牛磺酸抑制高脂合并高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化的病理学改变

海秀玲姜怡邓（通讯作者） 张效敏白晓林

（1宁夏医科大学总医院 宁夏 银川750004）（2宁夏医科大学 宁夏 银川750004）（3宁夏回族自治区人民医院 宁夏 银川750000）

高血脂是最早被公认、也是最重要的动脉粥样硬化危险因素，而近年来高同型半胱氨酸血症是新显现的动脉粥样硬化危险因素，同时血管拉伤后的新生内膜增生有助于动脉粥样硬化的形成[1]。动脉粥样硬化是心脑血管病的病理基础，因此，开展高同型半胱氨酸血症的发生机制及相关的防治研究是心脑血管疾病领域的重点关注问题。内源性抗氧化剂牛磺酸、谷胱甘肽、胱氨酸、金属硫蛋白等已经成为目前拮抗高同型半胱氨酸血症和动脉粥样硬化相关研究的热点。为了进一步探究血管拉伤与动脉粥样硬化的关系，我们以随机平行对照的方法，尝试采用球囊拉伤兔子腹主动脉后在高脂合并高同型半胱氨酸血症的情况下开展此项研究，相关内容具体报告如下。

1.资料与方法

表 三组兔子的血清生化指标检测结果数据对比

1.1 一般资料

选取30只健康雄性新西兰大耳白兔作为分析对象，体重在2.0～2.5kg之间，平均体重为（2.13±0.37）kg，由本市的实验动物中心提供。试剂L-蛋氨酸、牛磺酸、胆固醇由美国Sigma公司提供；同型半胱氨酸试剂盒由北京利德曼生化股份有限公司提供；氧化型低密度脂蛋白试剂盒由美国CUSABIO公司提供；球囊导管由美国Coridis公司提供；球囊扩张压力泵由美国Coridis公司提供。

1.2 方法

30只雄性新西兰大耳白兔先给予标准饲料适应性饲养一周后随即分为干预组、模型组和正常组三组，每组10只。正常组给予普通家兔饲养饲料；模型组给予2%的蛋氨酸、高脂饲料，再加上球囊拉伤腹主动脉；干预组给予2%的蛋氨酸、高脂饲料和1%的牛磺酸，再加上球囊拉伤腹主动脉。高脂饲料由0.5%胆固醇、8%猪油和5%的蛋黄混合普通饲料组成。各组兔分笼饲养，自由饮水，隔周称重，根据具体情况调整给药剂量，连续饲养12周[2]。

对三组的大耳白兔均进行球囊拉伤腹主动脉处理。首先经兔耳缘静脉缓慢注射浓度为3%的戊巴比妥钠溶液，溶液的注入量根据兔子的体重而定，标准为每千克30毫克。待药物起作用、兔子完全麻醉后进行输液器的连接。将250ml的生理盐水和1.0氨苄西林配制成输液，给予缓慢静脉滴注。在兔一侧下肢腹股沟一下区域备皮，采用碘伏消毒，铺洞巾，注射利多卡因使其局部麻醉。依次切开表皮、皮下组织，将一侧的股动脉充分暴露，在解剖时注意对近侧动脉分支的保护。子安动脉远端给予结扎，用利多卡因浸润股动脉，使其达到扩张的效果。在腹股沟韧带下2cm处用穿刺针穿刺股动脉，将Runfhrog导入，进入长度以20cm左右为宜[3]。向球囊内推注生理盐水，使球囊充盈，直到其压力达到8～10大气压，将球囊向回拉伸至髂骨动脉，反复回拉三次以造成腹主动脉内皮损伤。将球囊吸成负压后退出球囊，将股动脉夹闭后结扎。自兔耳缘静脉注射肝素钠200U抗凝。向切口内放入8万U庆大霉素防止切口感染。最后将手术切口进行缝合。

1.3 观察指标和相关处理方法

1.3.1 血清学检查 在研究开始后的第0周、第2周、第12周从兔的心脏采血3ml，3000r/min离心10min，取上层清液移动到EP管，放置入冰箱保存，温度为-80℃。甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、高同型半胱氨酸采取成批化验的方式，在常温融化一小时内进行检测。

1.3.2 腹主动脉标本处理 在对30只兔子进行为期12周的喂养后，自兔耳缘静脉注射空气处死兔子，对其的腹主动脉进行分离，分离后截取0.5cm的新鲜组织做冰冻切片油红O染色；截取0.5cm做透射电镜检查；截取1cm用浓度为10%的中性甲醛溶液固定，在24h后脱水，进行石蜡包埋，切片后做HE染色处理。剩余的组织用来做大体油红O染色[4]。

1.4 统计学分析

本次研究所得数据均采用SPSS13.0统计学软件进行统计学分析，计数资料用χ2检验，计量资料用t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2.结果

2.1 血清指标检测结果

模型组与正常组相比，血浆TC、TG、LDL-C、HDL-C、ox-LDL、Hcy的数值均有显著的升高（P＜0.05）；干预组与模型组相比，Hcy、HDL-C无显著差异（P＞0.05），但TG、TC、LDL-C、ox-LDL明显减低，差异有统计学意义（P＜0.05），具体数据见表。

2.2 各组兔子腹主动脉粥样斑块形成及病理切片改变结果

对照组兔子腹主动脉内膜表面光滑，平滑肌排列整齐，未着色；模型组兔子内膜明显增厚，可见脂肪沉积形成的气泡，可见弥漫性鲜红色斑块；干预组兔子内膜不平，中层细胞增生，可见隆起条纹状红色斑块。

2.3 各组兔子腹主动脉脂肪浸润结果

正常组兔子腹主动脉内皮平整，全层没有红油着色；模型组兔子腹主动脉内中层增厚，全层都有鲜红色米粥样脂滴，结构较为疏松。干预组兔子腹主动脉内中层增厚，在内膜层的细胞内可以见到细小密集的红色脂肪颗粒。

2.4 各组兔子腹主动脉弹力纤维改变结果

正常组兔子的弹力纤维呈现整齐的排列状；模型组兔子的内膜层弹力纤维出现增生情况，生成纤维帽，呈现紊乱的排序特点，且纤维帽以下的弹力纤维和内弹力板出现变形坏死的情况，甚至断裂或溶解。干预组兔子的腹主动脉内中层厚度介于正常组和模型组之间，其中层弹力纤维增生，呈现紊乱的排列方式，内弹力板为完整。

3.讨论

牛磺酸是一种含有磺酸基的自由氨基酸。近年来的研究发现，牛磺酸具有维持渗透压、清除自由基、抑制脂质过氧化等生物学效应。从本文的研究来看，干预组Hcy、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）与模型组无显著差异（P＞0.05），而甘油三酯（TG）等、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）有明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；干预组的粥样斑块面积、内皮厚度和血管细胞间粘附分子1阳性细胞百分比、弹力纤维密度与模型组相比明显减少，差异有统计学意（P＜0.05）。牛磺酸可以降低血脂和ox-LDL水平，但是并没有降低Hcy水平，可能是高Hcy激活了血管内皮氧化应激反应、促进了ox-LDL的生成[5]。牛磺酸拮抗Hcy诱导的氧化应激反应，减少ox-LDL的生成，最终减轻AS。另一方面，牛磺酸还有显著的降血脂作用，降低胆固醇，将胆固醇转化为胆汁酸。牛磺酸的药理机制之一为抗氧化应激反应。

综上所述，牛磺酸作为一种内源性的细胞防护物质，对血清Hcy的水平没有明显的降低作用，但是对抑制内皮增生和平滑肌增殖迁移、降低血脂水平、促进抗氧化应激反应等方面有着良好的作用，通过这些方面起到拮抗As的目的。根据相关研究结果，采用传统维生素等降低Hcy水平的药物联合牛磺酸来防治高同型半胱氨酸血症及相关的As病变会有较好的应用前景，值得进行深入研究。

【参考文献】

[1]王勇,袁吉祥,王磊.牛磺酸抑制高脂合并高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化的病理学改变[J].中国老年学,2013,33(24):6227-6229.

[2]袁吉祥,姚成立,马云海,等.牛磺酸抑制高脂合并高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化[J].中国动脉硬化杂志,2012,20(5):435-439.

[3]伊桐凝,张静生,于世家.冠心康颗粒对高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化作用及对血管炎性因子表达影响[J].辽宁中医药大学学报,2013(11):38-42.

[4]王晨晨.醋柳黄酮干预高同型半胱氨酸致兔动脉硬化的实验研究[D].山东大学,2014.

[5]王晓萍,周明旺,杜改焕,等.大剂量岷当归对高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化的影响[J].西部中医药,2017(7).