床表现及阳转比例 2015年6月2日出现妊娠中后期母猪流产，6～8月份先后流产17头，产房母猪未见临床表现，哺乳仔猪出现成窝发病现象，有30%的发病仔猪体温升高，40～42℃，表现呆傻、走路摇晃、歪头、头插入栏杆缝隙、呈犬坐姿势，5～6h（最长12h）后出现倒地流涎，四肢呈游泳状，再经2～3h后死亡，单个批次的哺乳仔猪病死率有的高达30%。

2.2.3 解剖症状 全身淋巴结肿大、出血，喉头潮红，心包积液，肺脏有部分坏死，脾脏有血肿，肾脏密集出血点，大脑充血出血。

表4 待售种猪伪狂犬病gB抗体、gE抗体检测情况

2.2.4 检测结果 38种公猪全检，检出gE抗体阳性猪4头，阳性率10.5%；704头生产母猪全检，检出gE抗体阳性猪65头，阳性率9.2%；75头后备猪全检，检出gE抗体阳性猪7头，阳性率9.3%；1963头待售种猪全检，检出gE抗体阳性猪47头，阳性率2.4%；gE抗体出现阳转时，猪群gB抗体合格率均低于70%。

2.2.5 应对措施 gE抗体阳性生产母猪、种公猪全部扑杀淘汰并进行无害化处理；gE抗体阳性后备猪、待售种猪、产房阳性母猪所产及所哺育的后代，全部按育肥猪紧急出栏流转，禁止以种猪销售；公猪全部阉割后以育肥gE抗体猪出栏，母猪直接以育肥猪出栏。阳转期间，在消除各种应急因素的同时，对gE抗体阴性猪紧急补免疫苗，调整免疫程序，种公猪免疫由原来的一年普免3次，增加到一年普免4次，且gE抗体每年9月增加一次灭活疫苗免疫；生产母猪免疫由原来的母猪配种前1个月使用2头份猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗加强免疫一次，增加到配种前1个半月、1个月各使用2头份猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗加强免疫一次，且在配种前1个半月增加一次灭活疫苗免疫；后备猪及待售种猪，在180日龄增加一次强化免疫；生产母猪群gE抗体阳转期间未从本场选留后备猪，而是从六马华多场引入，引进后先行进入隔离场饲养、配种、妊娠，2016年5月转移至本场种群，直到2017年6月gE抗体持续阴性状态且gB抗体合格率70%以上一年后才恢复自留后备猪。

2.3 净化效果的检验 净化一年后，按照3%设立非免疫母猪哨兵猪（gE抗体和gB抗体均为阴性），分别在配种前30d、怀孕后40～50d、80～90d、产后2周检测gE抗体，其后代于3～4周龄检测gE抗体，监测结果gE抗体均为阴性。净化2年后的2017年12月，在待售种猪群中设立非免疫哨兵猪，每批15头，分散在不同的栏舍，1个月后检测，监测结果gE抗体均为阴性。期间没有疑似病例，生产成绩稳定，进一步检验了净化效果。

2.4 净化猪群生产性能评价 影响猪场生产性能的因素较多，主要涉及猪群饲养管理、种猪选育、猪群健康水平、产仔率、成活率、营养状况等等。通过净化，猪群健康水平、母猪繁殖性能及仔猪生长性能均有所提高；猪群窝均死胎数、木乃伊数、仔猪各段死亡率均有所下降。

2.4.1 猪群健康水平 母猪7d断奶发情率及母猪流产率，见表5。

表5 母猪7d断奶发情率及母猪流产率（%）

2.4.2 母猪群窝均死胎、木乃伊情况（见表6）。

表6 母猪群窝均死胎、木乃伊情况（头）

2.4.3 母猪繁殖性能及仔猪生长性能见表7。

表7 母猪繁殖性能及仔猪生长性能 （头、%）

2.4.4 仔猪各阶段死亡率情况见表8。

3 后续净化方案

3.1 后续免疫净化方案 根据检测结果优化免疫程序，并进行适时修订调整，使用伪狂犬病gE基因缺失疫苗进行科学免疫，同时采取严格的生物安全措施，达到维持净化的目的。

3.1.1 免疫程序的修订（见表9） 修改后的免疫程序，仔猪出生1～3d内增加了一次滴鼻免疫，可以克服母源抗体干扰，提高局部黏膜免疫力。后备猪及待售种猪180日龄增加一次强化免疫、种公猪每年增加1次强化免疫、母猪配种前进行2次强化免疫，可以使猪群产生坚强的抵抗力，防止净化过程中受到伪狂犬病野毒感染而出现阳转情况。

3.1.2 免疫净化的维持 严格按照免疫净化方案免疫猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗，同时采取消毒、粪污无害化处理、环境控制等严格的生物安全措施以及隔离饲养等管理措施，达到净化维持的目的。

3.2 后续检测净化方案 至少每6个月进行一次gE抗体和gB抗体监测，每次每群抽检30头，不足30头全部检测，目的是评估猪群的野毒感染情况和免疫抗体水平，以持续维持净化猪群的健康状态。当gE抗体阴性时，如果gB抗体阳性率在70%以上，判定群体免疫合格，净化猪群处于健康状态。

3.2.1 后备猪选留、入群时检测，保证以gE抗体阴性猪入场、并群。

3.2.2 公猪每季度全检，保证公猪始终处于gE抗体阴性状态。

3.2.3 每批产房母猪分娩后至下床前检测，确保gE抗体阴性母猪进入下一配种批次，gE抗体阳性母猪淘汰。

3.2.4 待售种猪120～160日龄跟批检测，确保以gE抗体阴性猪出售。

3.2.5 后续检测中gE抗体阳转猪处理预案若种公猪、生产母猪、后备猪在净化过程中出现gE抗体阳转情况，对阳性或可疑猪重检一次，以排除检测误差，如仍为阳性或可疑，则直接淘汰（种猪gE抗体阳性零容忍）。若待售种猪猪在净化过程中出现gE抗体阳转情况，则直接淘汰离群，并进行紧急出栏清群。

4 小结与讨论

4.1 该种猪场从2013年开始，通过加强管理、科学免疫、持续监测，坚决淘汰，及时解决疫病净化中的重大技术问题，最终建立净化场。目前，经过连续2次以上抽检，检测结果种公猪、生产母猪、后备猪及待售种猪伪狂犬病均为阴性且gB抗体合格率均在70%以上；猪群健康水平、种公猪生产性能、母猪繁殖性能及仔猪生长性能均有明显提高；猪群窝均死胎数、木乃伊数、仔猪各段死亡率均有明显下降；取得了满意的净化效果，达到了猪伪狂犬病净化场创建标准，目前正在申请省级验收，对猪场的知名度也将会有所提升。

4.2 针对不同的猪群采取不同的净化措施。对高风险群（野毒感染率≥10%），以检测、隔离/淘汰为主；对中低风险群（野毒感染率10%以下），按检测→隔离/淘汰→免疫→二次检测→隔离/淘汰→再次检测→淘汰的步骤进行净化，并根据净化结果分群饲养，不从非净化群引种，严格执行引种隔离、观察、检测制度，逐步建立净化猪群。

4.3 猪场从检测淘汰到免疫净化再到非免疫净化是长期持续的过程，净化维持是关键。需要综合运用免疫、监测、消毒、生物安全等技术措施，维持净化效果。加强人流、物流管控，实行全进全出生产模式，降低疫病传播风险；强化本场留种和引种的检测，避免外来病原传入风险；建立完善的防疫和生产管理等制度，优化生产结构和建筑设计布局，构建持续有效的生物安全防护体系，严格消毒、规范饲养行为和无害化处理技术；进行科学免疫，使群体免疫抗体合格率常年保持在70%以上；进行持续监测，净化猪群建立后，至少每6个月进行一次野毒感染监测和免疫抗体监测，以维持净化猪群的健康状态。

表8 仔猪各阶段死亡率情况统计表 （%）

表9 猪伪狂犬病疫苗修改前后的免疫程序

4.4 在疫病净化过程中由于引种、补栏、混群、出栏、气候突变等应急因素或免疫抗体水平降低，导致机体抗病力下降时，容易受到猪伪狂犬病野毒的侵袭而出现gE抗体阴性猪群阳转情况，要认真分析原因，做好应对预案，采取有效措施，树立信心，决不能轻言放弃，更不能半途而废，对gE抗体阳性猪处理，该淘汰的淘汰，该流转的流转，该清群的清群，对gE抗体阴性猪该加强免疫的加强免疫，优化免疫程序，直到gE抗体阳转猪群全部恢复阴性。

4.5 对种猪场，种公猪及后备猪是净化工作的关键，应每季度全部检测，保证种公猪和后备猪始终处于猪伪狂犬病野毒感染阴性且免疫抗体合格状态，确保种群健康。

4.6 除猪伪狂犬病外，猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒病、猪口蹄疫也是危害猪场的重要疫病，而且会引起免疫抑制，因此，在进行猪伪狂犬病净化的同时，也要做好这些重要疫病的防控，方能确保净化效果持续稳定。

5 体会及今后的净化思路

疫病净化，持续检测是净化依托，完善的管理及生物安全体系是净化保障，科学免疫是净化基础，生产数据是评估净化效果的依据。本场今后的净化思路主要采取加强检测、及时淘汰的方式进行。通过严格的生产管理和卫生防疫措施，降低外来病原传入风险，维持净化效果。基于目前的净化现状，采取公猪4～6个月全检一次，后备猪每批次全检，生产母猪及待售种猪按10%的比例每4～6个月抽检一次，在此基础上，每年进行一次年度全群普检。按照疫病净化要求，结合本场实际，计划经过2～3年的时间到达免疫净化稳定状态，再经过3～4年达到非免疫净化维持状态，进一步促进养猪业健康发展。

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