何氏养肾颗粒的制备工艺研究※

2018-04-24唐运洪莫美红陈继英

中国药物经济学 2018年4期

张莉唐运洪莫美红刘仔陈继英吴谋

何氏养肾颗粒来源于东莞市中医院治疗慢性肾脏病，且临床疗效确切的验方，由黄芪、地黄、山茱萸、蒲黄等6味中药组成。该方通过“调补脾肾、化瘀通络”，及早干预治疗，在保护肾脏功能、延缓进入肾脏替代时间、缓解患者临床症状等方面有显著疗效[1-2]。长期以来，临床上以煎煮法制成汤剂服用。为提高患者依从性，弥补煎煮汤剂难以携带、保存和服用等不足，本研究以中医药理论为指导，根据临床使用特点，运用现代制药技术和方法将其制成颗粒剂型的医院制剂。分别对提取、浓缩、干燥和成型工艺进行研究，确定何氏养肾颗粒的制备方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器SQW-6J超微粉碎机（济南易辰超微粉碎技术有限公司）；Agilent 1100高效液相色谱仪[美国安捷伦科技（中国）有限公司]，Alltech 2000型蒸发光散射检测器[美国奥泰科技（中国）有限公司]；GLP-10喷雾干燥机（上海金桥喷雾干燥成套设备厂）；DHG 9000系列电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）等。

2 方法与结果

2.1 剂型筛选从用药证候、慢性肾脏病患者的年龄和生理情况等临床用药需求出发，兼顾方剂特点、工艺难易程度和规模生产的可能性。考虑到中药颗粒既能保持汤剂特色，又能克服临用时煎煮及易变霉的问题，确定颗粒剂为该验方的开发剂型。

2.2 提取工艺的研究与优化

2.2.1 工艺研究通过文献研究，该方剂中饮片的有效成分均能溶于（热）水，且对湿、热较稳定，因此采用煎煮法提取（山茱萸除外）。煎煮前用冷水浸泡药材约 30 min，以促进药材的润湿、有效成分的溶解和浸出。其中，蒲黄为花粉类药材，体轻，煎煮时易飘浮在水面或成糊状，采用包煎法进行提取，装入蒲黄的纱布袋不宜包得过紧，以免影响有效成分的煎出[3]。

山茱萸是山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb,et Zucc.的干燥成熟果肉，为酸性中药[4]。有研究认为，主药黄芪避免与酸性药材共同提取，可使黄芪甲苷含量增加[5]，因此在制备时，将山茱萸直接粉碎入药。

2.2.2 提取工艺正交试验设计采用正交试验优化提取工艺。以提取次数（A）、提取时间（B）和加水倍数（C）作为考察因素，各因素取3个水平（表1）。以处方中主药黄芪的主要有效成分黄芪甲苷的含量和干膏得率作为评价指标，各以权重系数0.5进行综合评分。

表1 提取工艺影响因素

按处方量比例分别称取黄芪、地黄等5味药材，平行9份，按L9(34)正交试验表（表2）安排进行水煎煮提取，提取液滤过、浓缩、放置100 ml量瓶中，加水定容，作为测定黄芪甲苷含量及干膏得率的供试品溶液备用。

2.2.3 黄芪甲苷含量测定[6]

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2.2.3.1 色谱条件与系统适用性ZORBAX SB -C18色谱柱：（150 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流动相：乙腈-水（32∶68）；流速：1.0ml/min；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为 105 ℃，氮气流速为每分钟2.6 L。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。

2.2.3.2 对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.5 mg/ml的溶液，即得。

2.2.3.3 供试品溶液的制备精密吸取正交试验制得提取液10 ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 ml使其溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为12 cm），以水50 ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。制得的供试品溶液稳定，平均回收率为99.1%，RSD=2.32%。

2.2.3.4 测定分别精密吸取对照品溶液 10 μl、20 μl，供试品溶液20 μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，计算黄芪甲苷含量，结果见表2。

2.2.4 干膏得率测定按照干燥失重测定法，精密吸取正交试验所得提取液10 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中水浴蒸干。在干燥后移至干燥器中放冷，称定重量，计算干膏得率，结果见表2。

通过计算综合评分和方差方析等数据分析得出结果。表2数据显示：影响提取效果的主次因素为：提取次数（A）＞提取时间（B）＞加水倍数（C），最佳工艺为A3B3C3；表3数据表明：提取次数（A）对提取效果的差异有统计学意义（P＜0.05），而B、C因素对提取效果没有显著性影响。从经济角度出发，将优选出的最佳提取工艺调整确定为：A3B2C2，即加10倍水，煎煮3次，每次1.5小时。

2.2.5 最佳提取工艺的验证试验按10倍处方量称取药材，平行 3份，按优选出的最佳提取工艺进行试验，并测定黄芪甲苷含量和干膏得率，结果见表4。根据2015年版《中华人民共和国药典》（一部）“黄芪含量测定”项测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量，并计算黄芪甲苷的转移率。

验证试验中，黄芪甲苷含量和干膏得率RSD分别为 1.15%和 1.30%；药材中黄芪甲苷含量为0.1132%，转移率为80.57%。表明正交试验优选出的最佳提取工艺稳定、可行。

2.3 浓缩、干燥工艺研究根据设备条件和实际生产，采用减压浓缩和喷雾干燥制得干膏粉。分别考察提取液浓度和进、出风温度等主要影响因素，以制得的粉末数量和性状为判定标准优选出最佳工艺。

表2 优化提取工艺正交试验设计与结果

表3 提取工艺方差分析

表4 最佳提取工艺验证试验结果(%)

结果表明：提取液相对密度过大，会引起粉末含水量增高，粘壁明显，出粉量偏低等现象。若出风温度过高，对中药热不稳定成分有影响；温度过低，粉末含水量增高，出现粘壁现象。最终工艺确定为：将提取液减压浓缩至相对密度1.05～1.10（60 ℃），物料温度 50～60 ℃，进风温度 180 ℃，出风温度85 ℃，所得粉末量较多，且质地松脆，溶解性好。

2.4 制剂成型工艺研究

2.4.1 山茱萸粉碎入药因传统方法炮制的山萸肉质柔软[4]，不能直接进行粉碎，并兼顾颗粒剂生产对药粉细度的要求，将山茱萸在50 ℃条件下加热干燥2 h，然后粉碎成120目的细粉，与制得的提取液干膏粉充分混合，备用。

2.4.2 辅料的选择与用量结合本方临床服用剂量和药粉黏性等特点，分别选用中药颗粒剂常用辅料淀粉、乳糖和糊精，按药粉/辅料为1∶0.3的比例混合，以 75%乙醇为润湿剂制粒，以成型性、吸湿率和休止角为考察指标，选定成型辅料及其用量。结果见表5。

表5 辅料种类筛选

结果表明：以乳糖和糊精为辅料时，制得颗粒成型性好，吸湿性及休止角差异不大；淀粉作为辅料时，有粘连情况。综合考虑生产成本等因素，选择糊精作为稀释剂。分别比较药粉/辅料以 1∶0.1、1∶0.3和1∶0.5的比例混合、制粒，结果发现，随着辅料用量的增加，颗粒的成型性变好，吸湿性降低，流动性增强。考虑辅料用量不宜过多，确定混合药粉与辅料的比例为1∶0.5。

2.4.3 矫味剂的选择与用量为增加患者依从性，需加入矫味剂掩盖不良口味，分别加入药粉量1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%的蔗糖进行实验。结果表明：加入2.0%的蔗糖用量，已有良好的矫味效果。

2.4.4 成型工艺验证试验将制得的提取液干膏粉与山茱萸细粉混合后，加糊精（干膏粉与糊精比例为1∶0.5）和2.0%蔗糖，充分混匀。逐滴加入75%乙醇，制成软材，制粒。湿颗粒于60 ℃下干燥，依次将干颗粒过一号筛和五号筛整粒、去细粉，计算出平均收复率为89.7%，RSD为2.17%。

制得的颗粒剂干燥、均匀、色泽一致，无软化、结块等现象。照水分测定法测定，水分＜8.0%；取10 g颗粒剂，加热水200 ml，搅拌5 min，颗粒全部溶化，轻微浑浊。粒度、水分和溶化性检查均符合2015年版《中华人民共和国药典》通则0104颗粒剂的相关规定。结果表明：该制备工艺合理、可行。