维药欧芹根治疗大鼠肝损伤有效成分的筛选

陈妍 高宏

【摘要】 目的 观察芹菜根8个流分对四氯化碳（CCl4）诱导急性肝损伤大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平的影响， 筛选出有效成分。方法 110只小鼠， 随机分为模型组、8个流分组、阳性对照组、空白对照组， 共11组， 每组10只。空白对照组和模型组预先灌胃生理盐水0.2 ml/10 g；芹菜根各流分组分别预先灌胃各提取部位50 mg/kg；阳性对照组预先灌胃150 mg/kg联苯双酯；以上各组均灌胃1次/d， 连续10 d， 所有动物第10天给药1 h后， 除空白对照组腹腔注射等量生理盐水外， 其他各组用四氯化碳（1 ml/kg）腹腔注射。小鼠20 h后眼球取血， 离心， 分离血清， 分别测定ALT、AST。

结果 模型组ALT和AST水平均明显高于空白对照组， 差异均具有统计学意义（P<0.01）；阳性对照组ALT和AST水平均明显低于模型组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）；5流分组ALT和AST水平均明显低于模型组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）；1流分组、3流分组、4流分组、6流分组、7流分组ALT和AST水平均明显低于模型组， 差异均具有统计学意义（P<0.01）。对5个流分进行成分测试， 发现其为总黄酮。结论 芹菜根治疗大鼠肝损伤有效成分为芹菜根总黄酮。

【关键词】 芹菜根；各流分；急性肝损伤；治疗作用

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.10.115

新疆维药芹菜根系伞形科植物欧芹Petroselinum crispum （Mill） Hill的干燥根， 目前在维医民间及临床广泛应用， 但由于实验基础不足， 限定了其推广使用。课题组前期对其作用效果进行了研究[1-4]， 疗效确切。但究竟是何种成分起的效果还不清楚。本实验建立四氯化碳诱导的急性肝损伤大鼠模型， 筛选其治疗肝损伤的有效成分， 为进一步研究该药奠定基础。

1 材料与方法

1. 1 实验动物 选用110只昆明小鼠（新疆医科大学动物中心）， 清洁级， 平均体重（20±2）g， 雌雄兼备， 适应性喂养1周。随机分为模型组、8个流分组、阳性对照组、空白对照组， 共11组， 每组10只。

1. 2 试药 维药芹菜根原材料（新疆维吾尔民族医院）；联苯双酯滴丸（浙江医药股份有限公司新昌制药厂）；四氯化碳（新疆医科大学分析测试中心， 分析纯）。

1. 3 方法

1. 3. 1 芹菜根各流分提取 将10 kg维药芹菜根用30%、50%、70%、95%乙醇回流提取2次， 1 h/次， 合并各乙醇液后减压浓缩， 得干浸膏2731 g。将所得干浸膏用水混悬， 依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取， 减压浓缩后冷冻干燥， 得石油醚干膏384 g、氯仿干膏454.32 g、乙酸乙酯干膏397.92 g、正丁醇干膏532.8 g备用。由于前期实验显示乙酸乙酯、正丁醇部位是其有效部位， 因此直接应用乙酸乙酯、正丁醇干膏。

取上述剩余乙酸乙酯部位浸膏约170 g， 正丁醇部位浸膏约420 g。

將所得乙酸乙酯部位浸膏170 g， 与硅胶拌样， 湿法装柱， 以石油醚-乙酸乙酯（10：0-0：1）进行梯度洗脱， 按等体积

（250 ml）收集流分， 根据薄层色谱结果合并相同流分， 得3个流分， 分别约为20、14、11 mg。

将所得正丁醇部位浸膏420 g， 用大孔吸附树脂柱色谱法分离， 用水-乙醇梯度洗脱， 按等体积（250 ml）收集流分， 得到10%、30%、50%、70%、95%组分， 根据薄层色谱结果合并相同流分， 得5个流分， 分别为30、21、17、12、10 mg。

1. 3. 2 实验动物干预方法 空白对照组和模型组预先灌胃生理盐水0.2 ml/10 g；芹菜根各流分组分别预先灌胃各提取部位50 mg/kg；阳性对照组预先灌胃150 mg/kg联苯双酯；以上各组均灌胃1次/d， 连续10 d， 所有动物第10天给药1 h后， 除空白对照组腹腔注射等量生理盐水外， 其他各组用四氯化碳（1 ml/kg）腹腔注射。小鼠20 h后眼球取血， 离心

（3000 r/min）， 分离血清， 分别测定ALT、AST。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对研究数据进行分析处理。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

模型组ALT和AST水平均明显高于空白对照组， 差异均具有统计学意义（P<0.01）；阳性对照组ALT和AST水平均明显低于模型组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）；5流分组ALT和AST水平均明显低于模型组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）；1流分组、3流分组、4流分组、6流分组、7流分组ALT和AST水平均明显低于模型组， 差异均具有统计学意义（P<0.01）。认为该药材肝损伤的保护作用是由此5种成分的共同作用。对5个流分进行上述成分预测， 发现1%三氯化铝试剂及氨熏检查呈阳性， 说明此5个流分为黄酮类化合物， 据此认为该药材护肝作用的有效成分为欧芹根总黄酮。见表1。

3 小结

欧芹根是一种具有民族区域特色的天然作物， 由于新疆独特的日照时间和地理环境， 使得该植物根系发达， 同时也有着独特的药用价值[5， 6]。欧芹根在维医临床已有多年历史， 但由于目前科研开发力度相对较弱， 一直没能被很好的应用推广。课题组为此对其展开了研究， 希望能找出该药作用的有效成分及相应机制， 进一步研发该药， 提高它的应用价值。

前期实验已经证实该药确实有治疗急性肝损伤的效果， 但起效成分目前仍不清楚， 因此本课题对其起效成分进行了筛选， 从实验结果来看， 目前认为起效成分应该是黄酮类物质群体。

参考文献

[1] 陈妍， 乌莉娅·沙依提， 马亮英. 新疆维药欧芹根总黄酮的乙醇提取工艺优选及其大孔树脂筛选. 中国实验方剂学杂志， 2014， 20（15）：19-21.

[2] 乌莉娅·沙依提， 陈妍. 芹菜根提取物对CCl4所致急性小鼠肝损伤的保护作用. 华西药学杂志， 2008， 23（4）：411-412.

[3] 陈妍， 刘军， 林伊梅， 等. 芹菜根提取物对D-氨基半乳糖所致急性肝损伤的保护作用研究. 中国药房， 2011（35）：3272-3274.

[4] 乌莉娅·沙依提， 陈妍， 耿萍， 等.维药芹菜根化学成分的研究.中药材， 2007（12）：1535-1536.

[5] 陈妍， 缪娟， 高宏. 欧芹根对非酒精性脂肪肝大鼠的有效成分及机制研究. 陕西医学杂志， 2016， 45（9）：1112-1113.

[6] 谢婧雯， 陈妍， 贾蔓菁， 等. 欧芹根总黄酮对非酒精性脂肪性肝病大鼠的治疗作用及机制研究. 中国药业， 2016， 25（20）：29- 32.

[收稿日期：2017-12-13]